Link tải luận văn miễn phí cho ae Kết nối
Chương 1: TỔNG QUAN..………………………………………………………..2
1.1 Đại cương về kháng sinh …..………………………………………………2
1.1.1 Lược sử phát triển của kháng sinh ……………….…………………..2
1.1.2 Định nghĩa, phân loại kháng sinh ……………………………………2
1.1.3 Cơ chế tác dụng của kháng sinh …………………………………….4
1.1.4 Sơ đồ tổng quát quá trình sản xuất kháng sinh ……………….……...5
1.1.5 Các ứng dụng của kháng sinh ………………………………….……6
1.2 Đại cương về xạ khuẩn .…………………………………………….……...6
1.2.1 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn ………………………………………...7
1.2.2 Đặc điểm xạ khuẩn chi Streptomyces………………………………7
1.3 Tuyển chọn, cải tạo và bảo quản giống xạ khuẩn …………………….….9
1.3.1 Mục đích ……………………………………………………………..9
1.3.2 Chọn chủng có hoạt tính kháng sinh cao bằng SLNN ………….……9
1.3.3 Đột biến cải tạo giống …………………………….………………….9
1.3.4 Bảo quản giống xạ khuẩn …………………………….……………..10
1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh ……………………………………..11
1.4.1 Khái niệm lên men ………………………………………………….11
1.4.2 Các phương pháp lên men ………………………………………….11
1.4.3 Một số yếu tố ảnh hưởng tới quá trình lên men …………………….12
1.5 Chiết tách và tinh chế kháng sinh từ dịch lên men ...…………………..13
1.6 Phương pháp quang phổ xác định cấu trúc kháng sinh..………………14
1.6.1 Phổ tử ngoại – khả kiến..……………………………………………14
1.6.2 Phổ hồng ngoại………..…………………………………………….14
1.6.3 Khổi phổ (MS)………………………………………………………15
1.7 Một số kết quả nghiên cứu về kháng sinh …………………………….....15
1.7.1 Ảnh hưởng của mức độ oxy hòa tan trên sản xuất dạng viên
Rapamycin từ Streptomyces hygroscopicus ……………………....15
1.7.2 Tối ứu hóa chuyển đổi của Streptomyces sp. ATCC 39.366 sản xuất
Leptomycin bởi electroporation …………………………………….16
Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ……..………..17
2.1 Nguyên vật liệu và thiết bị ....…………………………………………….17
2.1.1 Nguyên vật liệu ………………………………………………………17
2.1.2 Máy móc và thiết bị ………………………………………………….19
2.2 Nội dung nghiên cứu …………………………………………..………….19
2.2.1 Chọn lọc, cải tạo giống ………………………………………………...19
2.2.2 Lên men, tách chiết kháng sinh ………………………………………..20
2.2.3 Sơ bộ xác định tính chất kháng sinh thu được …………………………20
2.3 Phương pháp thực nghiệm …………………………………………….….20
2.3.1 Nuôi cấy và giữ giống xạ khuẩn ……………………………………….20
2.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng sinh bằng phương pháp khuếch tán ………...20
2.3.3 Sàng lọc ngẫu nhiên ……………………………………………………21
2.3.4 Phương pháp đột biến ………………………………………………….22
2.3.5 Lên men chìm tổng hợp kháng sinh ……………………………………23
2.3.6 Tách các thành phần trong kháng sinh bằng sắc kí lớp mỏng …………24
2.3.7 Thu kháng sinh thô bằng cất quay chân không ………………………...25
2.3.8 Tinh chế kháng sinh thô bằng sắc kí cột ……………………………….25
2.3.9 Sợ bộ xác định kháng sinh thô bằng sắc kí cột ………………………...26
Chương 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT…………………….27
3.1 Kết quả sàng lọc ngẫu nhiên ……………………………………….…...27
3.2 Kết quả đột biến cải tạo giống lần 1 ………………………….………...27
3.3 Kết quả đột biến cải tạo giống lần 2 ………………………….………...28
3.4 Kết quả đột biến cải tạo giống lần 3 ……………………………………29
