KỸ THUẬT AFLP
( AMPLIFIED FRAGMENTS LENGTH POLYMORPHISM)
BỘ MÔN: KỸ THUẬT DI TRUYỀN
GVHD: TS.TRẦN THỊ DUNG
NHÓM THỰC HIỆN: MSSV
1. TƯỞNG THÙY NHI 61303689
2. NGUYỄN THỊ KIỀU OANH 61303701
3. ĐÀM THỊ HUYỀN 61303558
TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG
KHOA: KHOA HỌC ỨNG DỤNG
NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC
MỤC LỤC
I. GIỚI THIỆU
II. NGUYÊN TẮC
III. HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ
IV. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
V. ƯU, NHƯỢC ĐIỂM
VI. ỨNG DỤNG
VII. KẾT LUẬN
VIII. TÀI LIỆU THAM KHẢO
I. GIỚI THIỆU
Trong những năm 1990, công ty Keygene phát triển kỹ thuật AFLP ( Amplified
Fragments Length Polymorphism). AFLP là sự kết hợp giữa RFLP (Restriction
Fragments Length Polymorphism) và PCR( polymerase chain reaction) là sự đa hình
các đọan do cắt bởi RE và khuếch đại nhanh nhiều bản sao.
 AFLP là sự đa hình các đọan khuếch đại( DNA)
 AFLP là:
- Một trong những kỹ thuật in dấu DNA được phát triển bởi Vos và cộng sự
- Không cần biết trước trình tự DNA
- Ước lượng độ đa dạng của di truyền trong và giữa những quần thể với nhau.

- Các lọai tube eppendorf
- Cồi chày sứ
- Găng tay
IV. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1. Phân lập DNA
Phá vỡ màng tế bào: nghiền tế bào hoặc mô trong một hỗn hợp dung dịch
đệm chiết
- lọai bỏ các thành phần không mong muốn( thường là protein)
- tủa DNA => bảo quản ở -20C
2. Digestion và Ligation
Dùng hai enzyme giới hạn EcoRI có trình trình tự nhận biết 6 base, và MseI
( thường có 256 bases) có trình tự nhân biết 4 base, cắt khuôn thành những phân
đọan. Hai enzyme giới hạn này được sắp xếp lại nhờ kết hợp với hai hai adaptor có
cấu trúc làm cho dây DNA không trở lại hình dạng ban đầu.
MseI 5’TTAA3’
EcoRI 5’GAATTC3’
Nối EcoRI adaptor và MseI adaptor, là những oligonucleotide, sợi đôi gắn vào hai
đầu phân đọan DNA. Cấu trúc của hai adaptor:
EcoRI site:
5' CTCGTAGACTGCGTACC
5' AATTGGTACGCAGTCTAC
MseI site:
5' GACGATGAGTCCTGAG
Sau đây là mô hình của 2 hiện tượng trên
// GAATTC // TTAA //
DNA sequence with
EcoRI and MseI
// CTTAAG // AATT //
EcoRI MseI
recognition sequences

- Nhiệt độ đối với quá trình điện di: Quá trình điện di sẽ sinh ra năng lượng mà hầu hết
năng lượng này chuyển thành nhiệt năng,nhiệt độ thích hợp nhất cho sự phân tách cá
DNA trên gel PA biến tính trong khỏang 50
0
C. Nhiệt độ này được điều khiển bằng việc
tăng giảm các giá trị hiệu điện thế và công suất điện khi điện di.
Phân tích sản phẩm AFLP: Sau khi PCR một thể tích formamide dye được thêm vào
phản ứng, mẫu được biến tính bằng nhiệt ở 95
0
C trong 3 phút và đặt ngay vào đá. Sản
phẩm của AFLP được điện di trên gel polyaryamide biến tính(19 acryamide: 1
bisacrryamide; 7,5 Murea; 0,5 X TBEbuffer). Bản gel được cố định trong axit axetic
10%, nhuộm trong bạc nitrat 1%, hiện trong natricacbonat 2,5 % và cố định trong axetic
10%.
V. ƯU, NHƯỢC ĐIỂM
 Ưu điểm
- Nhanh, đơn giản và không phức tạp như RFLP, nhưng vẫn khảo sát được toàn
bộ gene
- Cần ít lượng DNA ban đầu
- Không cần biết trước trình tự ban đầu
- Khuếch đại có chọn lọc( phân tích đa dạng các quần thể có quan hệ gần nhau)
- Lượng mồi dung ít
- Là kỹ thuật in dấu DNA hiệu quả
- Cá thể in dấu DNA của bất kỳ loài nào
 Nhược điểm
- Cần kỹ thuật máy tính cao
- Lệ thuộc vào nhhiều thao tác ở những bước đầu để được phổ diện các phân
đoạn DNA lý tưởng
- AFLP là một marker trội nên khó phân biệt đồng hợp và dị hợp
- Trong xây dựng bản đồ di truyền, AFLPs thường tâp trung tại vùng centromeres

shtml
/>polymorphisms-61035/
/> /> /> />CÂU HỎI
1. AFLP là gì?
A. sự đa hình các đọan khuếch đại( DNA)
B. sự đa hình các đọan do cắt bởi RE
C. khuếch đại nhanh nhiều bản sao
2. Nguyên tắc của AFLP là gì?
A. Cắt bằng RE và nối bằng ligase => khuếch đại => điện di
B. Cắt bằng RE và nối bằng adaptor=> khuếch đại=> điện di
C. Phân lập DNA => cắt bằng RE và nối bằng adaptor=> khuếch đại =>
điện di và phân tích kết quả
D. Phân lập DNA => cắt bằng RE và nối bằng ligase => khuếch đại =>
điện di và phân tích kết quả
3. Trình tự đặc hiệu của enzyme EcoRI và MseI là bao nhiêu cặp nucleotide?
A. 4& 4
B. 4&6
C. 6&4
D. 6&6
4. Mồi chọn lọc gồm bao nhiêu phần?
A. 1
B. 2
C. 3
D. 4