Báo cáo khoa học Viện Chăn Nuôi 2006 1
Nghiên cứu ứng dụng đông lạnh phôi bò bằng phơng pháp tạo
thể thuỷ tinh (Vitrification method)
Nguyễn Thị Thoa, Nguyễn Văn Lý, Lu Công Khánh, Phan Lê Sơn
Bộ môn Cấy truyền Phôi
Abstract
This study was conducted to apply a new method for cryopreservation of bovine embryos by Vitrification
solutions. In This study, total of 90 embryos were freezed by Vitrification method. After thawing and in
vitro culture, the hatching rate of embryo was 74,74%.
Đặt vấn đề
Ngày nay công nghệ bảo quản lạnh tế bào động vật đ trở thành thông dụng. Nhiều nớc
tiên tiến trên thế giới đ thành lập ngân hàng phôi, tinh, ngân hàng gen động vật và đ trở
thành thơng mại hoá. Mặt khác đối với ngành y học, công nghệ bảo quản lạnh tinh, phôi
đ mang lại hạnh phúc cho nhiều cặp vợ chồng sau khi chữa khỏi bệnh hiểm nghèo mà
không có khả năng thụ tinh nhng vẫn có khả năng mang thai bằng cấy phôi đông lạnh.
Với công nghệ sinh học hiện đại cấy phôi đông lạnh còn hạn chế đợc những bệnh về gen.
Trớc đây đ có nhiều nghiên cứu về đông lạnh phôi bò, nh phơng pháp đông lạnh một
bớc, đông lạnh 3 bớc. Việc bảo quản phôi bò bằng phơng pháp đông lạnh ngày càng đ-
ợc cải tiến. Đông lạnh phôi bằng phơng pháp tạo Thể thuỷ Tinh (Vitrification method)
đ đợc nhiều nớc nghiên cứu và áp dụng có hiệu quả.
ở Việt Nam ( Bộ môn CTP) đ áp dụng thành công đông lạnh phôi bò bằng phơng pháp
đông lạnh một bớc, phơng pháp 3 bớc nhng đông lạnh bằng phơng pháp Tạo Thể
Thuỷ Tinh (Vitrification method) cha đợc nghiên cứu ứng dụng.
u điểm của phơng pháp này so với hai phơng pháp trớc đây là quá trình đông lạnh
không tạo đá nội bào, không gây thiệt hại cho phôi, đơn giản, không mất nhiều thời gian,


Đông lạnh phôi
Thành phần của môi trờng đông lạnh
Glycerol
Ethylene
Glycol
Sucrose Xylose *PEG(w/v)
V1 10% - 0,1M 0,1M 1%
V2 10% 10% 0,2M 0,2M 2%
V3 20% 20% 0,3M 0,3M 3%
*PEG: Poly Ethylene Glycol(M.W.=8,000)

MôI trờng cơ bản là D-PBS.
- Chuẩn bị môi trờng đông lạnh
Lấy 150àl môi trờng V1vào đĩa số1
150 àl mỗi trờng V2 vào đĩa số 2
150 àl mỗi trờng V3 vào đĩa số 3
3 ml môi trờng sucrose vào đĩa số 4
3 ml môi trờng PBS 20%CS vào đĩa số 5
- Tiến hành đông lạnh
Sau khi đánh giá phân loại, những phôi tốt (những phôi đúng với giai đoạn phát triển, khối
tế bào phân chia đều liên kết chặt chẽ, vòng trong suốt tròn sáng) đợc chuyển vào môi
trờng V1 để cân bằng 5 phút sau đó chuyển sang môi trờng V2 để cân bằng 5 phút và
vào môi trờng V3 để 1 phút, ngay lập tức hút phôi cùng với môi trờng V3 vào cọng rạ
loại 0,25ml, cho vào Nitơ lỏng -196C (trong vòng 1 phút). Cho vào bình Nitơ lỏng bảo
quản lâu dài.
Giải đông phôi
- Chuẩn bị môi trờng giải đông
- Lấy150 ml môi trờng (MT) 0,5 MSucrose vào đĩa 1
- 150ml MT 0,25 M Sucrose vào đĩa 2

Phôi đông lạnh Phôi chết Phôi sống
Trong đó (n) % (n) % (n) %
Phôi dâu 55 55,55 18 32,72 37
67,27
Phôi nang 44 44,45 7 15,90 37 84,09
Tổng số 99 100 25 25,25 74 74,74

Sau khi giải đông và nuôi cấy in vitro, trong số 99 phôi đ có 74 phôi sống và phát triển
đến thoát màng, chiếm 74,74% thấp hơn so với Nhật Bản và Hàn Quốc (74,74 so với 89%
và 86%). Số phôi chết và thoái hoá là 25 (25,25%).
S phôi nang sng sau giải đông v nuôi cấy in vitro cao hn so với phôi dâu (84,09% so
vi 67,27%;) kết quả này này phù hợp với các kết quả nghiên cứu của các tác giả;
Saito,N., K.Imai, M.Tomizawa, Shin-noh, . S. Kaidi,A. Van Langendonckt, A.Massip,
F.Dessy and I.Donnay
Kết luận và đề nghị
Kết luận
Bớc đầu nghiên cứu ứng dụng đông lạnh phôi bò bằng phơng pháp tạo Thể Thủy Tinh
thành công trong điều kiện Việt Nam
Tỷ lệ phôi sống sau giải đông của thí nghiệm này là 74,74%.
Có thể áp dụng phơng pháp đông lạnh này vào sản xuất
Đề nghị
Báo cáo khoa học Viện Chăn Nuôi 2006 5
Đề nghị đựợc tiếp tục nghiên cứu đông lạnh phôi bò bằng phơng pháp tạo Thể thuỷ tinh
(Vitrification method) để nâng cao tỷ lệ phôi sống sau giải đông.