
 !

"#$%
 !"#$%&'()*+,-./0--102!3)4-/567
89)*:/*;3<!=-->*?8=$@"+-/$--*,6,/6
--2A*;!"*-,.B-4.-6-<*C-./8DCEFG
H$''$I9.-.,,*-.JK!KL
!3)'9MNTrichosanthes 6*L//?-4=N-6$/6,?8>OP
.9A*Q!K"/$,RA%=STESU/V.-6-EW$X!9Y9Z'[(
)**-,AN99.-DTSFL,-$,/*,*$?'7/-+$8->C\]
^2A<',,*-+2A8N!'*Y#$%L!_!3)*'
BNJH.JK9.-'3A`aN9JN9bDc]FLd
:/e!_!3)6a$@*;3<!=-6"!"#$%'()*
3,-./fVfg6--1L-!?fVfe*-,.B-4.-6-
!3)'9MNfN-///,//LfVf!_?8>OY9!K6"$I
9.-3?.h'.JKDcFL
9*":HYAJ989A,-.h,_-'-*-,/R
E.coliDCF-.N`<AJ'!J8.hA89Z>9-4*-,
'()*NL
&'()*'+,-).'
2.1 Nguyên liệu
,-.h*/,_-'-*-,/!3)9894fI
-'6f-,DCFLihHY.h?6a$@9.-jL
-UkEC+ljT235k/,/+k26-*-*N-βl//-6$,+0f2
/*A'-'B358'L
2.2 Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Điện di SDS-PAGE
i$.9=*-,.GlfVj+CEcm2!3)9,-'*3d*'*U/
k/,DCEFL
2.2.2 Sắc kí trao đổi ion trên hệ FPLC

35ku-'.[/'"/QE\\AIq*`RTn
-
-!98V
s\\


!4
\LS\LsL>Y.G0f+v!"\LS^2A9*@QE\\AIq*`REE
-
T\
-
ATn
-
L8"9.-R'5!h8'/CETS5AZ/!H+Cs52!3)4.GN
Rc\\\AIq*`A*'.G6H-!3!_>RHLNJ$%9.-6/8
*'!3)NRCE\\\AIq*`-E\*`!h'H'*;KA(Lf-,(6"
!3)R*;(AK!3)8h/.G!$lfVjH,*-N/N/$,CEcmLM
89Z>!3)-BNREE
-
A6/Cs5!3)>Y*-,!3)4-/P*
UN9R$4/L3z5/HRT\
-
ATn
-
*-,4!3)
.h/UN9R$48/L
3.2 Tinh chế protein GnRH-TBK tái tổ hợp
ih*@A@-9A:HY9*,-Z'[.h*-,!3)
9REE
-

CLiK/f/O+E\\T2qqlNJAY$@+!/2
ELf/O+E\\C2qq>-"9E\\CLsssWL
TLf/O-"35N#yf4-4kH;[+E\\\2qq
:AB!Jd.>-6oi4"/LETEWL
SLf//-/--N,N/x-00/$k,/+E\\C2qq
-,-LV**L-,LTS}Wc]E
cL•,/k8f**,l,‚‚$,l,6A-N,6f/6/,V$/•,//$-^‚,
•-A,-qqwjk,,6SnE+E\\\2ESCESsL
sLj-6Lƒ$,L„/„Lx,6*/,LpLlL/$/NVLL+C]]T2qq•L
Lj$--L^,/.LnnCScWCSsSL
nL/NVL8xL/N-LL8-/L/$x/1/•L+C]]\2qqL•L/,sE]s
]]L
WL0/VL„--Lk$/LwL/$//N/L+C]]S2qq/,nSEcccEcsCL
]L8/-AL-86,kL/$-AL-8jL/$/NVL+C]]\2qqj$---NCEn
T\cET\s\L
C\L0/VL-.,L/8/VL/$/8L„-L/$//N/L+C]]n2qqjL•L„.6,
N,-L,*-L-LnSnTnWL
CCL0/VL/8/VL-.,L//8L/$//N/L+C]]n2qq0L•L„-LCT]nC\\L
CELk/,…LL+C]n\2qq/,EEn}sW\sWcL
CTL-†.L/,,L/$-$-•L+C]n]2qqf-L/LV/$LL…VnsSTc\STcSL
5'443(
67!8!9:!;;87<9;=!:86>!;?7;:<!!E. coli
0--16-6,/,†-$/Ng-,,/,-g/,6,,N/,,6$6*/N
6*,g6g/,,,*-6-/,6L0--16-///$6/6/-†g/-
---//.-$N-g/,-g//.-$N†6-,,$-/*-,-1L-16
,A,†,$,,$,//N*-,6*-$,$.N*/6-./,/†8/,,6+
fVf-fjl€2L,,N†,/A,6-/,$-./8+2/N*,C.-6-,/A/
*-,+0f26-/,$g-Trichosanthes6*L//W]W+./,/,g/N2†,A,/6
/A//$//,/AN-,6$,,N-*/6L†/6*-A,$-.,/--$/$$/,g-
,-6--g$gg,,g6-*-,6/6,-./ --16&LV./,/,1*,66-

