Các quy trình chu n đoán mi n d chẩ ễ ị
•
Phép th h p ph mi n d ch liên k t v i enzymử ấ ụ ễ ị ế ớ

Đ c dùng r t nhi u trong chu n đoán g m các b cượ ấ ề ẩ ồ ướ
Các ph ng pháp ươ
chu n đoán phân tẩ ử

G n m u đang c n xét nghi m ắ ẩ ầ ệ
vào phi n r nế ắ

B sung kháng th đ c hi u ch t ổ ể ặ ệ ấ
ch thỉ ị

Cho các cho các c ch t không ơ ấ
màu

Quan sát và đo các s n ph m có ả ẩ
màu
Kháng th đ n dòngể ơ

T o và ch n l c t bào laiạ ọ ọ ế

Tiêm cho chu t kháng nguyênộ

Ki m traể

Gi t chu tế ộ

L y lách r a s chấ ử ạ


N u có th phát hi n đ c có th đ c dùng nh m t quy t ế ể ệ ượ ể ượ ư ộ ế
đ nh chu n đoán xác đ nhị ẩ ị
*
Lai nucleotit là c s c a các th nghi m nhanh và kh thiơ ở ủ ử ệ ả
*
S đ nh sau:ơ ồ ư

G n ADN s i đ n lên màng đắ ợ ơ ở

Thêm ADN s i đ n đã đánh d uợ ơ ấ

R a giá đử ỡ

Xác đ nh trình t lai t o thành gi a m u dò và AND đíchị ự ạ ữ ẫ
•
M u dò laiẫ

M u dò lai ph i có tính ẫ ả
đ c hi u caoặ ệ

M u dò có th là AND ẫ ể
hay ARN dài (h n 100 ơ
nucleotit) hay ng n (nh ắ ỏ
h n 50 nucleotit)ơ

Trình t làm m u dò hi u ự ẫ ệ
qu có th đ c phân ả ể ượ
l p b ng nhi u cáchậ ằ ề

Th c hi n tr c ti p trên ự ệ ự ế

*
Nh ng có th i gian s ng ng n, nguy hi m và đòi h i có phòng ư ờ ố ắ ễ ỏ
thí nghi m thi t k đ c bi tệ ế ế ặ ệ
*
Tín hi u đ c phát hi n h u h t trong các h th ng b ng ệ ượ ệ ầ ế ệ ố ằ
liên k t các nucleotit đánh d u biotin vào m u dò ADn theo ế ấ ẫ
quy trình

M u dò đánh d u biotin ẫ ấ
lai v i AND đích ớ

Avidin, protein lòng
tr ng tr ng gà ho c ắ ứ ặ
strepvidin, ch t t ng ấ ươ
t avidin vi khu n đ c ự ẩ ượ
thêm vào

Enzym đánh d u biotin ấ
đ c cho vào ượ

C ch t có màu ho c ơ ấ ặ
hóa phát quang đ c ượ
thêm vào

*
u đi m:Ư ể

B n ít nh t m t năm nhi t m t năm nhi t ề ấ ộ ở ệ ộ ở ệ
đ phòng ộ


u đi m:Ư ể

M i oligonucleotit dùng chung cho m i lo i th c ồ ọ ạ ự
v tậ

Không c n ngân hàng b gen, phóng x , chuy n ầ ộ ạ ể
souther hay lai AND

Quy trình có th th c hi n t đ ngể ự ệ ự ộ


th c m bi n sinh h c vi ể ả ế ọ
khu nẩ
•
C n có ph ng pháp ầ ươ
xác đ nh d dàng, ị ễ
nhanh chóng v i l ng ớ ượ
l n h p ch t có ti m ớ ợ ấ ề
năng đ c gây nhi m ộ ễ
đ c môi tr ng.ộ ườ
•
Khi v trí nhi m b n ị ễ ẩ
đ c xác đ nh, chúng ượ ị
s đ c khoanh vùng.ẽ ượ
•
M t s k thu t phân ộ ố ỹ ậ
tích có đ tinh vi cao ộ
đ c s d ng đ phát ượ ử ụ ể
hi n và đánh giá s ệ ố
l ng ch t ôi nhi m.ượ ấ ễ

m i oligonucleotit ồ
bên c ch v trí Cvnạ ị I
đ c thêm vào, m t ượ ộ
s l ng nh ADN ố ượ ỏ
m u có th đ c ẫ ể ượ
nhân b i b ng PCRộ ằ
*
Quy trình PCR/OLA
*
Không ph i m i bi t đ i di truy n đ u sinh ra các gen khi m ả ọ ế ổ ề ề ế
khuy t nh h ng đ n s t n t i c a v trí nh n bi t ế ả ưở ế ự ồ ạ ủ ị ậ ế
enđonucleaza gi i h n=> C n có ph ng pháp khác đ phát hi n ớ ạ ầ ươ ể ệ
ra các bi n đ i nucleotitế ổ
*
Đ xác đ nh li u s g n n i có xu t hi n gi a hai m u ch th , ể ị ệ ự ắ ố ấ ệ ữ ẫ ỉ ị
m u dò X đ c đánh d u 5’ b ng biotin và m u dò Y đ c ẫ ượ ấ ở ằ ẫ ượ
đánh d u đ u 3’ b ng đigoxigeninấ ầ ằ
*
V i hai c p m u dò có th xác đ nh ch c ch n b n ch t di ớ ặ ẫ ể ị ắ ắ ả ấ
truy n c a cá th c n ki m tra b t kỳề ủ ề ầ ể ấ
*
H PCR/OLA nhanh, nh y, đ c hi u cao. Có th th c hi n t ệ ạ ặ ệ ể ự ệ ự
đ ng v i s tr giúp c a các robot các b c c a quy trình th ộ ớ ự ợ ủ ở ướ ủ ử
nghi m. Trong đi u ki n nh v y có th th c hi n đ c 1.200 ệ ề ệ ư ậ ể ự ệ ượ
ph n ng g n n i m i ngàyả ứ ắ ố ỗ