120

Phần 5
Kết luận và đề nghị

I.Kết luận
Từ các kết quả thu được, chúng tôi rút ra một số kết luận như sau:
1- Phương pháp và kỹ thuật định danh ổn định, có độ chính xác cao, đồng thời
phù hợp với phương pháp phân tích microsatellite của Ngân hàng cacao thế giới
ICGD, mở ra một triển vọng cho các ứng dụng tiếp theo của microsatellite. Lợi thế
của phương pháp định danh trong đề tài là có thể áp dụng từ giai đoạn cây con còn
đang được ươm trong nhà lưới, chưa có hoa hay quả để giúp cho việc nhận diện
bằng kiểu hình, do vậy sẽ giúp loại bỏ kịp thời những cây con bị nhầm lẫn giống
trước khi đem ra vườn trồng.
2- Xây dựng thành công dữ liệu microsatellite cho 21 dòng cacao bằng việc
sử dụng 5 cặp primer được đánh dấu huỳnh quang là mTcCIR7, mTcCIR8,
mTcCIR11, mTcCIR15 và mTcCIR18. Dữ liệu này sẽ giúp cho việc định danh
nhanh (từ 3-5 ngày) và chính xác 21 dòng cacao khảo sát.
3- Tối ưu hóa phương pháp nhờ thực hiện thành công qui trình phản ứng
multiplex PCR với 3 primer có cùng nhiệt độ bắt cặp 46
o
C và được đánh dấu màu
huỳnh quang khác nhau là: mTcCIR8, mTcCIR11, mTcCIR15. Do đó giúp tăng cao
tính kinh tế nhờ giảm thời gian và chi phí thực hiện xuống ba lần.
4- Thiết lập được mối quan hệ di truyền giữa 21 dòng cacao khảo sát trên
biểu đồ không gian 3 chiều, dựa vào kết quả phân tích microsatellite với 5 cặp
primer có số al tương ứng như sau: mTcCIR7 có 3 loại al, mTcCIR8 có 8 loại al,
mTcCIR11 có 8 loại al, mTcCIR15 có 8 loại al và mTcCIR18 có 7 loại al. Biểu đồ
thể hiện rõ mối quan hệ di truyền gần hoặc xa giữa các quần thể và giữa các cá thể

(như lai cá thể CT1 với CT8 trong quần thể CT).

122

Phần 6
Tài liệu tham khảo

TIẾNG VIỆT
1. Bùi Chí Bửu – Nguyễn Thị Lang-1999. Di truyền phân tử - Những nguyên
tắc căn bản trong chọn giống cây trồng- Nhà xuất bản Nông nghiệp Thành
Phố Hồ Chí Minh, 278 trang.
2. Hoàng Thị Liễu- 2004 - Phân tích mức độ đa dạng di truyền và xây dựng
phương pháp nhận diện một số giống cacao trên cơ sở kỹ thật PCR. Luận
văn tốt nghiệp Kỹ sư Nông học, Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí
Minh, Việt Nam,63 trang.
3. Hồ Huỳnh Thùy Dương- 1997- Sinh học phân tử - Nhà xuất bản giáo dục,
301 trang.
4. Nhữ Văn Thụ- 2002- Microsatellite- Viện chăn nuôi tổng hợp- Sáng chế
mới, công nghệ mới.
TIẾNG NƯỚC NGOÀI
1. A.McLauchlan, R.J.Henry, P.G.Isaac, K.J.Edwards- 2001- Microsatellite

cocoa field genebanks.
12. Lagercrantz, U., Ellegren, H. and Andersson, L 1993- The abundance of
various polymorphic microsatellite motifs differs between plants and
vertebrates- Nucleic Acids Research 21, 1111.
13. Love, J.M., Knight, A.M., McAleer, M.A. and Todd, J.A 1990- Towards
construction of a high-resolution map of the mouse genome using PCR-
analysed microsatellites- Nucleic Acids Research 21, 1111–1115.
14. Lanaud, C., Risterucci, A.M., Pieretti, I., Falque, M., Bouet, A. and Lagoda,
P.J.L 1999- Isolation and characterisation of microsatellites in Theobroma
cacao L- Molecular Ecology 8: pp 2141 - 2152
15. M.Rossetto- Centre for plant conservation genetics, Southern Cross
University, Australia- 2001- Sourcing of SSR markers from related plant
species- Chapter14.
16. Ma, Z.Q., Roder, M. and Sorrells, M.E 1996- Frequencies and sequence
characteristics of di-, tri-, and tetra-nucleotide microsatellites in wheat-
Genome 39, 123–30. 124

17. Morgante M. and Olivieri A.M. (1993) PCR- Amplified microsatellites as
markers in plant genetics- Plant Journal 3: pp 175 - 182
18. Murray, V., Monchawin, C. and England, P.R 1993- he determination of
the sequences in the shadow bands of dinucleotide repeat PCR- Nucleic
Acids Research 21, 2395–2398.
19. N.Harker- Centre for plant conservation genetics, Southern Cross University,
Australia- 2001- Collection, reporting and storage of microsatellite genotype
data- Chapter17.
20. Powell, W., Morgante, M., Andre, C., Hanafey, M., Vogel, J., Tingey, S. and
Rafalski, A 1996- The comparison of RFLP, RAPD, AFLP and SSR

28. Wu, K.S. and Tanksley, S.D-1993- Abundance, polymorphism and genetic
mapping of microsatellites in ric- Molecular and General Genetics 241,
225– 235.
29. Xiao, J., Li, J., Yuan, L., McCouch, S.R. and Tanksley, S.D-1996- Genetic
diversity and its relationship to hybrid performance and heterosis in rice as
revealed by PCR-based markers- Theoretical and Applied Genetics 92,
637–643.
30. Yang, G.P., Saghai-Maroof, M.A., Xu, C.G., Zhang, Q. and Biyashev, R.M.
-1994- Comparative analysis of microsatellite DNA polymorphisms in
landraces and cultivars in rice- Molecular and General Genetics 245, 187–
194.
TRANG WEB
1.
Microsatellite DNA methodology
2.
Microsatellite help file.
3. />opGen6/PopGen6.html
Population Genetics VI: Introduction to microsatellites: from theory to lab.
Practice
4.
A Monte Carlo analysis on the number of microsatellite markers to estimate
genetic diversity variability in cacao (Theobroma cacao L.)
5. 126

General notes on primer design in PCR
6. http:// www.icgd.rdg.ac.uk
International Cocoa Germplasm Database