NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA EGCG CHÈ XANH (CAMELLIA
SINENSIS) TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ VÚ NUÔI CẤY
Bùi Thị Thu Hương
1

Nguyễn Thị Hà
2
,Tạ Thành Văn
2
1

B ộ môn sinh hoá - Tr ường ĐH Y Thỏi Nguyờn
2
Bộ môn Hoá - Hoỏ sinh - Tr ường ĐH Y Hà Nội
Nhiều nghiên cứu in vitro và in vivo đã cho thấy Epigallocatechin - 3-
gallate (EGCG) bằng tác dụng gây sự chết tế bào theo chương trình
(apoptosis). Mục tiêu: Đánh giá khả năng ức chế phát triển dòng tế bào và
khảo sát tác dụng của EGCG chè xanh gây chết tế bào theo chương trình
(apoptosis) trờn dũng tế bào ung thư vú người. Phương pháp: Dùng dòng tế
bào ung thư vú người MCF7 là mô hình thực nghiệm in vitro để đánh giá tác
dụng của EGCG. Kết quả và bàn luận: EGCG chè xanh có khả năng ức chế
sự phát triển dòng tế bào ung thư vú MCF7 (92,2% - 25,1%), tác dụng này
phụ thuộc vào liều (12,5 - 200µM) và thời gian tác dụng (48 - 72h). Giá trị ức
chế 50% (IC
50
) = 43,13àM. EGCG chè xanh gây quá trình apoptosis trờn dũng
tế bào ung thư vú MCF7 thể hiện qua sự đứt gãy DNA, sự hoạt hoá enzym
caspase – 3. Nồng độ EGCG chè xanh từ 12,5àM đến 50àM gõy apoptosis
với hiệu lực cao nhất.
Từ khoỏ: Dũng tế bào ung thư vú người MCF7, EGCG.
I. ĐẶT VẤN ĐỀ

- Xỏc nh kh nng c ch s phỏt trin t bo nuụi cy:
* K thut o mt quang t bo,tnh giỏ tr IC
50
:
Tế bào MCF7:
- Đánh thức
- Nhân nuôi
- Nồng độ TN10
6
TB/ml
-Mẫu thử hoạt tính: Nồng độ
EGCG chè xanh,EGCG
SIGMA
12,5-
200 àM trong DMSO10%
- Mẫu chứng âm: DMSO 10%
Xác định khả năng ức chế phát triển
TB UTV (48h-72h)
Đĩa 96giếng:- dd huyền phù TB
- mẫu thử
Khảo sát tác dụng gây apoptosis trên
TB UTV (48h-72h)
Phép thử sinh
học xác định
giá trị IC
50
:

để khô, hoà lại bằng dung dịch đệm Tris. Đọc trờn mỏy Microplate Reader
(BioRad) bước sóng 515nm.Tỷ lệ tế bào sống (%) = X 100%
(Trong đú:OD
0
, OD
1
, OD
2
là mật độ quang của tế bào tại thời điểm bắt đầu thí
nghiệm, trong điều kiện nghiên cứu, điều kiện chứng).
+ Tính giá trị IC
50
: Dùng giá trị tỷ lệ tế bào sống tương ứng với các nồng độ,
dựa vào đường cong phát triển tế bào và nồng độ chất thử nghiệm để tính giá
trị IC
50
theo công thức: 1/Y = a + b LnX
(Trong đó: Y: Nồng độ chất thử;X: Tỷ lệ tế bào sống). X: Tỷ lệ tế bào
sống).
* Phương pháp nhuộm trypan- blue:
Nguyên tắc: Trypan blue là thuốc nhuộm đánh giá sự sống, chết của tế
bào. Quan sát dưới kính hiển vi điện tử, các tế bào sống màng tế bào không bị
tổn thương, trũn sỏng, khụng bắt mầu thuốc nhuộm; các tế bào chết sẽ không
tròn sáng, đặc biệt là sẽ bắt màu xanh đặc trưng của trypan blue.
Tỉ lệ % số tế bào sống được tính theo công thức:
Tỷ lệ tế bào
sống (%)
=
S ố lượng tế bào sống
x 100%

