KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN
I- NGUYÊN TẮC KỸ THUẬT CHUYỂN GEN
II- BỘ CÔNG CỤ
III- CÁC BƯỚC CỦA KỸ THUẬT CHUYÊN GEN
IV- ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHUYỂN GEN
I-NGUYÊN TẮC
SV CHO gen
VECTOR
DNA TÁI TỔ HỢP
CHUYỂN VÀO TB ĐÍCH
BIỂU HIỆN GEN MONG MUỐN
SƠ ĐỒ CHUYỂN GEN
•
Một số thuật ngữ:
•
∙ DNA tái tổ hợp = DNA lai in vitro từ 2 DNA khác nhau (đoạn DNA người
“ghép” trên DNA virus hay plasmid vi khuẩn).
•
∙ Tạo dòng gene: quá trình cô lập và thu nhận nhiều bản sao của
một gene hay một đoạn gene.
•
∙ Dòng: một số lớn tế bào hay phân tử giống nhau sinh ra từ một
tế bào hay phân tử ban đầu.
•
∙ Ngân hàng (thư viện): bộ sưu tập của nhiều dòng khác nhau.
•
∙ cDNA: bản sao bổ sung của mRNA (không intron, nhờ
retrotranscriptase)
•
II. BỘ CÔNG CỤ
II.1- Các loại Enzyme: enzyme giới hạn, ligase,

strain, and type.
RESTRICTASE ENZYME
(Enzym cắt hạn chế)
MỘT SỐ CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN
- HpaI cắt thẳng
•
EcoRI cắt so le
- HindIII cắt so le
- PstI cắt so le

( restriction enzyme)
digested DNA
double stranded DNA
CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN
Cohesive ends (sticky ends) COHESIVE ENDS
EcoRI 5’…GAATTC…3’ 5’…G AATTC…3’
3’…CTTAAG…5’ 3’…CTTAA G…5’
PstI 5’…CTGCAG…3’ 5’…CTGCA G…3’
3’…GACGTC…5’ 3’…G ACGTC…5’
Blunt ends (flush ends) BLUNT ENDS
HaeIII 5’…GGCC…3’ 5’…GG CC…3’
3’…CCGG…5’ 3’…CC GG…5’
SẢN PHẨM CỦA CÁC ENZYME GIỚI HẠN
Cohesive ends
Enzym cắt tạo đầu dính
( restriction enzyme)
digested DNA
double stranded DNA
•
II.1.2- ENZYME LIGASE