*a68'HA9`'*-,NI*@A-.>BU/'H89L
^"P!3)'*-,NHhY*-,?B>=B7H!K3U/
?;6a$@'.*'*8'/L
2.1. Nhiệt độ
ih''*-,8'/$7/H89U/U/`35/?h6a$@*3d*'*.9
=5'$@U/L^!J;3y•H$z!"A<35)*'
*-,,pN,.JA<Ll%*-,,pN,!3):Rc\n\‹…fŒ\‹q…fŒ-5
/1'!%6/!?*-,4*!_.%.9=!3)-4.u.G'-KNL3APN$%
9*-,.JA<?h!3)P.G'-89U/8P%*;
<'*-,4*L
ihP9*{*-,,-*3d*'*89U/P%.G'"=;
9R!B*!"A<$:d;9R!$3<\‹…fŒ\‹q…fŒ
'.9=!K.*-,,pN,L
2.2. Nồng độ proton (pH)
f-,'B3•=A[APN-'$$%/$A8J`6t.%*N36/}
‹ˆ1}/,6*/,*,g1‰-6‰Ž}6,/6-6-g-}-gg,}-gg,ŽqŒ‹-}*Œ‹q-}*Œ
‹ˆ1}/,6*/,*,g1‰A6‰Ž}6,/6-6-g-}AŽqŒ‹A}6/*,N*,$‰•1\\\\•nc
6-8,$‰ŽgŽg,$‰ŽgŽ*/‰Ž•S•c•S•CC•]•CC•]•c1,Ž-}*,g,,/A,‰ŽŽ-}6*‰ŽncŽ
--$6p,‰ŽECs\\ECs\\ŽŒ‹A}6-8,‘-6N,‰Ž,ŽŒ‹qA}6-8,Œ‹A}g-/6Œ‹A}g,Z‰Žg
,l/†*1,k,x$\ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž6•\C\ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž6\\
•CŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž*-$•ECEŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž*-$•TECs\\*1,x$ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g
,Z‰Ž*-$•TECs\\*1,,ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž6•\\CŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž*-$•sC
EŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž*-$•nECs\\*1,x$ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž6•WECs\\\ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g
,Z‰Ž*-$•nECs\\*1,,ŽŒ‹qA}gŒ‹A}g,Z‰Ž6•C\ECs\\\ŽŒ‹qA}gŒ‹qA}g-/6Œ‹A}*/
-}-,N*,‰Ž,Ž/$,6/*,-8‰ŽŽ-},16--8‰ŽgŽŒ‹qA}*/Œ‹-}-8/6*,/-‰ŽŽ
A},1‰Ž,$ŽŒ‹q-}-8Œ‹qA}6/*,N*,Œ‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\Ec6N,‰Žx0l}ES\*~j0}
]s*Ž/‰Ž’
“
$NH
”

