Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vnTRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC
KHOA KHOA HỌC SỰ SỐNG
KHOA KHOA HỌC SỰ SỐNG
ĐỀ TÀI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC
ĐỀ TÀI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC
PHÂN LẬP GEN LTP Ở HAI GIỐNG ĐẬU XANH
CÓ KHẢ NĂNG CHỊU HẠN KHÁC NHAU
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Lệ
Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Vũ Thanh Thanh

Thái Nguyên, tháng 5 năm 2012
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
NỘI DUNG BÁO CÁO
NỘI DUNG BÁO CÁO
1. MỞ ĐẦU
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
M Đ UỞ Ầ
M Đ UỞ Ầ

MỞ ĐẦU
MỞ ĐẦU
1.2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
- Phân lập gen LTP ở hai giống đậu xanh địa phương có
khả chịu hạn khác nhau từ genome.
1.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
- Tách DNA tổng số từ lá non của hai giống đậu xanh TS
(Tân Sơn) và BK (Bắc Kạn).
- Khuếch đại gen LTP bằng phản ứng PCR với cặp mồi
đặc hiệu.
- Tách plasmid tái tổ hợp mang gen LTP ở hai giống đậu
xanh TS và BK.
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
-
Hai giống đậu xanh địa phương Tân Sơn (TS) và Bắc
Kạn (BK)

TS
BK
Hình 2.1. Hình ảnh hai giống đậu xanh TS va BK
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
CỨU
CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phương pháp tách DNA trực tiếp từ lá non đậu

8 Taq polymerase (unit/µl) 1
9 Tổng thể tích 25
Bảng 2.2. Thành phần phản ứng PCR
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
CỨU
CỨU
Các bước Nhiệt độ Thời gian Số chu kỳ Tác dụng
1 94
0
C 3 phút 1 Biến tính
2 94
0
C
52
0
C
72
0
C
30 giây
1 phút
1 phút
30
Biến tính
Gắn mồi
Tổng hợp chuỗi

CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

STT Thành phần Thể tích (µl)
1 Buffer T4 ligase (10X) 2
2 DNA 6
3 Vector pBT 1
4 Enzyme T4 ligase (2 unit/ µl) 1
5 Nước khử ion 10
Tổng thể tích 20,0
Bảng 2.4. Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dòng pBT
Lai ở 22
0
C trong 1,5 giờ tạo vector tái tổ hợp
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN
CỨU
CỨU
2.2. PH NG PHÁP NGHIÊN C UƯƠ Ứ
- Biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến chủng
E.coli DH5α bằng phương pháp hóa biến nạp ở 42
0
C
đúng 1 phút.
- Nuôi khuẩn: Chọn khuẩn lạc có màu trắng nuôi trong
môi trường LB lỏng, có bổ sung ampicilin, qua đêm.
Kiểm tra sản phẩm chọn dòng.
2.2.5. Tách plasmid tái tổ hợp bằng bộ kít của hãng
Bioneer.

3.4. KẾT QUẢ TÁCH DÒNG GEN LTP Ở ĐẬU
XANH
M 1 2
← 350 bp
Hình 3.4. Hình ảnh điện di kết quả tách dòng gen LTP của hai giống
đậu xanh TS và BK
Marker 1kb; 1.TS; 2. BK
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.5. KẾT QUẢ TÁCH PLASMID TÁI TỔ HỢP

1
2
Hình 3.5. Hình ảnh điện di plasmid tái tổ hợp mang gen LTP
ở hai giống đậu xanh TS và BK
1. TS, 2. BK
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. KẾT LUẬN
- Đã tách chiết thành công DNA tổng số từ lá non của
hai giống đậu xan TS và BK.
- Khuếch đại thành công gen LTP ở hai giống đậu xanh
TS và BK bằng phản PCR với kích thước khoảng 350
bp.
- Chọn được dòng vi khuẩn E.coli DH5α mang vector
tái tổ hợp (pBT –LTP) và tách được plasmid mang
đoạn
gen LTP ở hai giống đậu xanh TS và BK.