3.5 Kết quả lên men sinh tổng hợp kháng sinh ……………..…….……….30
3.6 Kết quả chọn chủng lên men ……………………………………….…...31
3.7 Kết quả sắc kí lớp mỏng chọn hệ dung môi ………………………..…32
3.8 Kết quả sắc kí cột …………………………………………….…………32
3.9 Kết quả đo phổ của kháng sinh tinh khiết …………………………….38
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
1 Kết luận ………………………………………………………………….…...40
2 Kiến nghị …………………………………………………..…………………40
ĐẶT VẤN ĐỀ
Tác dụng của kháng sinh được phát hiện năm 1928 và Penicillin được sử dụng
vào năm 1943, từ khi ra đời, kháng sinh đã mở ra một kỷ nguyên mới trong lịch sử
ngành y – dược. Nhờ có nhóm thuốc này mà con người đã dự phòng và điều trị
được các bệnh nhiệm khuẩn, nhiễm nấm ,ung thư … Không dừng lại ở đó, ngày nay
phạm vi điều trị của kháng sinh còn đang được mở rộng trong cả điều trị ung thư và
HIV/AIDS cũng cho nhiều kết quả khả quan. Tuy nhiên việc sử dụng kháng sinh
tràn lan và không đúng cách làm cho tình trạng kháng kháng sinh xuất hiện và ngày
càng trở nên nghiêm trọng. Vì vậy, việc tìm ra kháng sinh mới là điều cần thiết và
được cả thế giới quan tâm.
Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của sinh học hiện đại cùng sự hỗ trợ
của nhiều ngành khoa học khác giúp cho việc tìm kiếm và ứng dụng kháng sinh đạt
được nhiều thành tựu. Do đó, việc nghiên cứu để phát hiện ra kháng sinh mới có
nguồn gốc từ vi sinh vật vẫn là đề tài thu hút các nhà khoa học
Trong khoảng 15.000 chất kháng sinh được biết đến hiện nay thì có 55% có
nguồn gốc từ xạ khuẩn và 75% số đó thuộc chi Streptomyces. Đây là cơ sở để tôi
lựa chọn đề tài: “Góp phần nghiên cứu lên men tổng hợp kháng sinh nhờ
Streptomyces 173.113” làm khóa luận tốt nghiệp. Bởi vậy, trong khóa luận này tôi
mong muốn đạt được các mục tiêu sau đây:
- Chọn lọc, cải tạo giống để nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh
- Xác định điều kiện lên men, chiết tách kháng sinh tốt nhất.
- Sơ bộ xác định một số tính chất lý, hóa của kháng sinh thu được.
Chương 1 : TỔNG QUAN
1.1 Đại cương về kháng sinh
1.1.1 Lịch sử nghiên cứu kháng sinh
Tháng 10 – 1928 bác sỹ, nhà sinh vật học người Scotland – Alexander
Fleming lần đầu tiên phát hiện ra vòng vô khuẩn kháng sinh và kháng sinh
Penicillin được dùng điều trị và thử nghiệm đầu tiên vào những năm 1940. Ngay
sau đó, penillin trở thành một kháng sinh nổi tiếng vì đã cứu sống nhiều chiến binh
trong chiến tranh thế giới thứ II.
Từ những năm 1940 đến cuối những năm 1960, nhiều KS mới được xác định
hầu hết từ các xạ khuẩn, và đó là thời kỳ “ vàng son” của hóa liệu pháp KS( Hình
1.1)
Hình 1.1: Kháng sinh được phát hiện qua các năm (Hopwood, 2007)
Việc phát hiện, phát triển và sử dụng KS trong điều trị ở thế kỷ 20 đã làm
giảm đáng kể tỷ lệ chết do nhiễm khuẩn. Tuy nhiên từ những từ 1980 số kháng sinh
mới được đưa vào điều trị giảm hẳn do chi phí cho việc phát triển và thử nghiệm
thuốc mới ngày càng lớn. Bên cạnh đó, một hiện trang đáng báo động là ngày càng
tăng số lượng VSV gây bệnh kháng với các kháng sinh hiện có. Hiện nay, việc
kháng của VK phải được khắc phục bằng việc phát hiện ra thuốc mới


9Od4rqV246vPZ2t

---