BÁO CÁO THӴC TҰP
CÁC KӺ THUҰT CƠ BҦN TRONG CÔNG NGHӊ SINH
HӐC
Gi̫ng viên hưͣng d̳n: ThS: NguyӉn Thӏ Hӗng Loan
Sinh viên: Giang Huy DiӋm
I. Câu hӓi đҫu bài:
1. Tҥi sao phҧi tinh sҥch protein?
Trҧ lӡi :
Vì khi protein ӣ dҥng tinh sҥch sӁ có hoҥt tính mҥnh
hơn ӣ dҥng thô.Hơn nӳa, muӕn nghiên cӭu cҩu trúc cӫa
protein nào đó thì cҫn phҧi có dҥng tinh khiӃt cӫa nó.
2. Có nhӳng cách nào đӇ tinh sҥch protein
Trҧ lӡi : Có thӇ tinh sҥch bҵng đi Ӌn di không biӃn tính, các
phương pháp sҳc ký, ly tâm siêu tӕc, Nhưng điӋn di ít dùng
vì điӋn di chӍ tinh sҥch đưӧc 1 lưӧng nhӓ.
3. Sau khi tinh sҥch, làm thӃ nào đӇ thu nhұn protein mong
muӕn?
Trҧ lӡi :
Ta có thӇ dùng phương pháp điӋn di xem có lên băng
chuҭn không. Phương pháp khӕi phә sӁ giúp kiӇm tra có đoҥn
peptit mà ta đã xác đӏnh trưӟc hay không. Hay mӝt phương
pháp khác là miӉn dӏch huǤnh quang.
Lưu ý: dù dùng phương pháp nào thì trưӟc khi thu nhұn
protein đӅu phҧi kiӇm tr hoҥt tính protein xem có đúng protein
đó không?
II. Sҳc ký trao đәi ion - IEC
1. Giӟi thi Ӌu chung
- Tương tác ion là cơ sӣ cӫa viӋc tách và tinh chӃ protein
bҵng sҳc ký trao đәi ion (IEC)
- IEC hi Ӌn tҥi là kӻ thuұt tách protein phә biӃn nhҩt, đưӧc
dùng trong các quy trình tinh chӃ và tinh sҥch protein. Sҳc

3. Chuҭn bӏ gel
- Sӱ dөng gel DEAE-cellulose
- Gel đã đưӧc chuҭn bӏ trưӟc, đã loҥi bӓ các hҥt gel nhӓ, vӥ
trôi lơ lӱng.
4. Nhӗi cӝt gel
- Hòa gel tron g 5 lҫn thӇ tích đӋm chҥy, đӇ lҳng, hút (gҥn) bӓ
các hҥt gel nhӓ lơ lӱn g ӣ trên cho đӃn khi còn 1,5 thӇ tích.
- Rӱa và tráng sҥch cӝt, lҳp dây dүn ra vào đҫu dưӟi, gҳn cӝt
lên giá theo phương thҷng đӭng. Đánh dҩu vӏ trí 5ml bҵng
cách đә 5ml nưӟc vào rӗi bơm ra.
- Đóng phía dưӟi cӝt bҵng cách dӯng bơm. Khuҩy thұt nhҽ,
hoà đӅu cӕc gel rӗi dùng pipet 1000µl (đҫu côn cҳt to phҫn
đҫu) hút gel và thҧ tӯ tӯ vào cӝt (tránh tҥo bӑt khí)
- Khӣi đӝng bơm cho dӏch đӋm chҧy ra và gel lҳng xuӕn g
dưӟi tác dөng cӫa áp suҩt trong cӝt. TiӃp tөc thêm gel vào
thưӡng xuyên cho đӃn khi lưӧng gel lҳng đҥt thӇ tích 5ml.
- Khi gel đӃn vҥch 5ml, cho chҧy qua cӝt ít nhҩt 5ml đӋm vӟi
tӕc đӝ khoҧng 30-60ml/h. Đây là bưӟc cân bҵng cӝt.
5. Gҳn mүu lên cӝt
- Sau khi có nӗng đӝ protein ban đҫu tap pha loãng ra nӗng
đӝ 20 mg/ml (cҫn lҩy 400 mg) nê ta sӁ lҩy 20ml dung dӏch
mүu.
- Cho 20ml mүu này chҧy vào cӝt tӯ tӯ đӇ n gҩm xuӕng hӃt
- Rӱa protein khôn g gҳn trên cӝt bҵng đӋm A. Đo OD
280
<
0.1 thì dӯng lҥi.
- Thu lҥi 500µl đӇ điӋn di sҧn phҭm.
6. Thu mүu
- Rӱa chiӃt mүu bҵng gradient NaCl tӯ 0.05M đӃn 1M

- Gel cô trùng hӧp hoàn toàn thì sau 30-60 phút thì sӱ dөn g
đӇ đi Ӌn di.
2. ĐiӋn di
- TiӃn hành điӋn di: protein tinh sҥch, dӏch chiӃt thô, dӏch lên
cӝt, FT, rӱa 10ml đҫu, phân đoҥn 26, 40, 42, 60
- Trӝn 10µl mүu vӟi 30µlđӋm mүu (nӗng đӝ 4x). Đһt vào tӫ
ҩm 90ºC trong 10 phút. ĐiӋn di mүu 20µl và marker 10µl.
- ĐӋm chҥy đi Ӌn di là Tris-glycin, PH 8.8 chӭa SDS 1%.
Chҥy điӋn di vӟi điӋn thӃ әn đӏnh 150V.