Download Đề tài Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch đối với protein tái tổ hợp MBP-VT2eB trên thỏ miễn phí
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT . viii
DANH MỤC CÁC HÌNH .xi
DANH MỤC CÁC BẢNG . xii
DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ . xiii
DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ .xiv
PHẦN 1: MỞ ĐẦU.1
1.1. Mở đầu .1
1.2. Mục tiêu và yêu cầu .1
1.2.1. Mục tiêu.1
1.2.2. Yêu cầu.2
PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU.3
2.1. Kháng nguyên.3
2.2. Kháng thể.3
2.2.1. Chuỗi nhẹ (L) .4
2.2.2. Chuỗi nặng (H) .4
2.3. Đáp ứng miễn dịch .5
2.3.1. Đáp ứng miễn dịch khi tiếp xúc kháng nguyên lần đầu .6
2.3.2. Đáp ứng miễn dịch khi tiếp xúc lại kháng nguyên những lần tiếp theo.6
2.3.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch .7
2.4. Cơ chế miễn dịch dịch thể .10
2.5. Protein tái tổ hợp MBP-VT2eB .15
2.6. Phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch (Double diffusion in two
dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony).15
2.6.1. Sự kết hợp giữa kháng nguyên – kháng thể .15
2.6.2. Phản ứng kết tủa theo kỹ thuật khuếch tán kép trên thạch (Double
diffusion in two dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony) .17
vi
2.7. Phản ứng trung hoà độc tố VT2e trên môi trường tế bào vero.18
2.7.1. Sơ lược về tế bào vero .18
2.7.2. Độc tố VT2e .19
2.7.3. Nguyên tắc của phản ứng trung hoà độc tố
trên môi trường tế bào vero .20
PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH.21
3.1. Thời gian và địa điểm.21
3.2. Nội dung nghiên cứu .21
3.3. Vật liệu và hoá chất.21
3.3.1. Thú thí nghiệm .21
3.3.2. Vật liệu và hoá chất .21
3.3.3. Môi trường .22
3.3.4. Thiết bị và dụng cụ.22
3.4. Phương pháp nghiên cứu .22
3.4.1. Bố trí thí nghiệm .22
3.4.2. Chuẩn bị dịch tiêm .24
3.4.3. Thu nhận kháng huyết thanh .24
3.4.4. Xử lý kháng huyết thanh .24
3.4.4.1. Tách kháng thể với ammonium sulfate bão hoà 100%S . 24
3.4.4.2. Hòa tan kháng thể .25
3.5. Đánh giá .27
3.5.1. Định tính: phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch (kỹ thuật
Ouchterlony) .27
3.5.2. Định lượng: phản ứng trung hoà độc tố VT2e trên môi trường
tế bào vero . 28
3.5.2.1. Xác định liều TCID50 (Tissue Culture Infectious Dose 50) .28
3.5.2.2. Thử phản ứng trung hoà độc tố . 31
vii
3.6. Chỉ tiêu theo dõi . 33
3.7. Đánh giá kết quả và xử lý số liệu .33
PHẦN 4 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .34
4.1. Xác định kháng thể đặc hiệu với protein tái tổ hợp MBP-VT2eB bằng kỹ
thuật Ouchterlony. 34
4.1.1. Xác định quy trình thực hiện phản ứng .34
4.1.2. Đánh giá kết quả gây miễn dịch theo các quy trình
ngắn ngày và dài ngày .35
4.1.2.1. Quy trình ngắn ngày .35
4.1.2.2. Quy trình dài ngày .36
4.1.3. Nhận xét.38
4.2. Xác định liều TCID50 .41
4.3. Phản ứng trung hoà độc tố VT2e trên môi trường tế bào vero .42
4.3.1. Kiểm tra độ an toàn của kháng huyết thanh đối với tế bào vero .42
4.3.1.1. Kháng huyết thanh có bổ sung NaN3 và tế bào vero .43
4.3.1.2. Kháng huyết thanh có bổ sung NaN3 và có bất hoạt .43
4.3.1.3. Thí nghiệm đánh giá tác động của NaN3 . 44
4.3.1.4. Kháng huyết thanh không bổ sung NaN3 và có bất hoạt .44
4.3.2. Phản ứng trung hoà độc tố VT2e trên môi trường tế bào vero .46
4.3.2.1. Quy trình dài ngày .47
4.3.2.2. Quy trình ngắn ngày .50
PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .53
PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO .54
PHỤ LỤC .56
/tai-lieu/de-tai-ung-dung-tren-liketly-1662/
++ Ai muốn tải bản DOC Đầy Đủ thì Trả lời bài viết này, mình sẽ gửi Link download cho!Tóm tắt nội dung:
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
****0O0****
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
NGHIÊN CỨU ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI
PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB TRÊN THỎ
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khóa : 2001 – 2005
Sinh viên thực hiện : PHAN LÊ MAI
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8-2005
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
****0O0****
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
NGHIÊN CỨU ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI
PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB TRÊN THỎ
Giáo Viên Hướng Dẫn: Sinh Viên Thực Hiện:
TSKH NGUYỂN NGỌC HẢI PHAN LÊ MAI
PGS.TSKH NGUYỄN LÊ TRANG
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 8-2005
iii
LỜI CẢM ƠN
Con luôn nhớ ơn ba mẹ sinh thành, dưỡng dục và tạo mọi điều kiện cho con tự
hoàn thiện mình, Thank sự quan tâm, động vịên của mọi người trong gia đình.
Em xin chân thành Thank Ban Giám Hiệu trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ
Chí Minh, Ban Chủ nhiệm bộ môn Công Nghệ Sinh Học, cùng tất cả quý Thầy Cô đã
truyền đạt kiến thức cho em trong suốt quá trình học tại trường.
Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS khoa học Nguyễn Ngọc Hải, người
Thầy đã dạy bảo em rất nhiều và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khoá
luận.
Con xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS-TS khoa học Nguyễn Lê Trang,
người Thầy, người bác đã dạy bảo con rất nhiều và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp
con hoàn thành khoá luận.
Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thạc sỹ Nguyễn Kim Dung, người Thầy
đã dạy bảo em rất nhiều và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khoá luận.
Em xin chân thành Thank chị Nguyễn Thị Nguyệt Thu, chị Đỗ Thị Châm, chị
Lạc Ngọc Thêm, chị Võ Thị Mỹ Duyên, chị Dương Ngọc Diễm, chị Doãn Thị Sim,
Thầy Lưu Đức Lợi, anh Nguyễn Văn Thương đã tận tình giúp đỡ chỉ bảo em trong
suốt thời gian thực tập khoá luận tốt nghiệp.
Thank các bạn bè thân yêu của lớp DH01SH đã san sẻ cùng tui những vui
buồn trong thời gian học cũng như hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ tui trong thời gian thực tập.
iv
TÓM TẮT
PHAN LÊ MAI, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Tháng 8/2005.
“NGHIÊN CỨU ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-
VT2eB TRÊN THỎ”.
Hội đồng hướng dẫn:
TS khoa học Nguyễn Ngọc Hải
PGS-TS khoa học Nguyễn Lê Trang
Độc tố verotoxin VT2eB do E. coli tiết ra là tác nhân chính gây ra bệnh phù đầu
và tiêu chảy trên heo con, gây thiệt hại rất lớn cho ngành chăn nuôi heo của nước ta.
Do vậy các nghiên cứu nhằm tạo ra vaccin phòng bệnh phù đầu trên heo đang nhận
được sự quan tâm rất lớn, mở ra nhiều triển vọng cho ngành chăn nuôi heo nước ta.
Hiện nay, TS Nguyễn Ngọc Hải và các cộng sự đã thành công trong việc tạo ra được
chủng E. coli mang gen mã hoá cho protein tái tổ hợp MBP-VT2eB và tinh sạch được
protein này. Từ thực tế đó, chúng tui thực hiện đề tài: “Nghiên cứu đáp ứng miễn
dịch đối với protein tái tổ hợp MBP-VT2eB trên thỏ” nhằm xác định khả năng ứng
dụng protein này trong nghiên cứu bệnh phù đầu do E. coli gây ra trên heo .
Chúng tui sử dụng phản ứng kết tủa khuếch tán trên thạch (kỹ thuật
Ouchterlony) để đánh giá sự xuất hiện của kháng thể và phản ứng trung hoà độc tố
VT2e trên môi trường tế bào vero để đánh giá hiệu giá kháng thể trung hoà độc tố
verotoxin.
Những kết quả đạt được sau 7 tháng nghiên cứu:
- Cả hai quy trình gây miễn dịch dài ngày và ngắn ngày đều tạo kháng thể
kháng MBP-VT2eB có hiệu quả.
- Protein MBP-VT2eB có khả năng kích ứng đáp ứng miễn dịch trên thỏ
tạo kháng thể trung hoà độc tố VT2e trên môi trường tế bào vero.
- Kháng thể kháng protein tái tổ hợp MBP-VT2eB có khả năng trung hoà
độc tố VT2e (gây bệnh phù đầu trên heo).
v
MỤC LỤC
Trang
LỜI CẢM ƠN ............................................................................................................. iii
TÓM TẮT ....................................................................................................................iv
MỤC LỤC .....................................................................................................................v
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ..................................................................... viii
DANH MỤC CÁC HÌNH ..........................................................................................xi
DANH MỤC CÁC BẢNG ........................................................................................ xii
DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ...................................................................................... xiii
DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ ..................................................................................xiv
PHẦN 1: MỞ ĐẦU .......................................................................................................1
1.1. Mở đầu ..............................................................................................................1
1.2. Mục tiêu và yêu cầu .........................................................................................1
1.2.1. Mục tiêu.....................................................................................................1
1.2.2. Yêu cầu......................................................................................................2
PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................................3
2.1. Kháng nguyên...................................................................................................3
2.2. Kháng thể..........................................................................................................3
2.2.1. Chuỗi nhẹ (L) ............................................................................................4
2.2.2. Chuỗi nặng (H) ..........................................................................................4
2.3. Đáp ứng miễn dịch ...........................................................................................5
2.3.1. Đáp ứng miễn dịch khi tiếp xúc kháng nguyên lần đầu ............................6
2.3.2. Đáp ứng miễn dịch khi tiếp xúc lại kháng nguyên những lần tiếp theo....6
2.3.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch ..........................................7
2.4. Cơ chế miễn dịch dịch thể .............................................................................10
2.5. Protein tái tổ hợp MBP-VT2eB ....................................................................15
2.6. Phản ứng kết tủa khuếch tán kép trên thạch (Double diffusion in two
dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony)...................................................................15
2.6.1. Sự kết hợp giữa kháng nguyên – kháng thể ............................................15
2.6.2. Phản ứng kết tủa theo kỹ thuật khuếch tán kép trên thạch (Double
diffusion in two dimensions) (Kỹ thuật Ouchterlony) ......................................17
vi
2.7. Phản ứng trung hoà độc tố VT2e trên môi trường tế bào vero .................18
2.7.1. Sơ lược về tế bào vero .............................................................................18
2.7.2. Độc tố VT2e ............................................................................................19
2.7.3. Nguyên tắc của phản ứng trung hoà độc tố
trên môi trường tế bào vero ....................................................................20
PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH ...............................21
3.1. Thời gian và địa điểm .........................................
