Nghiên cu kh     ng viêm
ca Wedelolacton t cây nh nu tr
bnh nhim trùng nng và choáng nhim trùng
thông qua th th Dectin  1



i hc Khoa hc T nhiên, Khoa Sinh hc
LuChuyên ngành: Sinh hc thc nghim; Mã s: 60 42 30
ng dn: TS. Trnh Tng
o v: 2011

Abstract: Tng quan v vai trò ca d thng min di vi bo v 
th. Trình bày khái nim viêm, nhim trùng nng và choáng nhim trùng
  n dch bm sinh ca vt ch  ng quá trình nhim vi
khun. Tìm hiu cây nh ni và vai trò ca Wedelolactone trong qúa trình
chng viêm. Nghiên cu kh u hòa ca Wedelolactone trong quá
trình sn xut cytokine tin viêm và quá trình to phn ng oxy hóa trong
BMDM thông qua cu t c hiu ca Dectin-u qu u tr
ca Wedelolactone trong chut b nhim trùng nng và choáng nhim
trùng gây ra bt qu và tho lun: kh ng ca
t bào không b  ng b     
zymosan kích thích t bào BMDM sinh cytokine;
Keywords: Sinh hc thc nghim; u tr bnh; Sinh hc; Cây nh ni;
Bnh nhim trùng

Content
Nhim trùng nng và choáng nhim trùng là hi chi viêm h
thng do nhim trùng. Ngay c u tr t l t vong do nhim trùng nng và
choáng nhim trùng gn 40%. Tn sut ca nhim trùng nng và choáng nhim trùng gia
     i M          vong


1. VAI TRÒ CA H THNG MIN DI VI BO V 
Min dch bm sinh và min dng là hai long min dch bo v
quan tri vi ng vng. Min dng bm sinh có vai trò
o v i không có kh n dng lp li các mm
bnh và tr ng min dc hiu. Min dng nhn dng mm bnh
da vào chn lc mt vùng c th nh vô s các t bào lymphocyte mang rt nhiu th
th c hiu kháng nguyên mà cho phép h thng min dch có th nhn dng bt k
kháng nguyên bên ngoài xâm nh. H thng min dch bm sinh s dng vô
s các th th  nhn dp ng ti nhng mm bu
c. Quá trình nhn dng mm bnh ca các th th có mt vai trò vô cùng quan
trng trong quá trình truyn tín hiu ti nhng viêm, sn xut nhng t bào hiu
qu mi tham gia vào quá trình viêm cc b và bu nhng ca quá trình
min dng. Vô s các th th nhn dng mm bnh mu (PRR) bao gm th th
Toll-like (TLR), lectin, Dectin-1 và các th th scavenger quynh ti kh ng
xót ca vt ch bng quá trình nhn dng nhng mu phân t  trên mm b
khun, virut, nm có cu trúc gi th riêng bic gi là PAMP
(pathogenic associated molecules pattern). Quá trình nhn dng mm bnh bng quá
trình thc bào kích thích thc bào hóa, sinh ra cytokine, chemokine tin viêm, và thm
u ca min dng.
2. KHÁI NIM VIÊM
Viêm (inflammation) là mt phng sinh hc phc tp ca các mao mch vi
các v trí b 

  do b kích thích bi các mm bnh hay là nhng t
bào b hng. Quá trình này nhm bo v i b hay sa cha nhng v trí
kích thích b  li. 




  


 an, 





 rostaglandins (PG),
leukotrienes (LT), histamine, bradykinin, nhân 





-1. 















 , 




 . Quá trình tit ra ca các ch
dòng chy ca máu ti nhng vùng b xâm nhp và dn ti hing b , nóng. Mt
vài ch p dòng ch



 n ti b . 




s dn ti hiu qu ng thái mt cân b

 
 chi 
huyt (fibrin). Quá trình nghn mch, thiu máu cc b, các mô b t là hu
qu tip sau dn ti viêm nng và choáng do viêm, mt ch
vong [23].
3. NHIM TRÙNG NNG VÀ CHOÁNG NHIM TRÙNG
Nhim trùng có th t ph ca nhu kin lâm sàng gây
ra bng min dch ca bnh nhân ti quá trình nhi
bi viêm h th [6,7,8]. Các bnh nhân mc nhim trùng nng và
choáng nhim trùng trng min dch [7]