Các giá trị
Tế bào sống (%)
p
EGCG chè xanh
( )
EGCG
SIGMA

( )
Nồng độ
EGCG
(àM)
0 100,0 100,0
> 0,05
12,5 82,8 ± 0,2 75,7 ± 0,9
25 77,7 ± 1,1 72,0 ± 0,6
50 40,9 ± 1,2 40,3 ± 0,5
100 31,9 ± 1,5 29,1 ± 1.25
200 25,3 ± 2,2 23,6 ± 1,8
IC
50
(àM) 46,56 43,13
Chú thích: Số lượng tế bào được xác định bằng phương pháp đo mật độ quang, trờn mỏy Microplate
Reader (Bio Rad) bước sóng 515nm. Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
EGCG chè xanh ức chế sù phát triển dòng tế bào MCF7phụ thuộc vào nồng
độ. Nồng độ ức chế 50% (IC
50
) của EGCG ch è xanh là 46,56
µ
M, tương tù so

M từ 28,6% – 25,1% (p>0,05).
3.2. Tác dụng gây chết tế bào theo chương trình (apoptosis) của EGCG chè xanh
3.2.1. Phát hiện DNA ladder

Hình 2. Kết quả điện di DNA trên gel agarose 1,5% ở cùng nồng độ EGCG
và tại các thời điểm khác nhau.
5
0
*
**
**
*
0
0 48 72 48 72 (h)
EGCG chÌ xanh EGCG
SIGMA
µM
EGCG chÌ xanh và EGCG
SIGMA
làm đứt gãy DNA ở thời điểm 72h nhiều hơn
so với thời điểm 48h. Không đứt gãy DNA ở nhóm chứng âm (nồng độ EGCG
0
µ
M)
3.2.2. Hoạt độ enzym caspase – 3 trờn dũng tế bào MCF7
Hình 3. Hoạt độ enzym caspase – 3 trờn dũng tế bào MCF7 tương ứng với
các nồng độ của EGCG chè xanh tại các thời điểm khác nhau.
Chú thích: Hoạt độ enzym caspase -3 được xác định bằng phương pháp đo mật độ quang, trờn mỏy
ELISA bước sóng 405nm. Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Khả năng gây apoptosis trên dòng tế bào MCF7 của EGCG chè xanh

**
**
*
0
µM
Để đánh giá khả năng ức chế phát triển và hoạt tớnh gõy độc tế
bào, chúng tôi xác định được giỏ trị IC
50
của EGCG chè xanh và EGCG
SIGMA
tương ứng là 46,56àM (21,34àg/ml) và 43,13àM (19,77àg/ml). Cỏc giá trị
này nếu so sánh với phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của
Likhiwitayawuid và cộng sự thì cao hơn nhiều lần (quy định mẫu thô phải có
IC
50
≤ 20àg/ml thỡ mới là chất có hoạt tính gây độc tế bào) [9]. So sánh với
giá trị IC
50
của EGCG chè xanh đối với ung thư đại tràng trong nghiên cứu
của Berger là 90àg/ml (196àM) [5], nghiên cứu của Trần Thị Thanh Hương
trờn dũng tế bào ung thư gan (Hep – G2) có giá trị IC
50
là 213,08 àM
(97,68àg/ml) [3], cho thấy kết quả thu được của các tác giả đều cao hơn rất
nhiều so với giá trị được công nhận. Có lẽ do EGCG chè xanh là chất cú ớt
độc tính, tác dụng lâu dài và với một cơ chế tác dụng hoàn toàn khác so với
cơ chế tác dụng điều trị ung thư của cỏc hoỏ chất trị liệu u [3], do vậy liều ức
chế 50% của EGCG chè xanh trong nghiên cứu của chúng tôi và các tác giả
trong các nghiên cứu khác, cao hơn so với quy định cũng là hợp lý.
Chỳng tụi cũn đánh giá khả năng ức chế phát triển dòng tế bào MCF7 của

