LỜI CẢM ƠN
Tất cả những gì con có được ngày hôm nay và sẽ có được trong tương lai
đều bắt nguồn từ công lao sinh thành, dưỡng dục của cha mẹ - những người chỉ
vì con mà đã phải chịu bao vất vả, gian nan. Con xin thành kính ghi khắc trong
lòng con trọn đời công ơn cha mẹ để trên đường đời con luôn sống tốt và có ý
nghĩa hơn như những gì mà cha mẹ đã dạy dỗ. Anh hai cũng gửi lời cảm ơn đến
hai em gái đã lo lắng và giúp đỡ anh trong suốt quá trình làm đề tài tốt nghiệp.
Em xin chân thành gửi lòng biết ơn đến:

Ban Giám Hiệu Trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM.
 Ban Giám Đốc Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hoá – Sinh, Trường
Đại học Nông Lâm Tp. HCM.
 Ban Chủ nhiệm và các Thầy – Cô thuộc Bộ môn Công Nghệ Sinh Học,
cô Trần Thị Dung – Chủ nhiệm Bộ môn Công Nghệ Sinh học và cô Trần Thị
Kim Linh – Chủ nhiệm lớp Công Nghệ Sinh Học 27.
Đã chăm lo và tạo mọi điều kiện tốt nhất cho em trong suốt quá trình học
tập tại Trường và trong suốt thời gian hoàn thành đề tài.
Em xin trân trọng biết ơn đến:
 Thầy TS. Bùi Minh Trí – giáo viên hướng dẫn đề tài.

Các anh chị: chị Liên, chị Huệ, chị Hưng, anh Thế, chị Phương, chị
Hà, anh Toàn ở TT Phân tích Thí nghiệm Hoá Sinh – Trường ĐH Nông Lâm
Tp.HCM.
Đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện khoá
luận tốt nghiệp.
iii
Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến những người nông dân tại tỉnh Bà Rịa –
Vũng Tàu đã tận tình giúp đỡ tôi trong thời gian thực hiện điều tra và thu thập
mẫu lá điều.
Cuối cùng tôi xin chân thành cảm ơn những người bạn cùng lớp với tôi đã
giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập tại Trường và thời gian làm đề tài tốt

base pairs và 1050 base pairs có thể là những band đặc trưng của cây điều khi thực hiện
phản ứng PCR – RAPD sử dụng primer 11. Những band đa hình có độ dài khoảng 600
v
base pairs, 700 base pairs, 750 base pairs, 1.200 base pairs, 1.400 base pairs, 1.600 base
pairs, 1.900 base pairs và 2.300 base pairs, trong đó band 600 base pairs và 700 base
pairs khá đặc biệt, có thể được nghiên cứu thêm và sử dụng như là chỉ thị phân tử của
những tính trạng đáng quan tâm. Qua kỹ thuật RAPD đánh giá tính đa dạng di truyền
của quần thể điều tại tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu ở mức trung bình.
 Xây dựng quy trình tiến hành kỹ thuật AFLP trên DNA lá điều, chúng tôi
chọn được 4 tổ hợp primer phù hợp:
- MseI + CAA – EcoRI + ACT (Blue) và MseI + CAA – EcoRI + AGG
(Green) cho 36 band, trong đó có 1 band đồng hình và 35 band đa
hình. Chúng tôi nhận thấy có 7 band có thể là chỉ thị phân tử.
- MseI + CAA – EcoRI + ACA (Blue) và MseI + CAA – EcoRI + ACG
(Green) cho 14 band, trong đó có 1 band đồng hình và 13 band đa
hình. Có 2 band có thể là chỉ thị phân tử.
vi
MỤC LỤC
Nội dung Trang
Trang tựa .....................................................................................................................ii
Lời cảm ơn ..................................................................................................................iii
Tóm tắt .....................................................................................................................v
Mục lục vii
Danh sách các từ viết tắt............................................................................................xiii
Danh sách các bảng ................................................................................................... xv
Danh sách các hình....................................................................................................xvii
Chương 1: GIỚI THIỆU......................................................................................... 1
1.1. Đặt vấn đề........................................................................................................... 1
1.2. Mục tiêu và yêu cầu............................................................................................ 2
1.2.1. Mục tiêu................................................................................................... 2

2.2.5. Kỹ thuật Microsatellites (SSR – Simple Sequences Repeat)................... 18
2.2.6. Kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA....................... 18
2.2.6.1. Các bước tiến hành kỹ thuật RAPD................................................. 19
2.2.6.2. Những ưu điểm của kỹ thuật RAPD................................................ 22
viii
2.2.6.3. Những hạn chế của kỹ thuật RAPD................................................. 22
2.2.6.4. Ứng dụng của kỹ thuật RAPD......................................................... 22
2.2.7. Kỹ thuật AFLP........................................................................................ 23
2.2.7.1. Nguyên lý kỹ thuật AFLP................................................................ 23
2.2.7.2. Các bước của kỹ thuật AFLP........................................................... 24
2.2.7.3. Những ưu điểm của kỹ thuật AFLP................................................. 27
2.2.7.4. Những hạn chế của kỹ thuật AFLP.................................................. 27
2.2.7.5. Ứng dụng của kỹ thuật RAPD......................................................... 27
2.2.8. So sánh các kỹ thuật đánh giá đa dạng
di truyền và phát hiện chỉ thị phân tử...................................................... 28
2.2.9. Kỹ thuật PCR........................................................................................... 28
2.2.9.1. Nguyên lý của kỹ thuật PCR............................................................ 28
2.2.9.2. Quy trình chuẩn của phản ứng PCR................................................. 30
2.2.9.3. Tối ưu hoá phản ứng PCR................................................................ 31
Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU........................... 33
3.1 Vật liệu................................................................................................................. 33
3.1.1. Nguyên liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu....................................... 33
3.1.1.1. Nguyên liệu...................................................................................... 33
3.1.1.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu.................................................... 33
3.1.2. Hóa chất cần thiết.................................................................................... 33
3.1.2.1. Hóa chất dùng cho tách chiết và kiểm tra DNA lá điều................... 33
3.1.2.2. Hóa chất dùng cho kỹ thuật PCR – RAPD...................................... 35
3.1.2.3. Hóa chất dùng cho kỹ thuật AFLP................................................... 35
ix