nhp thông qua vô s  hiu qu khác nhau. H thng min dch bm sinh có th
ng nht trong quá trình viêm nhim.
4.1. Các th th nhn dng mm bnh (PRRs)
Th th nhn dng mm bc chia làm
ba nhóm chính bt ngun t v trí trong t  th huyt thanh hoc phn dch
ca mô; màng t bào hay cytoplasm; hay nm trên màng hoc trong dch t c
xem là th th nhn dng mm bnh [19]. Mi nhóm th th PRR có các phi t c
hiu c có th nhn dng mt loi vi sinh vt nhnh [19]. Các th th
này có th nhn dng mm bnh mt cách trc tip (không thông qua opsonin) hoc gián
tip (thông qua oposonin) [19i vi In vivo, nhiu th th có th  nhn
dng vi khun ng   trí. Các phn có ngun gc t nm hay
mm lc nhn bng PRR ging  th TLR, th th mannose, b th 3 (CR3),
và dectin-1 [20]. Quá trình nhn dng mm bnh ca PRR kích thích quá trình sn xut
cytokine và chemokine dn ti quá trình hong và sinh ra các t bào khác tham gia
ti v  viêm nhim. T n ti nhng phn ng ca min
dng [12].
Fungi
TLR2
TLR6
Mannose
receptor
Dectin-1
CD11b
CD18

min dch bng vt có vú thông qua m i vi quá
trình nhim trùng [16]. Cht -glucan là mt thành phn quan trng trong v ca t bào
ca nm. T bào có th nhc thành phn này khi xâm nh vao s
hong ca th th Dectin-1. Th th này nm trên màng t bào có mn kiu C
lectin gn vi loi màng kiu II và có mn bên trong cytoplasma ca t bào cùng
vi mt phn hong da vào th th min dch tyrosine [8].
Dectin-c biu hin trên các dòng t i thc bào, t
bào trung tính và t bào tua [16n nay th th Dectin-c hiu rt rõ là
mt th th biu hin mnh nhi thc bào trong quá trình thc bào ca nc
bit th th này có th nhn dc hii vi -glucan hoc zymosan (mt cht có
cha mng ln -c tách chit t  ng
thi vi quá trình nhn dng vi sinh vt s sn xut ra các cytokine, chemokine,
quá trình thc bào hóa, git mm bnh bng sn xut ra các peptide kháng vi sinh vt,
phn ng oxy hóa (ROS) và RNS [16].
4.4. Th th Dectin-1 hong cùng v nhn dng các phi t có ngun
gc t vi sinh vt
Zymosan là mt hp ch  ng -glucan trong thành t bào ca
Saccharomyces cerevisiae chim phn chính [8,16]. Thành phn ca zymosan có -
glucan, mannan, và chitin. Thành phc nhn dng bng mt s th th chng
h-1, th th mannose, và CR3 [16]. Chc chng
minh là kích thích i thc bào và quá trình viêm c  in vivo và in vitro [16].
Dectin-1 hong cùng vi mt s  nhn dng ra nm [16]. Th th này
cùng vi TLR2, Dectin-1 nhn dng ra zymosan hoc nm Candida albicans truyn tín
hiu hòa hong ca yu t nhân kích hot t bào T (NFAT) và quá trình sn
xut interleukin (IL)-2, IL-10, và IL-12 p70 trong t bào dendritic [16, 26]. Dectin-1
      c bào, ho ng ca yu t t phân bào (ERK)1/2
(extracellular signal-regulated kinase), và quá trình sn xut các cytokine tin viêm cùng
v nhn dng ra Mycobacterium abscessus a, Dectin-1 tham gia
cùng vng min dch bm sinh ti nhn Mycobacterium
ulcerans  kích thích sinh ra gc oxy hóa (ROS) và sn xut ra chemokines và IL-37

