BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ĐẶC TRƯNG CÁ THỂ
NGƯỜI QUA LOCUT D5S818 BẰNG KỸ THUẬT
PCR

Nghiêm Xuân Dũng, Trần Minh Đôn, Lương Thị Yến,
Lê Bích Trâm
Cục kỹ thuật Hoá Sinh và Tài liệu TCVI BCA
Ngô Thị Kim, Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết
Viện Công nghệ Sinh học

MỞ ĐẦU

Sự ra đời của sinh học phân tử và công nghệ gen đã giúp
cho khoa học hình sự, lập chứng minh thư ADN, truy tìm
thủ phạm được xác định nhanh chóng và chính xác.
Trong hệ gen của con người tồn tại các locut di truyền có
chứa các đoạn ADN lặp lại (4 đôi bazơ) khác nhau và được
phát hiện bằng phương pháp PCR / 1,2,3,4 /. Trên thế giới
đã có hơn 12 locut được sử dụng rộng rãi trong y học hình
sự / 5,6 /. Ở Việt Nam, Viện Khoa học hình sự đã áp dụng
kỹ thuật phân tử trong điều tra phá án , song các kỹ thuật
trên được sử dụng toàn bộ chương trình và kit của nuớc
ngoài. Để đáp ứng yêu cầu áp dụng kỹ thuật phân tích
ADN của người Việt Nam đề tài sẽ dần khảo sát các đoạn
gen phù hợp. Trong bài này , chúng tôi xin được phép trình
bày phương pháp khảo sát và đặc trưng cá thể người qua
locut D5S818.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.

1. Đối tượng


Quá trình từ b đến d được lặp lại 30 chu kỳ.
e.72
o
C - 6 phút
g.4
o
C - 10 phút

Sản phẩm của phản ứng PCR được kiểm tra bằng phương
pháp điện di trên gel agaroza 2 % và gel polyacrylamid 5 %
có biến tính. Kích thước của sản phẩm khuếch đại sẽ gồm 8
alen theo thứ tự tương ứng :

- Alen số 7 có kích thước là 141 bp
- Alen số 8 - 145 bp
- Alen số 9 - 149 bp
- Alen số 10 - 153 bp
- Alen số 11 - 157 bp
- Alen số 12 - 161 bp
- Alen số 13 - 165 bp
- Alen số 14 - 169 bp

Mỗi một mẫu máu chỉ cho kết quả 2 alen ( dị hợp tử ) hoặc
1 alen ( đồng hợp tử ) trong số các alen kể trên.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

1. Xây dựng phương pháp


- Alen 4 tương ứng với alen số 12
- Alen 5 tương ứng với alen số 13
- Alen 6 tương ứng với alen số 14

Với hỗn hợp mẫu ( Mix 2 ) có chứa 7 alen ta có thể khảo
sát được toàn bộ số mẫu cần phân tích. Hỗn hợp mẫu này
sẽ được nâng cấp thành thang alen chuẩn cho locut D5
S818. Điều này sẽ được báo cáo trong các nghiên cứu tiếp
theo của chúng tôi.

2. Đặc trưng cá thể.

Bước đầu khảo sát 56 mẫu máu người Việt Nam cho thấy
lucus D5 S818 có 8 alen khác nhau bao gồm các alen số 7,
8, 9, 10, 11, 12, 13, 14. Riêng alen số 8 chưa phát hiện
được, có thể do số lượng mẫu phân tích chưa đủ nhiều,
hoặc có thể có sự thiếu hụt alen này ở người Việt Nam. Tần
số các alen xuất hiện ở người Việt Nam qua phân tích là:

Alen số 7 chiếm 1,78 %
Alen số 8 chiếm 0 %
Alen số 9 chiếm 1,46 %
Alen số 10 chiếm 28,57 %
Alen số 11 chiếm 25,00 %
Alen số 12 chiếm 20,53 %
Alen số 13 chiếm 17,85 %
Alen số 14 chiếm 1,78 %

3. Kiểu gen.


TÀI LIỆU THAM KHẢO

1. Edwards A. et al , 1991
ADN typing with trimeric and tetrameric tandem repeats :
polymorphic loci, detection systems, and population
genetic. In : The Second International Symposium on
Human Identification 1991, Promega Corporation, 31
2. Edwards A. et al , 1991
ADN typing and genetic mapping with trimeric and
tetrameric tandem repeats. Am. J.
Hum. Genet. 49, 746
3. Ausubel, F. M. et al , 1993
Unit 15 : the polymerase chain reaction. In : Current
Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing
Associates and Wiley-Interscience, NY
4. Warn, D. et al , 1991
Tetranucleotide repeat polymorphism at the human beta-
actin related pseudogene 2
( ACTBP2) detected using the polymerase chain reaction.
Nucl. Acids Res. 19, 6980
5. Fueredi, S. et al , 1996
Hungarian population data on six STR Loci-
HUMVWFA31, HUMTHO1, HUMCSF1PO, HUMFES-
FPS, HUMTPOX, and HUMPRTB-derived using multiplex
PCR amplification and manual typing. Int. J. Leg. Med.
109, 100
6. Santos, S. M. et al, 1996
Portuguese population data on six short tandem repeat loci
– CSF1PO, TPOX, THO1, D3S1358, vWA and FGA.
Forensic Sci. Int. 83, 229.

allele of this locut with its exact size by commercial DNA
marker. The number of nucleotide A and T is much higher
than G and C in alleles of this locut, this will greatly affect
to the movement of DNA bands in polyacrylamide gel:
usually fragment with higher AT will move slower than
fragment which is rich of GC. To solve the problem in
alleles detection, we use the method of mixing PCR
products.
This paper showed the results of allelic frequencies and
genotypes which regulated by D5 S818 locut among 56
collected samples. DNA was isolated from peripheral white
blood cells by phenol/chloroform extraction/ ethanol
precipitation method. The repeated 4 nucleotides ADN
sequence was found using PCR technique. PCR was
performed for 30 cycles at the temperatures of 95
o
C-5 min.;
94
o
C-45s.; 57
o
C-75s. and 72
o
C-1min. DNA fragments from
PCR products were separated by 5% denaturing
polyacrylamide gel and visualized by silver staining.

Based on sample to sample method, an allelic marker
containing 8 alleles of D5S818 which has 4 nucleotides
positions in deferent was constructed. A highest frequency