3APNR'%*1'!%|*a*-,?!=(6"-!BN!<
U/?*@A-6"3)'?=!$3dA=!L9Z>R'%v!
-N$-"!%'*-,8'/-|)*6t?(!=8'/LJ*3d
*'*$z!h''|)**-,!J$7/A-!K=NL'*a*-,/!=
(6"+$3d-K2z$B!{N//1/H$#/A-$$%L^|*-,?
'%*B!%R!?(6"!=A!=$3d-*a.G8L'%
!?!h!r!U/*-,Lih!r!U/'/$/=?'%*Mcs
n\~!"A<'/$/?=/$+$/.-1N2MT\TE~!"A<'/$/?=
8J+$/-2M]nC\WL›!h!r!!I//U/*-,B*B*-,$#.%
89U/Ll7/A-=BN35/?h'M*;'*-,,pN,-|)*L
e"335)*'$@U/!-A'9*-,?h$z*3d
*'*.9=5'$@U/*U/35Ll%*-,,pN,!3):R* 
c-5/1'!%Lf-,4*.%.9=e!3)-4.u.G'-KNL=$@
--e/-/$-/,-8!?/$N89U/*;<*-,L3
APN'*-,.JA</$?h!3)'9.G'NL
2.3. Tác nhân hóa học
?h$z"=-K'$:d!h'9'*-,,pN,Lf3d
*'*N!3)9$7/d6R}!I//U/*-,*@A-673d'U/'
?=!-*a*-,A<'*a3<L73d'!?+I67N$/,
?/26t.%>1"8HA-$$%*-,,pN,'$:d-K'"
=Ll:d35$z,/-6-*-*/-/,-,-K|)*'-43)L
6a$@'$:d;`y9R!B*+Mc‹…fŒ\‹q…fŒR
1"2Llz$:d?h9'*!-4$3<\‹…fŒ\‹q…fŒA?h
!9E\‹…fŒ\‹q…fŒ3APN?'$@"!9!(!%U/*-,,pN,L
!_?89U/`yBN/89U//8u$.G'$z'NN4L
'"=?h$z+‹…ŒS‹q…Œ2‹…ŒE‹q…Œ„‹…ŒS‹q…Œ
/‹…ŒE‹q…Œ„‹…ŒS‹q…Œ^„‹…ŒS‹q…ŒLLLNH35/!_PBN
"+‹…ŒS‹q…Œ2‹…ŒE‹q…Œ„‹…ŒS‹q…Œ"BA[?84
(!%+.J2;9'-4*-,,pN,Lk-4"N4tJA*(.9LiI/
/U/?4B<+.>-I/nsnqREc‹…fŒ\‹q…fŒ2

$NH
”

•
/./
”

-
–
H
•
8—d
”
H
•

”
’
“
/
“
NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰Ts.n,gsnWSs.//.$L‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•
/,\\EL‘*ŽŒ‹qA}/,$//Œ‹qA}6/*,Œ
-!?h=$$%‹…ŒC‹q…Œ‹…ŒE‹q…Œ!._-I/-3<A!
._-I/;!4+A=$@}‹…ŒC‹q…Œ‰\c~‹…ŒE‹q…Œ‰\nr42L
35/e?h$z.>!v-'+--/2!h9A1'!%!3)3)
+‹…ŒS‹q…Œ2‹…ŒE‹q…Œ„‹…ŒS‹q…ŒHA-!h$%9*-,,pN,

NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰W]W$,E],\E],gCWL‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•
/,\\TL‘*ŽŒ‹qA}/,$//Œ‹qA}6/*,Œ
3APN9HM*;'$:d-KM*;"
+‹…ŒS‹q…Œ2‹…ŒE‹q…Œ„‹…ŒS‹q…Œ+?v!._-I/8'/2[/?
h'M*;|)**-,,pN,LNH!h*/--:|)**Y
4**3d*'*N8-89Z>"A[!I//U/6"*-,.%OHL^K$;APN
'89U/M*;NeB?)!K.!"A</!-4!;U/A'9A
64*-,,pN,A[*3d*'*8'!d>L
-/''!8'3d6?6HLLL?>3R!9Z'['9*-,
,pN,L
@FP:C=;F9!C:7D:?7;:<!
3.1. Phá vỡ tế bào
f-,,pN,?-B>'dh!AP7APAA6APL/8!3)()*?
?h!3)9/-9.-v4-'$%dh$%35+*-,,pN,
-4.-2-K!3):4.H-9.-+*-,,pN,.-2L'*-,,pN,.-
?hv4R$4I//-9.-BA'.-Z/+-6-,--$/ALALLL2
U/9.-L9.-!3)./-..G<*Lk<*NRA8{!8B.JA$NL
35/IBNJ*-,,pN,H89BKtA<'.-Z/U/9.-L'*a
*-,,pN,8?8>O!Z/U/9.-AU/'.-Z/U/9.-Ll-
!?!h?h9`'*-,,pN,.-.3<!;H*>*'A•B`U/'9.-
?Y/*-,,pN,ANh`A-$$%L
?h*'A•B`U/9.-.G'.*'*d3JA<.UN-K'
4/!v?/.G9.%H!vh+--,p/-2L9.%N?NUN
QA<dZ/NA?h!J•!3)"!Z/N,-NH;L'9.-:/NzN
A"6t.%*'UNL
ihA*'A•?Z>R7AP3<8J35/35'uX!hA-
O!'-K-3d3<L+A=$@3!"A<X482LIR'U/!AP3/

u.HH89U/*/Q35Q891"!'N"N!3)89U/L7
B67NO"!89U/U/:h*;Q57NL76/8'AJ•U/
NHd:6-A<Bu<["!89U/6t/-L^K$;35/-6"
AIZ/N-*`!dA%35U/7N3ZN3<BN8u/_L
=A[APNY!O7N!3)!-'=1'd.G:.6"U/%6"
/"U/7`RK.h?ž/!3)!-7N3d!"+,/A,,g/
g-,w2-K!3)!-.G''%.6"U/7`35+12LY!h=
7N3d!"}
‹-}*Œ‹q-}*Œ
‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\EW6N,‰Žx0l}SW*~j0}T]*Ž/‰Ž’
“
$NH
”

•
/./
”
-
–
H
•
8—d
”
H
•

”
’
“
/

-4"/-6*/,/8u$$%*-,[-$$%*-,A-'`!K
.GNH.'BL3535//N$z`--$--K,-*/,+-4
6//N!3)$zd2L/!?!K>`A-.[Y/3)<3<-K3)<$$%
!!3)*/-_+A=$@!*-6*/,?*‰nv!\\C^2L[,-*/,
.'B?8=3<|•-'B?*a!Z/A-'$$%!-_,-!%
P89'L3APN"6t8N9'A-3<-K$$%!H-_+$Nh,-
3<>v!2I3<-K!-_6t$NhM$$%a/A-`Y/*-,L
f-,:!4*a8hA3)Z/`{=A!3)a4-`LG'
/N!(351NH$$%a/?h{N64"/8u*-,K$;-Z'[
{=?$$%!3)*/-_dL?h>.<-K-4M67*/-_3
989{=$3<'*6B?ž/8$$%!3)1ayG$3<'*6B
UNž!;N!U!h$IUN!U/3<M$$%6t.G6789'U/'
*aA-$$%Lf3d*'*N35!Iu?9.%!K.L
‹-}*Œ‹q-}*Œ
‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\E]6N,‰Žx0l}CnsLEc*~j0}CETLnc*Ž/‰Ž’
“
$NH
”

•
/./
”