Hình 2: -

cm min da, chúng có tig vô cùng to ln trong hong
kháng viêm và gim quá trình min dch không có l [9,17, 21].
Nhìn chung, quá trình viêm h thng mt ki c
a nhim trùng, ca triu chng viêm cng hô hp. Mt chc bit
t glucocorticoid, có th làm gi mc plasma ca
protein C, phospholipase A2, và loi b bt các t bào neutrophil trong các bnh nhân b
nhim trùng nng và choáng nhim trùng [22]. Nhng nghiên cu gng ch ra
cht này có th u hòa hu ht các cytokine tin viêm [11], bao gm c ch các
cytokine có vai trò quan trng trong min dch bm sinh và nhim trùng [22]. Hiu qu
cc chng minh trong các bnh nhim trùng nm vi
khun meningitis, pneumocystis pneumonia, typhoid fever, và nhng hp nhim
H5N1 [11].
4.6 ROS và p47phox
4.6.1.Gc oxy hóa ROS
ROS (reactive oxygen species) là mi din nh ca phn ng oxy hóa, bao
gm superoxide (O
2
-
) anion, hydrogen peroxide (H
2
O
2
), peroxyl (ROO
-
) radical, acid
(HOCl), ozone (O
3
c to ra thông qua mt lot các phn ng mà bu
Hình 3: Quá trình liên k to ra ROS (gc oxy hóa)
Ở trạng thái bất hoạt của tế bào, các prtotein thuộc cytoplasma bao gồm phức hệ p40phox,
p47phox, và p67phox, và guanosine diphosphate (GDP), không liên kết với dạng cytochrome
b
558
bao gồm gp91phox (Nox2) và protein p22phox. Khi ở trạng thái hoạt động, có sự thay đổi
của GDP đối với guanosine-5'-triphosphate (GTP) trên Ras được xem như là độc tố C3
botulinum dẫn tới kích hoạt. Lúc này, p47phox được phospho hóa và truyền tín hiệu tới và làm
cho phức hệ p67phox, p40phox được chuyển tới trên màng tế bào plasma. Quá trình phospho
hóa của p47phox sẽ làm thay đổi cấu trúc dẫn tới tương tác với p22phox. Quá trình chuyển tới
màng của phức hệ p67phox, p40phox sẽ làm cho p67phox tương tác với Nox2. Cuối cùng enzym
GTP trên Rac tương tác cùng với Nox2. Phức hệ được hoạt động và tạo ra superoxide (O2
-
)
bằng chuyển electron từ NADPH trong cytoplasma thành oxy hóa ra ngoài tế bào [14].
4.7. Vai trò ci thng viêm
i thc bào (macrophage) là nhng t bào bch cu, phân nhóm thc bào, có vai
trò quan trng trong h min dch c hi min dc hiu 
ng vng. Vai trò chính ca chúng là thc bào các thành phn cn bã ca
t bào và các tác nhân gây bnh. , 

 trò các t bào trình din




















 . 















(4) 
























in vitro






 in vitro,
 . 




, 
































 . 
s in vivo 






 .  : i) 




carrageenan, 










 . 









tro

 [15]; iii) 



 (chronic inflammation ) 









, 


















 










 .  , 





 c tiêm


 . 


  ,
 cytokine, chemokine tin viêm (TNF-a; IL-6, IL-8) và kháng viêm(IL-10),
interferon, quá trình phospho hóa các yu t t phân bào protein kinase (MAPKs), hay
phn ng ôxy hóa. 




















.
6. TÌNH HÌNH NGHIÊN CC
6.1.Tình hình nghiên cc
3 :
6.1.1.  (NSAID)










 , 

 .  








 (COX), 


 (PG) hromboxane (TX). 
























 . 




. Tuy nhiên, salysilate, 




























 .  


phospholipases A 2,  2
 . 

, 







 
, TX .   2





















 , 












 [31] 








.
6.1.3. 





8400 Da. 










 







[31].
6.2. Tình hình nghiên cc
Vic có khí hu nhii gió mùa, nóng và m nên kh c các
bnh nhim trùng nng và choáng khun do viêm là rn nay, viêm nng và
choáng do viêm vn là mt trong các nguyên nhân chính ca nhng ca t vong  các
bnh nhân cc bing hp này vn tip tng khp c
trên th gii và Vit Nam. 




, 


Vic có ngun tài nguyên sinh vt rc bit v
thc vt. Theo thng kê ca Vic lin c ta có gn 4000
loài thc vt, 22 loài tng vc dùng làm thuc  các m
 n nhiu loài to bing vt bi c dùng
làm thuc[2]. Các s liy ti to ln ca nguc liu Vit
Nam có th s dng trong các nghiên cu sàng l



 ng cht có hot tính
c hc quý hit chng viêm mi có hiu qu cao mà không gây
ra các phn ng ph. Tuy vy, có th nói các nghiên cu khoa hc mt cách có h thng
và chi tit v ng và s dng các cht hot tính sinh
hc t ngun tài nguyên sinh v phát trin thành các sn phm thuc mi,
phc v cho bo v c khe cng còn rt hn ch.
  c nghiên cu và ng dng các cht kháng viêm, có th nói rng
 thng và mô hình nghiên
cu hii v quá trình viêm và tác dng ca cht ch 
phát trin các sn phm thuc có th c trên th ng Vit Nam và quc
t. Các nghiên cu v c thc hin ch yu  Vic li
i hi hc Y Hà Ni và Hc vin Quân y 103. Các nghiên
cu  

 này mi ch dng  mc tc mô hình gây viêm thc nghim in









 rong
 [1]. 
Sargassum swartzii Ulva reticulata 










  [1]. 











