Link tải luận văn miễn phí cho ae Kết nối
Thiết kế vector biểu hiện gen trong tế bào sinh dưỡng của vi khuẩn B. subtilis mà không cần sử dụng chất cảm ứng. Vector được thiết kế phải có đầy đủ các yếu tố sau: Promotor - mạnh, hoạt động liên tục của B. subtilis để gen được cài đặt có thể biểu hiện mà không cần sử dụng chất cảm ứng (inducer). Vị trí bám của ribosome - vị trí bám tốt của gen biểu hiện mạnh trong vi khuẩn B. subtilis. Vị trí cắt đa điểm - có vị trí cắt đa điểm của các enzyme giới hạn thương phẩm phổ biến. Vector thiết kế phải có đoạn tương đồng với nhiễm sắc thể của vi khuẩn B. subtilis để có thể xảy ra trao đổi kép giữa vector và nhiễm sắc thể của vi khuẩn. Có dấu chuẩn để sàng lọc vi sinh vật đã được biến nạp vector. Sau đó vector được thiết lập được sử dụng để biểu hiện gen đích.
Hướng dẫn 01 thạc sỹ với khóa luận "Biểu hiện gen mã hóa cho B-galactosidase trong vi khuẩn B. subtilis"
Hướng dẫn 02 cử nhân với tên các khóa luận " Thiết kế vector chứa promoter rrnO và vị trí bám ribosome của gen spoVG của B. subtilis và tách dòng gen mã hóa cho B-galactosidase trong vector này"
Công bố 02 bài báo trên tạp chí Khoa học và Công nghệ và Tạp chí Di truyền học và Ứng dụng
• VỊ trí cắt da diêm: có vị trí căt đa điêm của các enzyme giới hạn thương
phẩm phổ biến
• Vector thiêt kê phải có đoạn tươne đông với nhiễm săc thể của vi khuân B.
su b tiìis để cỏ thể xảy ra trao đổi chéo kép giữa vector và nhiễm sắc thể của
vi khuân
• Có dấu chuẩn để sàng lọc vi sinh vật đã đ ư ợ c biến nạp vector
b. Sau dó. vector được thiết lập được sử dụng để biếu hiện gen đích.
8. Các kết quả đạt đuọc
8.1. Kết quả về mặt khoa học
- Đã xác định thành công promoter biểu hiện liên tục không cần sử dụng chât cảm ứng
(rrnO P2) để thiết lập'trong vector biểu hiện
- Đã xây dựng thành công vector biểu hiện gen trong vi khuẩn tì. s u b t i l i s PY79 với các
đặc diêm câu trúc sau:
• Promoter: rrnO P2, một promoter mạnh, biểu hiện liên tục và điều khiển sinh tổng
hợp rRNA
• RBS là trình tự RBS đã biết của gen s p o V G , một gen hoạt động mạnh trong pha
log
• Chứa mã mở đầu ATG
• Chứa codon mã hóa cho His Tag sau mã mở đầu để dễ dàng tinh sạch protein đích
khi sử dụng cột His Tag và sau vị trí này là vị trí cắt đặc hiệu của thrombin
(Leucine-Valine-Proline-Argỉnine-Glycine-Serine) để có thể loại bỏ một cách
hiệu quả đuôi His khỏi protein đích • Gen chọn lọc c a t mã hóa cho chloramphenicol acetvltransíerase đê sàng lọc các
thể biến nạp
• Đoạn a m y E f và a m y E b tương đồng với a m y E trong nhiễm sắc thê của B. su b tilis
PY79 để tham gia vào quá trình trao đổi chéo kép
• MCS có các enzym e giới hạn phổ biến: N h e I, E c o R V , S a c ỉ , S a lI và H in á ỉỉỉ
s Sử dụng enzym e giới hạn N h e ỉ và £coR V kết hợp với S a c ỉ, S a il và H in ả ỉỉỉ
để cài nhập và biểu hiện gen đích trong B. s u b tilis PY79
- Biểu hiện thành công gen mã hóa cho p-galactosidase trong tế bào sinh dường của B.
su b tilis PY79 mà không cần sử dụng chất cảm ứng và hoạt độ này là tương đối cao.
8.2. Kết quả đào tạo
01 T h ạcsỹ:
Nguyễn Thị Thúy: Đã bảo vệ ngày 18 tháng 7 năm 2012
Tên khóa luận: “Biểu hiện gen mã hóa cho p-galactosidase trong vi khuẩn B. s u b tilis"
/file/d/1d0lary ... sp=sharing