biệt dưới tác dụng của các nồng độ EGCG chè xanh : 0àM – 50 àM và hoạt độ
enzym caspase – 3 giảm dưới tác dụng của nồng độ EGCG 50àM - 200àM. Hoạt
độ enzym caspase – 3 là cao nhất dưới tác dụng của EGCG chè xanh và
EGCG
SIGMA
với nồng độ 50àM. Từ các kết quả trên chúng tôi nhận thấy, trờn
dũng MCF7 EGCG chè xanh với nồng độ thấp (12,5- 50àM ) có khả năng ức chế
sự phát triển tế bào ung thư và gây quá trình apoptosis thể hiện qua tỷ lệ tế bào
sống giảm, DNA đứt gãy và sự tăng hoạt độ enzym caspase – 3. Ở nồng độ cao
(100 - 200àM) EGCG chè xanh vẫn có tác dụng ức chế mạnh khả năng phát triển
tế bào (tỷ lệ tế bào sống giảm) nhưng không làm đứt gãy thêm DNA và hoạt độ
enzym caspase – 3 không tăng hơn so với tác dụng của nó ở nồng độ thấp (12,5-
50àM ). Như vậy, bên cạnh con đường gây chết tế bào ung thư theo chương trình
(apoptosis), EGCG còn tác dụng làm chết tế bào theo một con đường khác. Điều
này được lý giải trong nghiên cứu của Yan-Der Hsuuw và Wen-Hsiung Chan trờn
dũng tế bào MCF-7, EGCG gây chết tế bào kiểu hoại tử (necrosis) cùng với tác
8
dụng gõy chết tế bào kiểu apoptosis [8]. Tuy nhiên, chúng tôi không có điều kiện
đi tiếp nghiên cứu để có thể xác thực cho suy nghĩ đó.
Nghiên cứu này vẫn cần được mở rộng trên nhiều loại tế bào ung thư
khác nhau, tiến hành trong cùng một điều kiện thí nghiệm và đồng thời, thực
hiện các phương pháp đánh giá sự chết tế bào kiểu necrosis bên cạnh quá
trình apoptosis, để có một cái nhìn toàn diện hơn về cơ chế tác dụng của
EGCG chè xanh trong việc phòng và chống ung thư.
V. KẾT LUẬN
1. EGCG chè xanh có tác dụng ức chế sự phát triển dòng tế bào ung thư
vú MCF7 và tác dụng này tăng theo nồng độ và thời gian tác dụng của hoạt
chất: tỷ lệ tế bào sống giảm từ 92,2% xuống 25,1% tương ứng với nồng độ
EGCG từ 12,5àM đến 200àM ở các thời điểm 48h, 72h. Liều IC
50

vitro and in vivo”, Cancer Let, (245), 232-241.
8. Yan-Der Hsuuw and Wen-Hsiung Chan (2007), “Epigallocatechin Gallate
dose-dependently induces apoptosis or necrosis in human MCF-7 cells”,
New York Academy of Sciences, (1095), 428-440.
9. Kittsak Likhiwitay wuid, Cyndi K. Anger – hof, Geofrey A, Cordell,
John M. Pezutto (1993), J. Nat. Prod., 1. pp 30 – 38.
10. Nihal Ahmad, Denise K.Feyes, Anna Liisa Nieminen, Rajesh Agarwal,
Hasan Mukhtar (1997), “Green tea constituent Epigallocatechin-3-gallate
and induction of apoptosis and cell cycle arrest in human carcinoma cells”,
Journal of the National cancer institude,(89), 1881-1886.
Summary
EFFECT OF GREEN TEA (CAMELLIA SINENSIS) ( - ) - EPIGALLOCATECHIN - 3 -
GALLATE (EGCG) ON BREAST CANCER CELL LINE.
Epigallocatechin - 3 - gallate (EGCG) has been shown to have
anticarcinogenic effects in vitro and in vivo models, and this effect is
mediated at least inpart by its ability to induce apoptosis in cancer
cells.Ojective: To investigate in vitro the anti proliferative and the induction
of apoptosis on human breast cancer cell line.Methods: Using the MCF7
human breast cancer cell line as an in vitro models to determine the effect of
EGCG.Results and conclusion: Treatment of EGCG resulted in dose -
dependent (12,5 - 200µM) and time - dependent (48 - 72 hours) in hibition of
cellular proliferation (92,2% - 25,1%) and values of IC
50
is 46,56µM.
Decrease in cell viabity as associated with the induction of apoptosis which
was analyred by DNA ladder and activation of caspase - 3, as well as EGCG
in dose (12,5 - 50µM).
Keywords: MCF 7 breast cancer cell line, EGCG.

10