, 

 

. 

, chúng ta còn thiu các
nghiên cu hii v

 t chun quc t hay nghiên c
ng ca cht nghiên cu lên các th th 
GC, m gii phóng các chc tit ra trong quá trình tin viêm và
viêm, các tín hic hic bi
sàng lc in vitro cho phép sàng lc nhanh, chính xác và hiu qu các ch


mi t các ngun nguyên liu khác nhau.
7. CÂY NH NI VÀ VAI TRÒ CA WEDELOLACTONE TRONG QUÁ
TRÌNH CHNG VIÊM
7.1. Cây nh ni
Thc vt là ngui vi nhng sn phc hc. Trên th gii, nhng
thc vc hc s dng truyn thn xut ra mt lot nhng hp
cht có rt nhiu ticha bnh. Vic hn xut
nhiu sn phm có ngun gc t thc vt mang nhc tính mi. Thc vt làm
thut phn quan tru tr mt s bnh thông qua nhc tính
quí giá [2]
Cây nh ni hay là cây c mc, hàn liên tho (danh pháp khoa hc: Eclipta alba
Hassk, hoc Eclipta prostrata L.) là mt loài cây thuc H Cúc.

kháng li n c ca rn [32]. Trong y hc truyn thng ca Trung Quc,
c s du tr nhng bnh v gan, các bnh viêm nhim virut
[30]a, Wedelolactone có kh m s phát trin ct
s nghiên c Wedelolactone có kh c ch s phát trin ca dòng t
n lit tuyn, tuyn yên, và hiu qu trên dòng t bào MDA-MB-23 (t bào
 [30]. Ngoài ra, mt tính ca Wedelolactone tách chit t cây nh
nc tin hành ti Phòng Thí nghim Trm Công ngh Enzym và Protein-
i hc Khoa hc T nhiên Hà Nng kt qu 
kh   chúng tôi tip tc nghiên ca v kh
a bnh nhim trùng nng và choáng nhim trùng ca hot cht tim
 th Dectin-1 và in vivo trên chut b
choáng nhim khun do tiêm zymosan mt cu t c hiu ca th th Dectin-1, góp
phn làm sáng t vai trò ca hot cht Wedelolactone trong u tr chng viêm.

: U

NG NGHIÊN CU
ng vt thí nghim
Chuc mua t Vin v sinh dch t Trng chut t 18-
20gram.
2.1.2. Hóa cht
c cung cp t Phòng Thí nghim Trm Công ngh Enzym
và Protein. Cu t c hiu ca Dectin-1: zymosan (sigma, M), ELISA kit IL-6, IL-10,
TNF, IL12p40 (BD Bioscience, Mm t bào sng cht (CellTiter 96® AQueous
One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, M). Laminarin (cht c ch Dectin-1),
Galactan (ch i ch     t mua ca hãng Sigma. Thuc
chng viêm Desamethasone (mt loi thuc s dng chng nhim trùng nng và choáng
nhim trùng, Sigma, M).
2.1.3. Thit b nghiên cu
T m CO2, T cc ELISA(bio-rad, M), T lnh: Kính

25
50
75
100

T L T
BÀO SNG
(%)
 30 (g/ml )
Hình 8: i vi t bào BMDM
BMDMs được nuôi với mật độ 1×10
5
tế bào/ giếng. Sau 3-4 ngày, các tế bào này được
sử lý cùng với Wedelolactone ở các nồng độ lần lượt là 10, 20, 30 μg/ml. Các tế bào sống đã
được đo bằng kit đếm tế bào. Dữ liệu chỉ ra sự sai số của ba thí nghiệm độc lập
  bào BMDM sinh cytokine
 nh vic kích thích quá trình sinh các cytokine tin viêm và kháng viêm ca
BMDM bng vi m là

