Link tải miễn phí Luận văn: Nghiên cứu hệ protein gan của bệnh ung thư gan người : Đề tài NCKH. KLEPT.09.02
Nhà xuất bản:ĐHKHTN
Đại học Quốc gia Hà Nội
Ngày:2012
Chủ đề:Protein
Bệnh
Ung thư gan
Di truyền học hóa sinh
Miêu tả:121 tr.
Thu thập mẫu máu, mô gan bình thường và mô gan ung thư. Sử dụng điện di hai chiều (2D-PAGE) để phân tách các protein và peptide từ dịch chiết mô gan bình thường. Sử dụng điện di hai chiều (2D-PAGE) để phân tách các protein và peptide từ dịch chiết mô gan ung thư. Phân tích bản gen điện di hai chiều và xác định biểu hiện protein khác biệt giữa mô gan bình thường và mô gan ung thư. Phân tích khối phổ protein gan bằng khối phổ MALDI-TÒ MS. Nhân dạng protein bằng phương pháp Western blot. Kết quả đạt được: Đã xác định được các protein biểu hiện khác biệt giữa mô gan của các bệnh nhân ung thư gan và mô gan của người bình thường. Đã xác định được các protein ty thể và protein microsome biểu hiện khác biệt giữa mô gan ung thư so với mô gan bình thường. Phân tích biểu hiện khác biệt của các protein huyết tương trên bản gel điện di 2 chiều đã xác định được 48 spot biểu hiện tăng và 44 spot biểu hiện giảm ở bản gel bản, 23 spot chỉ có ở bản gel bệnh, 48 spot không có ở bản gen bệnh. Đã nhận dạng được 17 protein có biểu hiện khác biệt giữa huyết tương bệnh nhân ung thư gan so với huyết tương người bình thường, trong đó có 16 protein đã được định danh và 1 protein giải thuyết. Đã xác định được các spot protein biểu hiện khác biệt giữa mô gan ung thư và mô gan ung thư và mô gan bình thường của từng bệnh nhân ung thư gan. Trong đó có 52 spot khác biệt chung ở các bệnh nhân gồm: 23 spot biểu hiện tăng, 18 spot biểu hiện giảm, 6 spot chỉ xuất hiện ở gel mô ung thư, 5 spot không xuất hiện ở bản gel mô ung thư. Đã nhận dạng được 52 spot tương ứng với 38 protein đã được định danh và 12 protein giả thuyết. Bằng kỹ thuyết thẩm tách miễn dịch Western blot hai chiều đã xác định được 4 protein có phản ứng miễn dịch là: protein ST7L biểu hiện tăng và protein MHC lớp 1, HSP27, aldehyde dehydrogenase biểu hiện giảm ở mô gan ung thư so với mô gan bình thường. Đã xây dựng thành công quy trình xử lý mẫu, phân tích và xác định các protein gan người bằng kỹ thuật proteomics, gồm các bước sau: i) Protein mô gan được chiết bằng đệm PBS 0,05M pH7,4 và đệm lysis (Urea 7M, Tris 30mM, CHAPS 4% w/v, DTT 65mM, PMSF 10mM); ii) làm sạch mẫu bằng tủa với aceton 100% theo tỷ lệ 1:4 ở -20C trong 2 giờ; protein được phân tách bằng điện di 2 chiều (chiều 1, điện di đẳng điện với thanh IPG strip pH4-7 vafpH-10; chiều 2, điện di SDS-PAGE với gel polyacrylamide 10%); iii) xác định các spot protein và phân tích bản gel điện di 2 chiều bằng phần mềm Phoretix; iv) cắt spot từ gel, tẩy mầu thuốc nhuộm, thủy phân protein bằng trypsin, thu các mảnh peptide bằng Ziptip C18; v) phân tích khối phổ MALDI-TOF sử dụng angiotensin II (Mw 1046,5423 Da) và Insulin B (Mw 3494,6513 Da) làm chuẩn; vi) nhận dạng protein theo phương pháp PMF sử dụng phần mềm Mascot và cơ sở dữ liệu NCBInr.
Ngôn ngữ:vie
Kiểu:Text
Định dạng:Text/pdf
Bảo hiểm:Thư viện nhà C1T - 144 Xuân Thủy – Cầu Giấy – Hà Nội
Quyền:Access limited to members
Link tải Free download cho anh em kết nối:Tài liệu đang trong kho của Ket-noi, ai cần thì trả lời để mods up lên cho
