41
PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

5.1 KẾT LUẬN
- DNA ly trích từ cơ tinh sạch và đạt năng suất cao hơn DNA ly trích từ lông.
- DNA ly trích từ gốc lông có độ tinh sạch cao hơn DNA ly trích từ ngọn lông.
- Qui trình PCR với chu trình nhiệt I (tăng thời gian của phản ứng) và Taq ABgene 1,5
UI có thể xác định giới tính thành công trên ba giống ta Vàng, lai Sind và sữa Hà Lan
với tỷ lệ thành công 100%.
- Mức độ làm khô DNA trong giai đoạn thu hồi DNA ảnh hưởng đến hiệu quả PCR
xác định giới tính.
- Sử dụng DNA ly trích từ lông trong PCR xác định giới tính cho hiệu quả thấp hơn so
với sử dụng DNA ly trích từ cơ.
5.2 ĐỀ NGHỊ
- Thiết lập qui trình ly trích DNA từ lông (nhất là ngọn lông) để được lượng DNA lớn
và tinh sạch.
- Theo dõi về thời gian và biểu hiện khô của DNA trong quá trình thu hồi DNA sau ly
trích.
- Áp dụng qui trình PCR xác định giới tính lên phôi bò của ba giống ta Vàng, lai Sind,
sữa Hà Lan.
42
TÀI LIỆU THAM KHẢO

* Tài liệu tiếng Việt

1. Huỳnh Thị Lệ Duyên, 2003. Ứng dụng kỹ thuật thụ tinh in vitro và dùng pcr
xác định giới tính phôi trên heo. Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp, Đại Học
Khoa Học Tự Nhiên, Thành Phố Hồ Chí Minh, Việt Nam.

2. Hồ Huỳnh Thùy Dương, 2002. Sinh Học Phân Tử (Khái Niệm - Phương Pháp -
ứng Dụng). Tái bản lần 2, NXB Giáo Dục, Thành Phố Hồ Chí Minh. Tr. 122 – tr. 129

*Tài liệu nước ngoài

10. AIP Congress, 2002. Semiconducting photoactive biopolymers. AIP Congress,
Queensland University, Australia. 20 pages.

43
11. Alves A. C. B., Hossepian de Lima M. F. V., Teixera M. C., Moreira-Filho A.
C., 2003. Use of primers derived from a new sequence of the bovine Y chromosome
for sexing Bos taurus and Bos indicus embryos. Theriogenology 59: 1415-1419.

12. Bondioli K. R., et al., 1989. The use of male – specific chromosomal DNA
fragments to determine the sex of bovine preimplantation embryos. Theriogenology
31: 95-104.

13. Bredbacka P., et al., 1994. Survival of biopsied and sexed bovine demi
embryos. Theriogenology 41: 1023-1031.

14. Burgoyne, 1998. The mammalian Y chromosome: a new perspective. BioEssay
20: 363-366.

15. Chen C. M., Hu C. L., Wang C. H., Hung C. M., Wu H. K., Choo K. B., and
Cheng W. T. K., 1999. Gender determination in single bovine blastomere by
polymerase chain reaction amplification of sex - specific polymorphic fragments in the
Amelogenin gene. Molecular reproduction and development 54: 209-214.

16. Chen C. Y., Huang L. S., Cheng J. B., Ding N. S., Zhou L. L., and Xiao H. X.,
2004. Establishing and optimizing the system for sex determination of bovine
preimplantation embryos. China Journal of Agricultural Biotechnology 1(1): 13-16.

17. Delbrigde L. M. and Marshall Graves A. J., 1999. Mammalian Y chromosome

laboratory manual). 3
rd
edition, Cold Spring Harbor laboratory press, New York,
USA. Vol.2: p. 8.23, Vol.3: p. A8.13.

26. Sauer S., Lechner D., Berlin K., Plancon C., Heuermann A., Lehrach H., and
Gut G. I., 2000. Full flexibility genotyping of single nucleotide polymorphisms by the
GOOD assay. Nucleic Acids Research Vol.28, No.23.

27. Schoder A., Miller R. J., Thomsen D. P., Roschlau K., Avery B., poulsen H. P.,
Schmitt M., and Swerin M., 1990. Sex determination of bovine embryos using the
polymerase chain reaction. Animal Biotechnology 1(2): 121-133.

28. Takara Bio Inc. CycleavePCR
TM
Bovine Sexing Kit. Ho Chi Minh city, Viet
Nam, June 2005.
<URL:http://www.takara-bio.co.jp>

29. Van Vliet A. R., Gibbins V. M. A., and Walton S. J., 1989. Livestock embryo
sexing: a review of current methods, with emphasis on Y- Specific DNA probes.
Theriogenology 32(3): 421-438. 45
PHỤ LỤC


Acid boric 44,5 mM
Na
2
EDTA 1,5 mM
+ Loading dye 6 X
Bromophenol blue 0,25 %
Sucrose 40 %
46
TE 1 X vừa đủ 100 %
+ Ladder
TAE 0,5 X (Tris acetate EDTA) 65 %
Ladder 100 bp gốc 15 %
Loading dye 6 X 20 %
+ Ethidium bromide 30 µl / 300 ml TBE 0,5 X
* Dụng cụ dùng trong đề tài
- Pipetman loại 100 - 1000 µl; 10 - 100 µl; 0,5 - 10 µl
- Đầu tip tương ứng với các loại pipetman
- Eppendorf loại 0,2 ml; 1,5 ml
- Các chai lọ đựng hoá chất, vật mẫu
- Kéo, kẹp, chày, cối, bao nilông…
* Thiết bị được sử dụng trong đề tài
- Máy vortex (IKA Works)
- Máy ly tâm (Sigma, Hettich)
- Máy PCR (Eppendorf)
- Bộ điện di (Biorad)
- Máy chụp gel (Biorad)
- Tủ ấm (Memmert)
- Tủ trữ mẫu, hoá chất (Reetech, Brandt, Sanyo)
- Microwave (Electrolux)
- Cân (explorer- OHAUS)