Wedelolactone có kh m st, ch
ca nó trong quá trình truyn tín hiu viêm gây ra bi zymosan vc chng
 u qu c  vi
các n khác nhau ca Wedelolactone trong 45 phc  tip
vi zymosan sau 18 gi. T hình 10 cho thc ch quá trình sn
xut cytokine tin viêm TNF, IL-6, IL12p40. Trái li vi protein kháng viêm IL-10
thì Wedelolactone li không có kh c ch. T kt qu này cho thy vi n 0
5000
10000
15000
0 4 8 18 48 (h)
0
4000
8000
12000
4 8 18 48 (h)
0
2000
4000
8000
10000
0 4 8 18 48 (h)
0
5000
10000
15000
0 4 8 18 48 (h)

Hình 10: Wedelolactone c ch quá trình sinh cytokine tin viêm trong BMDM
c kích thích bng zymosan

  u hòa quá trình sinh cytokine tin viêm thông qua th th
Dectin-1
Th th Dectin-1 tham gia chính trong quá trình nhn dng min du
ca nm thông qua liên ku tra xem có
kh c ch quá trình sn xut i vi m
c  cùng vi mt s n n ca laminarin, mt cht có
kh  c ch quá trình ho ng ca th th Dectin-1 [27], hoc polysaccharide
galactan  các n gin sau 45 phút. Tip theo, các t c 
cùng vi Wedelolactone (hình 11A), Dex (hình 11c khi  vi zymosan. T bào 
cùng vi Laminarin xut hic li vi t bào không s lý
vi Laminarin  hình 11A. Các cytokine TNF--n theo
n ca Laminarin. Trái li, các t c s lý cùng vi polysaccharide galactan
vn cho kt qu gi c s lý vi Wedelolactone. Git qu
zymosan
0

W
zymosan
DM 2.5 5 10 20 µg/ml

zymosan
Hinh 11A, các kt qu t qu . Nhng kt qu này gi ý
rng th th Dectin-1 có m    n trong quá trình Wedelolactone và Dex
truyc ch zymosan kích thích sinh ra cytokine tin viêm trong BMDMs.

Hình 11: Wedolactone hong viêm kích thích bng
zymosan thông qua th th dectin-1.
5. Wedelolu khin quá trình sinh ROS do zymosan kích thích thông qua
th th Dectin-1
Zymosan có th kích thích quá trình sn xui thc bào [16]. Tuy
nhiên, vai trò ca Wedelolactone trong quá trình sinh ROS do zymonsan kích thích
trong BMDB v           c  cùng vi
Laminarin ho  c khi  vi Wedelolactone (20g/ml) hoc
 c  tip vi zymosan trong 30 phút. Các t bào
này tip t c  v         ra  Hình 12A,
o ra ROS, tuy nhiên quá trình sn xu c ch bi t
c  v i vi t bào c 

lam gal

M ĐC ĐC

W

Dexa

A B

0
4800
1200
2400
3600 0
8000
2000
4000

6000
IL-6

0
800

Wedelolactone 30 mg/ml. T kt qu này, cho thy Wedelolactone có th ci thic
  u tr chut b nhim trùng nng và choáng nhim khun ti n  20
mg/ml.
A B

Quá trình
sản xuất
ROS(O
2
-
)
Zym
W
lam+
W
gal+
W
Quá
trình
sản xuất
ROS(O
2
)
Zym
Dexa
lam+
Dexa
gal+
Dexa
***

xót(%)
W= 30 mg/ kg (n=10)
ĐC (n=10)
P=0.0123* 0
100 (h)
0
20
40
60
80
100
0
100 (h)
0
20

ĐC ĐC W
Zym
1500
500
1000
0
2000

Nồng độ
cytokine
(pg/ml)
IL-6
ĐC ĐC W 7. Wedel m kh n xut cytokine trong chut b nhim
trùng nng và choáng nhim trùng
Hình 14: c ch quá trình sinh cytokine tin viêm trong chut b
nhim trùng nng và choáng nhim trùng
8. Hiu qu ca Wedelolactone và Dexamethasone trong chut b nhim trùng
nng và choáng nhim trùng

2000

IL-6

0
20
40
60
80
100 (h)
0
20
40
60
80
100
Khả
năng
sống xót
(%)

W(20mg/kg)
Dex (1mg/kg)
ĐC






, 



, 
 (2010) 


















(Sapium sebiferum) t

(Clerodendrum Chinese var. simplex (Mold) SL Chen) 



 . Tạp
chí Dược học. 50(414): 20-23.