Link tải luận văn miễn phí cho ae Kết nối

ĐẶT VẤN ĐỀ.........................................................................................................1
CHƯƠNG I: TỔNG QUAN ....................................................................................2
1.1. Vi khuẩn Bacillus subtilis natto ........................................................................2
1.1.1. Phân loại khoa học.................................................................................2
1.1.2. Nguồn gốc .............................................................................................2
1.1.3. Đặc điểm hình thái .................................................................................2
1.1.4. Đặc điểm sinh dưỡng.............................................................................3
1.1.5. Đặc điểm sinh lý ....................................................................................3
1.1.6. Sản phẩm trao đổi chất của B. subtilis natto..........................................3
1.2. Natto và Nattokinase.........................................................................................4
1.2.1. Natto.......................................................................................................4
1.2.2. Các enzym có khả năng tiêu huyết khối trước Nattokinase......................5
1.2.3. Nattokinase.............................................................................................6
1.3. Quá trình lên men sản xuất enzym ..................................................................10
1.3.1. Các phương pháp lên men sản xuất enzym từ vi sinh vật......................10
1.3.2. Thu nhận chế phẩm enzym....................................................................11
1.3.3. Các yếu tố ảnh hưởng tới sự tổng hợp enzym........................................11
1.4. Các nghiên cứu về ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả năng sinh
enzym Nattokinase của vi khuẩn ...........................................................................12
1.4.1. Ngoài nước...........................................................................................13
1.4.2. Trong nước...........................................................................................13
CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......................14
2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị sử dụng.................................................................14
2.1.1. Vi sinh vật sử dụng ...............................................................................14
2.1.2. Nguyên liệu, hóa chất sử dụng:.............................................................14
2.1.3. Các môi trường sử dụng:......................................................................14
2.1.4. Thiết bị .................................................................................................15
2.1.5. Dụng cụ................................................................................................16
2.2. Nội dung nghiên cứu ......................................................................................16
2.2.1. Phân lập vi khuẩn B. subtilis natto từ sản phẩm Natto và xác định enzym
do Bacillus subtilis natto tạo ra......................................................................16
2.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của điều kiện dinh dưỡng lên khả năng tạo enzym
của B. subtilis natto. .......................................................................................16
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU:..................................................................16
2.3.1. Phương pháp phân lập vi khuẩn từ sản phẩm Natto..............................16
2.3.2. Phương pháp nhuộm Ogiestka..............................................................17
2.3.3. Phương pháp giữ giống trên thạch nghiêng ..........................................17
2.3.4. Phương pháp nhân giống trong môi trường lỏng ..................................17
2.3.5. Phương pháp lên men chìm vi khuẩn ....................................................18
2.3.6. Phương pháp khảo sát ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng lên khả
năng sinh enzym.............................................................................................18
2.3.7. Phương pháp xác định sự có mặt của enzym trong sản phẩm Natto......19
2.3.8. Phương pháp xác định enzym trong dịch trong và trong sinh khối của
