•
I. Giới thiệu nguyên lý kỹ thuật PCR
•
II. Nguyên lí hoạt động của PCR
•
III. Một số ứng dụng của PCR trong y học
•
Giới thiêu các bước cơ bản của kỹ thuật PCR
trong việc lấy mẫu đem phân tích
•
1. Xác định quan hệ huyết thống
•
2. Xác định bệnh lao nhờ vsv
•
3. Xác định bệnh HIV, HBV, HCV, KST,
Dengue virus
•
4. Ứng dụng kỹ thuật PCR xác định thành phần ,
cơ cấu ký sinh trùng sốt rét

I.Giới thiệu nguyên lý kỹ thuật PCR
•
Dựa vào cơ chế tổng hợp gen đặc hiệu
trong tế bào, nhà hóa sinh người Mĩ
Karry Mullis đã phát minh ra kĩ thuật
tổng hợp gen trong ống nghiệm (PCR)
vào năm 1985. PCR là phương pháp in
vitro để tổng hợp một đoạn DNA đặc thù
nhờ công hiệu của 2 mồi oligonucleotide
gắn vào 2 sợi đôi của đoạn DNA đích với

- d NTPs (dATP, dCTP, dGTP,
dTTP).
•
- Primer ( oligonucleotide).
•
- PCR buffer.
2. Ba giai đoạn phản ứng PCR
thực hiện trên máy luân nhiệt
(Thermalcycles)
- Giai đoạn biến tính
(denaturation): 92 – 98 độ C
-
Giai đoạn bắt cặp (annealing)
45 thoi gian 20s-2phut
-
Giai đoạn kéo dài (elongaction)
nhiệt độ 68-72

Giới thiêu các bước cơ bản của kỹ thuật PCR trong việc lấy
mẫu đem phân tích
Các bệnh phẩm y học
↓
Ly trích pre - nucleic acide
↓
Ly trích acide nucleic tinh
khiết
↓
PCR ( RT - PCR)
↓
Phân tích phát hiện sản phẩm

trình tách chiết thích hợp
riêng. Đảm bảo chất lượng
và số lượng ADN từ
những lượng mẫu nhỏ.
Tách chiết ADN

•
3. Nhân ADN đặc hiệu: Đây
là khâu quan trọng nhất của
quy trình. Các hỗn hợp hoá
chất khác nhau và các chu
trình nhiệt khác nhau đã
được thử nghiệm cho từng
cặp mồi. Trên cơ sở đó, đã
tối ưu hoá thành phần của
từng hỗn hợp, từng chu trình
nhiệt cho từng cặp mồi, dựa
vào những hoá chất sẵn có
trên thị trường trong nước
Nhân ADN đặc hiệu