Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ XÃ HỘI
BỘ MÔN SINH HỌC
ĐỀ TÀI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC
NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG CÁC GIỐNG CHÈ
TRỒNG Ở THÁI NGUYÊN BẰNG KỸ THUẬT
SINH HỌC PHÂN TỬ

Giáo viên hướng dẫn: ThS. Hoàng Thị Thu Yến
Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thu Phương
Thái Nguyên 2008

Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn
Mở đầu
Tổng quan tài liệu

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
Nội dung nghiên cứu đề tài bao gồm

 Thu mẫu lá chè.
 Tách chiết DNA tổng số.
 Đo quang phổ DNA
 Nghiên cứu tính đa hình của genome chè bằng
kỹ thuật RAPD.
 Phân tích sản phẩm RAPD bằng phần mềm
sinh học phân tử.
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
1. Khái quát về cây chè
1.1. Nguồn gốc của cây chè
 Vân Nam-Trung Quốc.
 Vùng Atxam thuộc Ấn Độ
 Việt Nam.
Tæng quan tµi liÖu
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
1.2. Sự phân loại cây chè
Ngành Hạn kín Angiospermae
Lớp Song tử diệp Dicotylleonae
Bộ Chè Theales
Họ Chè Theaceae
Chi Chè Camellia
Loài Camellia sinensis
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
1.1.2. Đặc điểm sinh học của cây chè

 Hệ rễ bao gồm: rễ trụ, rễ bên, rễ hấp thu. Rễ trụ có
thể dài đến 2m nhưng thường chỉ dài đến 1m.

Tủ ấm Germany
Tủ lạnh Janpan
Máy điện di USA
Máy đo quang phổ Phermo Electriction
Máy chạy PCR Eppendorf - USA
Máy soi DNA Wealtea – USA
Máy chụp ảnh Gel - Doc Applied BioSciences
Bể ổn nhiệt Jeiotech
Tủ - 20
0
C Italy
Lò vi sóng Shorp
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2.3. Quy trình nghiên cứu
Tách chiết và thu nhận
genome tổng số
Tiến hành kỹ thuật RAPD
Điện di kiểm tra kết quả
Kiểm tra độ tinh sạch của
DNA băng máy quang phổ
Thiết lập mối di truyền giữa
các giống
Nguyên liệu lá chè
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
2.3. Các phương pháp nghiên cứu

Phương pháp tách chiết DNA tổng số
Phương pháp đo quang phổ trên máy quang phổ tự ghi
Phương pháp điện di
Phương pháp RAPD

Hình 1: Phổ hấp thụ DNA từ giống Tri 2024

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
Hình 2: Phổ hấp thụ DNA từ giống Iakatamidori
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
Giống LDP2 PH1 TDLN Iakatamidori Tri777 Tri2024 PT95 KTT
A 1.589 1.981 1.941 1.734 1.223 1.752 1.239 1.788
+ Kết quả đo độ tinh sạch DNA
A
260 nm
= OD
260nm

và A
260nm
= OD
280nm

; tính tỉ lệ

A = OD
260nm
/OD
280nm

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
+ Kết quả nồng độ DNA của các mẫu thu được
như sau
Bảng 1: Nồng độ của DNA tách chiết được
Giống Độ pha loãng Giá trị OD

với đoạn mồi RA32 của 8 giống
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
+ Mồi RA40
1.LDP2
2. PH1
3. TDLN
4. Iakatamidori
5. Tri777
6.Keo Tam tích
7. tri 2024
8. PT 95
Hình 4. Hình ảnh điện di sản phẩm RAPD
Với đoạn mồi RA40 của 8 giống chè
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
M
G
1 2 3 4 5 6 7 8
RA32
1,5 (kb) 0 0 0 0 0 0 0 1
1,25 1 1 0 0 0 0 1 0
1,0 1 1 0 0 0 0 1 1

Mồi Phân đoạn DNA nhân bản Phân đoạn DNA đa hình Tỷ lệ % phân đoạn đa hình
RA32 7 7 100%
RA40 9 7 78%
Tổng số phân đoạn DNA ngẫu nhiên là 16 và có kích
thước từ 0,18 – 1.5 kb. Trong đó có 14 phân đoạn DNA
đa hình chiếm 87,5%, 2 phân đoạn DNA không đa
hình chiếm 12,5%.
Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
3.4. Mối quan hệ di truyền giữa các giống chè trồng ở Thái
Nguyên dựa trên phân tích RAPD
* Kết quả hệ số tương đồng di truyền giữa các giống chè
Bảng 5. Hệ số tương đồng giữa các giống chè
1 2 3 4 5 6 7 8
1.000
0.900 1.000
0.650 0.750 1.000
0.600 0.600 0.550 1.000
0.500 0.500 0.550 0.700 1.000
0.750 0.850 0.800 0.750 0.650 1.000
0.700 0.700 0.550 0.700 0.500 0.550 1.000
0.300 0.300 0.450 0.300 0.500 0.350 0.300 1.000
1.LDP2
2. PH1
3. TDLN
4. Iakatamidori
5. Tri777
6. Keo Tam tích
7. Tri 2024
8. PT 95