ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

PHẠM THỊ NHÀN
ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR TRONG VIỆC
PHÁT HIỆN CÁC GEN ĐỘC LỰC CỦA E.COLI
GÂY TIÊU CHẢY Ở NGƯỜI
ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN
Người hướng dẫn khoa học: ThS. NGUYỄN PHÚ HÙNG

THÁI NGUYÊN - 2010
NỘI DUNG BÁO CÁO
1. Mở đầu
2. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
2. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
3. Kết quả và thảo luận
3. Kết quả và thảo luận
4. Kết luận và kiến nghị
4. Kết luận và kiến nghị
MỞ ĐẦU
MỞ ĐẦU
Tiêu chảy là một vấn đề sức khỏe toàn cầu. Một trong những
Tiêu chảy là một vấn đề sức khỏe toàn cầu. Một trong những
nguyên nhân phổ biến gây tiêu chảy ở trẻ em là do vi khuẩn
nguyên nhân phổ biến gây tiêu chảy ở trẻ em là do vi khuẩn
E.coli.
E.coli.
Việc xác định nhanh các nhóm
Việc xác định nhanh các nhóm
E.coli
E.coli

E.coli
gây tiêu chảy ở người”.
gây tiêu chảy ở người”.
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
Sử dụng kỹ thuật PCR với các cặp mồi đặc
hiệu nhằm phát hiện các gen độc lực của 5
nhóm E.coli gây bệnh tiêu chảy ở người, làm
tiền đề cho việc tạo bộ sinh phẩm chẩn đoán
các nhóm E.coli gây tiêu chảy.
MỞ ĐẦU
MỞ ĐẦU
NỘI
DUNG
NGHIÊN
CỨU
Tách DNA tổng số từ khuẩn lạc
E.coli
Khuếch đại các gen độc lực đặc
trưng của 5 nhóm E.coli
MỞ ĐẦU
MỞ ĐẦU
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

agarose
Các
chủng
E.coli
chuẩn
Quốc tế
Các
chủng
E.coli
chuẩn
Quốc tế
Nuôi cấy
qua đêm
trên
môi trường
MPA đặc,
thu
khuẩn lạc
Nuôi cấy
qua đêm
trên
môi trường
MPA đặc,
thu
khuẩn lạc
Tách
DNA
trực tiếp
từ
khuẩn lạc

298
vt1
VT1 - F
VT1 - R
GAAGAGTCCGTGGGATTACG
AGCGATGCAGCTATTAATAA
130
elt
LT - F
LT - R
TCTCTATGTGCATACGGAGC
CCATACTGATTGCCGCAAT
322
eae
eae - F
eae - R
CACACGAATAAACTGACTAAAATG
AAAAACGCTGACCCGCACCTAAAT
376
IpaH
IpaH - F
IpaH - R
GTTCCTTGACCGCCTTTCCGATACCC
GCCGGTCAGCCACCCTCTGAGAGTAC
620
EAST1
EA - F
EA - R
CTGGCGAAAGACTGTATCAT
CAATGTATAGAAATCCGCTGTT

2
94
0
C
52
0
C
72
0
C
1 phút
1 phút
1 phút
30
Biến tính
Gắn mồi
Tổng hợp chuỗi
3 72
0
C 10 phút 1 Tổng hợp chuỗi
4 4
0
C ∞ Ổn định mẫu
Bảng 2.3. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
1. KẾT QUẢ TÁCH DNA TRỰC TIẾP TỪ KHUẨN LẠC
DNA được tách chiết trực tiếp từ khuẩn lạc E.coli bằng
phương pháp của Cebula và cộng sự (1995) có cải tiến
cho phù hợp với điều kiện thí nghiệm.
Ưu điểm: - Tổng thời gian tách DNA là 25 phút.

298 bp
M 1 2 3 4 5 6 7
2.4. Gen độc lực elt
Hình 3.4. Kết quả khuếch đại gen elt
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III; 1. EPEC; 2. EHEC1;
3. EHEC2; 4. ETEC; 5. EAEA; 6. EIEC; 7. EC
322 bp
M 1 2 3 4 5 6 7
2.5. Gen độc lực IpaH
Hình 3.5. Kết quả khuếch đại gen IpaH
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III; 1. EPEC; 2.
EIEC;
3. EHEC1; 4. EHEC2; 5. ETEC; 6. EAEC; 7. EC
620 bp
M 1 2 3 4 5 6 7
2.6. Gen độc lực EAST1
Hình 3.6. Kết quả khuếch đại gen EAST1
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III
M. Marker ФX 174 cắt bằng Hae III; 1. EPEC; 2. EHEC1;
3. EHEC2;4. EIEC; 5. ETEC, 6. EAEC; 7. EC
630 bp
M 1 2 3 4 5 6 7
Bảng 3.1. Kết quả khuếch đại các gen độc lực của 5 nhóm E.coli
EPEC EHEC1 EHEC2 EAEC EIEC ETEC EC
eae + + + - - - -
vt1 - + - - - - -
vt2 - - + - - - -
IpaH - - - - + - -