-
–
H
•
8—d
”
H

-A''B8L
Q8y,I!3)*3d*'*$zBN*a,+,g/-2
d6RU/*3d*'*,$7/A-678'//AJ8=3<[$4A*a
3)U/*-,,pN,?-|)*!h'`/L
ih!>.>--A'*-,,pN,!3)"BN*a*>Bd8*>Y
A<*-,,pN,LBNe8I//A3d!".JA<'N9"AJde3
6L-/B!3)6a$@-@!=*a*>B8?=!v
+8-2A*>B3/3<+$-g2L
,6,*/$,1Bu/_'N9"HL,*/$,19*{$,1/$-'-A6AP
8'/k,--6-4-/8`!3)BNH35Y/6//-6,L
3)*aU/$,1/?h!4<A<dLfa$,1/./-v'|$-
'"-6,4-'H89CsL,*/$,1PM$,1/.G'1ay?/+$-'
$@U/,*-$2!h4-/'3<*'?H89/Ž6*aŽAB
NR8/-3<L"H89/4-/J8=3<U/|6*
auL
f3d*'**aH,*/$,1!3)936/}-6,*/$,1A-UN$A
.G.G$$%!?*B!%L/!?-$$%*-,,pN,HL
A9.G$=)*'*a?3)*au+R!N'"26t
89'P4*Z/'|uU/'4,*/$,1.%3d*vIB?3)
*a<d+R35)*N*-,,pN,28?8>O!A-'/Z/
'46,*/$,1A6t!3)9//8u+[cLEA[cLT2L[APN/?h'!3)
B?3)*a/-d-'/8u,3<6-A<B?*a3)uL
_,*/$,1+f///2U/@Nih!_/%35'-46,*/$,1?8=3<
8'/?8yMC\!9E\\L"8y!h•/Y!P+`23<U/`L=
$@C\!h•83d*v[C,8PC3<+Cq2
‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\T\6N,‰Žx0l}TcS*~j0}C]]Lc*Ž/‰Ž’
“
$NH
”


N9/2
‹-}*Œ‹q-}*Œ
‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\TC6N,‰Žx0l}TES*~j0}Esn*Ž/‰Ž’
“
$NH
”

•
/./
”
-
–
H
•
8—d
”
H
•

”
’
“
/
“
NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰EgnsT/TT\,,E\nscL‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•
/,\\nL‘*ŽŒ‹qA}/,$//Œ‹qA}6/*,Œ‹-}*Œ‹q-}*Œ
QR/@99@9?a:b:<;]T9:Ad9=e>f9]gU`9<U

‹-}*Œ‹q-}*Œ
‹A}6/*,$‰•1\\\\•C\TE6N,‰Žx0l}EEsLc*~j0}TCLc*Ž/‰Ž’
“
$NH
”

•
/./
”
-
–
H
•
8—d
”
H
•

”
’
“
/
“
NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰SE,C,WgS],$gWn,L‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•
/,\\WL‘*ŽŒ‹qA}/,$//Œ‹qA}6/*,Œ‹-}*Œ‹q-}*Œ
-‹…ŒE‹q…Œ„?!3)*N}
‹-}*Œ‹q-}*Œ

”

•
/./
”
-
–
H
•
8—d
”
H
•

”
’
“
/
“
NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰gTE/TWSEgCgEWL‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•
/,\C\LgŽŒ‹qA}/,$//Œ‹qA}6/*,Œ
iNB/-!(/-.>=!$3dL
'/-!3)'*$@!h*='*-,/$?M/:?/.-1N7$-L7B*
*@*-,H:-3APN!3)9A<:$$%!?7-B*+\\\c
\C^2R*ncWcL+'*-,/$?:/'/-/$--/$/.-1N3V6*2
-|)*B-A<$$%!?!*3dY'B-!_?RHRH
=!L[APNH.JK<*B'6t[<*!=?$B*@A-8h

•
8—d
”
H
•

”
’
“
/
“
NLŽN*,‰Ž˜•1\\\\•ncŽŒ‹A}/,$//
-},g‰Ž*}qq/L--,L-q/qˆ/,‰]CSW/$/.]WC.TL‘*/$‰\LT$6*‰A/A,
†‰/‰CC$]S,]S]SCTWWnŽ
6‰Žg,}qqq}™l„…^jšC™6,A,™k„VkšC™,*™6-C™\C™*•