dịch lên men vi khuẩn Bacillus subtilis natto ..................................................19
2.3.9. Phương pháp thử hoạt tính protease:....................................................19
2.3.10. Phương pháp thử hoạt tính amylase....................................................20
2.3.11. Phương pháp thử hoạt tính cellulase: .................................................20
2.3.12. Phương pháp thử hoạt tính fibrinolytic (tiêu fibrin) ............................21
CHƯƠNG BA: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ...........................22
3.1. Phân lập vi khuẩn B. subtilis natto từ chế phẩm Natto và xác định enzym do vi
khuẩn sinh ra .........................................................................................................22
3.1.1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis natto từ chế phẩm Natto.................22
3.1.2. Xác định một số enzym do vi khuẩn sinh ra...........................................23
3.1.3. Xác định enzym trong sản phẩm Natto.................................................25
3.2. Khảo sát ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả năng sinh enzym của
vi khuẩn B. subtilis natto .......................................................................................26
3.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của nguồn hydratcarbon ......................................26
3.2.2. Lựa chọn nồng độ maltose thích hợp nhất ............................................30
3.2.3. Khảo sát ảnh hưởng của đậu tương và chất cảm ứng............................32
3.2.4. Khảo sát ảnh hưởng của một số muối vô cơ..........................................34
3.2.5. Xây dựng môi trường tổng hợp cho vi khuẩn Bacillus subtilis natto sinh
protease .........................................................................................................35
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ............................................................................................ 39
ĐẶT VẤN ĐỀ
Hiện nay, tỷ lệ mắc bệnh nghẽn động mạch do các cục máu đông như chứng
nhồi máu cơ tim hay nhồi máu não đang tăng cao ở Việt Nam cũng như trên thế
giới. Các loại thuốc đang dùng hiện nay như urokinase, streptokinase,... được sử
dụng chủ yếu trong cấp cứu tai biến và có nhiều tác dụng phụ. Nattokinase là enzym
có nguồn gốc từ Natto, một món ăn truyền thống của Nhật Bản.
Nattokinase là một enzym protease do vi khuẩn Bacillus subtilis natto sinh ra,
được sử dụng để phòng và phá các cục máu đông do có tác dụng tiêu fibrin mạnh,
an toàn khi sử dụng.
Trong điều kiện lên men chìm, vi khuẩn Bacillus subtilis natto còn có khả
năng sinh nhiều enzym ngoại bào như protease, amylase, cellulase... Việc thay đổi
môi trường dinh dưỡng có thể ảnh hưởng đến sự sinh enzym của vi khuẩn. Vì thế,
lựa chọn một môi trường tốt nhất cho enzym sinh lượng lớn protease và giảm bớt
các enzym khác đóng vai trò quan trọng trong việc tách chiết protease, sau đó là
Nattokinase.
Do đó, khóa luận “Khảo sát ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến khả
năng sinh enzym của vi khuẩn Bacillus subtilis natto” được thực hiện với hai mục
tiêu:
1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis natto từ sản phẩm Natto trên thị trường và
xác định một số enzym do vi khuẩn sinh ra.
2. Bước đầu lựa chọn môi trường nuôi cấy cho Bacillus subtilis natto sản xuất
protease tiêu fibrin.
CHƯƠNG I: TỔNG QUAN
1.1. Vi khuẩn Bacillus subtilis natto
B. subtilis natto (còn được gọi là Bacillus subtilis var. natto) là một chủng thuộc
loài Bacillus subtilis, được giáo sư Sawamura phân lập và định danh lần đầu tiên
vào năm 1905 [ 21].
1.1.1. Phân loại khoa học
B. subtilis natto là một vi khuẩn thật (Eurobacteria) thuộc:
Họ (Family): Bacillaceae
Chi (Genus): Bacillus
Loài (Species): Bacillus subtilis
Phân loài (Subspecies): Bacillus subtilis natto [32].
1.1.2. Nguồn gốc
B. subtilis natto được giáo sư Sawamura tìm thấy trong Natto, một món ăn truyền
thống có từ hàng ngàn năm trước của người Nhật. B. subtilis natto có nhiều trong
rơm rạ, cỏ khô... và phát triển tốt trong các loại đậu, đặc biệt là đậu tương; vi khuẩn
này cũng phát triển trên thực phẩm có nguồn gốc động vật và thực vật khác như: tảo
biển, cá, thịt, tôm, cua...[13], [22].
1.1.3. Đặc điểm hình thái
Hình 1.1: Tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis natto [27], [30]
B. subtilis natto là trực khuẩn hiếu khí, bắt màu Gram dương, nội bào tử hình que
có kích thước dưới 1μm. Các tế bào vi khuẩn đứng riêng rẽ hay nối với nhau thành


spM8O6TZm5Lm0z7

---