Download miễn phí Giáo trình Kỹ thuật điện di
MỤC LỤC
Tựa đề Trang
Chương 1: Kỹ thuật điện di Protein
1.1 Các dung dịch đệm 1
1.2 Thiết bị điện di 3
1.3 Quá trình điện di 3
1.4 Các loại gel Polyacrylamide 4
1.5 Điện di Protein 5
1.6 Phát hiện các protein trong gel SDS Polyacrylamide 7
1.7 Ghi nhận kết quả và sấy gel 8
1.8 Các ứng dụng của SDS-PAGE 8
1.9 Điện di gel đơn giản 11
1.10 Điện di gel gradient 11
1.11 Isoelectric focusing (IEF) 12
Chương 2: Kỹ thuật điện di Isoenzyme
2.1 Giới thiệu 18
2.2 Phương tiện & phương pháp 19
2.3 Phương pháp ước lượng tần số allele 24
2.4 Phương pháp ước lượng độ biến dị di truyền 32
2.5 Phương pháp tính độ phân hóa di truyền 34
Chương 3: Kỹ thuật điện di ADN
3.1 Vài quá trình ly trích ADN phổ biến 42
3.2 Chuẩn bị gel agarose 49
3.3 Định lượng ADN 50
3.4 Phương pháp minigel 50
3.5 Chụp hình kết quả điện di 50
3.6 Một số phương pháp PCR phổ biến 50
Chương 4: Phương pháp ước lượng tính đa hình bên trong và giữa các quần thể
4.1 Định nghĩa 59
4.2 Tính đa dạng và tính phân hóa ở mức độ allele62
4.3 Tính đa dạng và tính phân hóa ở mức độ nucleotide 64
CHƯƠNG 1
KỸ THUẬT ĐIỆN DI PROTEIN
1. Các dung dịch đệm
Sinh vật và các tế bào có thể chịu đựng được sự thay đổi về pH của môi trường bên
ngoài. Ngược lại, các quá trình trong tế bào lại mẫn cảm với sự thay đổi pH. và xảy ra
trong một môi trường mà pH được hiệu chỉnh cẩn thận. Tuy nhiên, có sự biến thiên pH
giữa các tế bào như ở bề mặt các tế bào. Các quá trình xảy ra giữa các tế bào chủ yếu là ở
pH trung tính. Tại pH trung tính thường các quá trình biến dưỡng xảy ra với tốc độ tối đa.
Tuy nhiên, các hydrolases cua lysosomes có hoạt tính cao nhất ở vùng pH 5 (tại pH nầy đa
số tế bào bị chết). Dịch tiêu hoá (gastric juice) tại dạ dày của động vật hữu nhũ có hoạt tính
tối đa với pH 1, tại pH này enzyme pepsin khởi động tiêu hoá tối đa protein.
Các hệ thống dung dịch đệm chủ yếu được phát hiện trong dịch tế bào là phosphate,
bicarbonate, amino acid, và protein.
Tính mẫn cảm các quá trình sinh học với pH có lẽ là do một vài nguyên nhân. Quá
trình có thể bị xúc tác do các ion hydrogen hay có thể ion hydrogen là chất phản ứng hay
là sản phẩm. Sự thay đổi pH làm thay đổi sự phân bố của một hợp chất hay ion xuyên qua
màng, có thể là do tính thấm (permeability) của màng tế bào. Giống như các cấu trúc sinh
học và các phân tử khác các màng tế bào có các nhóm có khả năng ion trạng thái chính xác
của ion hoá ảnh hưởng đến cấu hình phân tử nên ảnh hưởng đến hoạt tính sinh học. Điều
này đặc biệt đúng với trường hợp protein và enzyme. Vài protein tuỳ từng trường hợp vào sự thay đổi
nhẹ về pH của môi trường để hoàn thành chức năng sinh học của chúng.
Một dung dịch đệm chống lại sự thay đổi nồng độ ion hydrogen khi thêm acid hay chất
kiềm. Tính chống lại này được gọi là hoạt động đệm (buffer action). Tầm quan trọng của
hoạt động đệm gọi là khả năng đệm (β) và được ước lượng bằng lượng base mạnh cần có
để làm thay đổi một đơn vị:
β = db/ d(pH)
trong đó d(pH) là sự gia tăng pH do thêm db của base
Trong thực hành, các dung dịch đệm thường bao gồm hỗn hợp một acid hay base yếu và
muối của nó, thí dụ như acetic acid và sodium acetate (theo thuật ngữ của Bronsted và
Lowry, là hỗn hợp một acid yếu và base liên hợp của nó). Trong một dung dịch acid yếu
(RCOOH) và muối của nó (RCOO-
), ion hydrogen được thêm vào bị trung hoà do các
anion của muối, do đó nó có hoạt tính như là một base yếu, và ngược lại khi thêm các ion
hydrogen bị loại đi do trung hoà acid. Như vậy, khả năng đệm của một acid đặc biệt và
base liên hợp của nó sẽ tối đa khi nồng độ của chúng bằng nhau. Thí dụ khi pH=pKa của
acid. Khả năng đệm cũng tuỳ từng trường hợp vào nồng độ tổng số của acid và muối cũng như tỷ lệ
tương đối - nồng độ tổng cộng càng lớn thì khả năng đệm càng lớn. Nồng độ thông thường
của acid và muối trong các dung dịch đệm dao động khoảng 0,05 - 0,20M và các hỗn hợp
có khả năng đệm chấp nhận được trong khoảng pH = pKa ±1.
Tiêu chuẩn dung dịch đệm trong nghiên cứu sinh học có thể tổng kết như sau:
(1) có khả năng đệm đủ trong khoảng pH yêu cầu;
(2) có độ tinh khiết cao;
(3) hoà tan nước cao và không thấm với các màng sinh học;
(4) ổn định với enzyme và thuỷ phân
/file/d/0Bz7Zv9 ... sp=sharing
Giáo trình kỹ thuật điện
