GIẢI TRÌNH TỰ GEN HP1125 MÃ HOÁ CHO
PROTEIN MÀNG NGOÀI CỦA Helicobacter pylori

Nguyễn Thị Nguyệt & Nguyễn Thị Hồng Hạnh
Viện Công nghệ Sinh Học

MỞ ĐẦU

Vi khuẩn Gram âm Helicobacter pylori là căn nguyên của
các bệnh về tiêu hoá như viêm và loét dạ dày... Vi khuẩn
cũng gắn liền với nguy cơ ung thư dạ dày ở những người
bệnh nhiễm khuẩn [1, 2]. Ở trên thế giới cũng như ở Việt
Nam, có khoảng hơn nửa dân số bị nhiễm Helicobacter
pylori.

Hiện nay, trong quá trình điều trị, bên cạnh một số biệt
dược, các bác sĩ thường chỉ định sử dùng kháng sinh cho
các bệnh nhân. Việc chữa chạy thường gặp thất bại, do rất
nhanh chóng, Helicobacter pylori trở nên kháng thuốc [3].
Hai trong những giải pháp tốt nhất để chống vi khuẩn dạ
dày mà các nhà khoa học hướng tới là i) tìm ra vacin để
phòng ngừa bệnh ii) sử dụng các thuốc ức chế sự phát triển
của vi khuẩn trong dạ dày của bệnh nhân.
Để có thể là vaccine chống nhiểm khuẩn Helicobacter
pylori, một protein được sử dụng làm kháng nguyên cần
phải có thành phần hoá học và cấu trúc ổn định. Các
protein màng ngoài của vi khuẩn dường như đáp ứng được
yêu cầu như trên.

Helicobacter pylori có thể có đến 32 protein màng ngoài
[4]. Các protein có thể đóng các vai trò khác nhau, trong đó


Khuếch đại gen HP1125 bằng phương pháp PCR: 10 ng
ADN tách chiết từ sinh thiết được dùng làm khuôn mẫu cho
phản ứng PCR trong một thể tích 25 l. Các mồi thiết kế có
trình tự như sau:

F1: ACTTGAATTCCTTGATCGGATTCTTTGATTTC.
F2:
TTTAGGATCCCCATGGATAATAAGACTGTGGCC.

Chương trình nhiệt của phản ứng PCR: 94
o
C : 1 phút., 55
o
C
: 50 s., 72
o
C: 50 s Chu kỳ 35 vòng. Sản phẩm PCR được
kiểm tra trên gel agarose 1. 2%. Đệm 1 x TAE được sử
dụng trong điện di.

Giải trình tự gel: Sản phảm PCR của gen HP1125 được
phân giải trên gel agarose 0.8% và được làm sạch khỏi các
mồi còn thừa sau phản ứng bằng Gene clean Kit. ADN với
nồng độ 10 ng/l được sử dụng để giải trình tự tại ADN
Core, trường đại học tổng hợp Michigan (Mỹ) theo phương
pháp giải trình của Hultman (6a)

Phân tích trình tự đoạn ADN: Chương trình Blast trên trang
Web được sử dụng để phân tích trình tự cũng như protein