Download miễn phí Cấy tủy xương



Số CFU-Fs cũng biến thiên rất rộng từ 29 đến 156, trung bình là 79,95. Độ lệch
chuẩn là 73,2. So với nghiên cứu của Seebachvà cộng sự thì ở nam giới khỏe
mạnh, số CFU-Fs đếm được là 54 17[4]. Như vậy theo cách lấy tủy và môi
trường cấy của chúng tôi, số CFU-Fs đạt được nhiều hơn. Cũng theo nghiên cứu
của Seebach thì ở những bệnh nhân đa thương sẽ cho kết quả số CFU-F lớn hơn
(59  rong khi đó theo kết quả của Hernigou thì có thể đếm được 612 
CFU-Fs trên mỗi cm3(12-1224) sau 10 ngày nuôi cấy tủy.


http://s1.liketly.com/flash/edoc/jh2i1fkjb33wa7b577g9lou48iyvfkz6-swf-2013-12-26-cay_tuy_xuong.cqXpvBEtuJ.swf /tai-lieu/de-tai-ung-dung-tren-liketly-50910/
Để tải bản Đầy Đủ của tài liệu, xin Trả lời bài viết này, Mods sẽ gửi Link download cho bạn sớm nhất qua hòm tin nhắn.
Ai cần download tài liệu gì mà không tìm thấy ở đây, thì đăng yêu cầu down tại đây nhé:
Nhận download tài liệu miễn phí

Tóm tắt nội dung tài liệu:

CẤY TỦY XƯƠNG
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm của
tủy xương liên quan đến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xương
của tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô, được đánh giá thông qua số lượng
CFU-Fs.Vì vậy chúng tui thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy và đếm số
lượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam.
Phương pháp Khoảng 2.0 ml tủy xương được lấy vô trùng pha với 0.1 ml heparin
(5000IU/ml). Tủy được cấy vào môi trường IMDM, 15% FBS, kháng sinh. Mẫu
được nhuộm Giemsa để quan sát và đếm khúm tế bào CFU-Fs sau 7 ngày nuôi
cấy. Có 20 mẩu tủy được cấy và đếm CFU-Fs.
Kết quả: Nồng độ tế bào đơn nhân sau khi phân lập: 43,9x106/ml, Số CFU-Fs
trung bình đếm được sau 7 ngày nuôi: 79,95.
ABSTRACT
CULTURE BONE MARROW TO EVALUATE MESENCHYMAL STEM
CELLS BY MEANS
OF COUNT OF CFU-FS.
Tran Cong Toai, Cao Thi * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - Supplement of No
4 - 2008: 488 – 490
Introduction: There aren’t studies about osteogenic potential of bone marrow in
Viet Nam. Mesenchymal stem cells (MSCs) are responsible for osteogenic capacity
of bone marrow. So, to assess quantity of Vietnamese MSCs, we culture bone
marrow and count fibroblast colony forming units (CFU-Fs).
Material and results: Average 2ml of non-infected bone marrow is mixed with
500IU heparin and cultured in medium IMDM, 15% FBS and antibiotic. Giemsa
stain is used and CFU-Fs is counted after 7 days. Twenty individuals are enrolled
in this study. After isolated, average concentration of nucleated cells is
43.9x106/ml. After 7 days of culture, average of CFU-Fs reaches 79.95.
ĐẶT VẤN ĐỀ
Khả năng tạo xương của tủy xương đã được Goujon nêu lên từ năm 1869[2]. Các
thực nghiệm tế bào – sinh hóa, thực nghiệm ứng dụng của tủy xương trên động vật
thí nghiệm, cũng như một số các nghiên cứu trên tủy người cho thấy tủy xương có
tính chất tạo xương. Tủy xương bao gồm nhiều loại tế bào, trong đó có tế bào gốc
dòng tạo máu và tế bào gốc trung mô. Các tế bào gốc trung mô là các tế bào trong
thành phần mô đệm của tủy xương. Các tế bào này biệt hóa thành nhiều kiểu hình
tế bào khác nhau, trong đó có các tiền tế bào tạo xương. Nhờ các tế bào này mà
tủy xương có tính chất tạo xương. Để đánh giá số lượng của tế bào gốc trung mô
trong tủy, cần cấy tủy và đếm số lượng các đơn vị tạo khúm nguyên bào sợi
(CFU-Fs) sau khi nuôi cấy. Và do đó số lượng CFU-Fs đặc trưng cho khả năng tạo
xương của tủy. Ở Việt Nam, chưa thấy một báo cáo nào nghiên cứu đặc điểm của
tủy xương liên quan đến tính chất tạo xương của tủy, cụ thể là đếm số lượng CFU-
Fs. Nhằm rút ra đặc điểm tủy xương liên quan đến tính chất tạo xương ứng dụng
trong ngành chấn thương chỉnh hình, so sánh với một số y văn thế giới, chúng tui
tiến hành nghiên cứu nuôi cấy tủy xương và đếm số lượng CFU-Fs.
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Có 20 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu. Các bệnh nhân này là các bệnh nhân
chấn thương cơ quan vận động có phẫu thuật và được chọn ngẫu nhiên trong số
các bệnh nhân của Khoa Chấn Thương Chỉnh Hình bệnh viện Chợ Rẫy. Trong lúc
bệnh nhân đang được mổ, 2ml tủy xương được lấy từ mào chậu trước. Dùng kim
chọc tủy chọc vào mào chậu hút ra 1 ml tủy, thay đổi vị trí đầu kim đến nơi khác
trong mào chậu và hút thêm 1ml tủy. Cả 2ml tủy được cho vào ống nghiệm vô
trùng có pha sẵn 500IU heparin để chống đông. Sau đó tủy được đưa về phòng thí
nghiệm và xử lý trong vòng 4 giờ sau khi lấy. Tại đây, tủy được ly tâm tách và
đếm tế bào có nhân. Thành phần tế bào được cấy vào môi trường IMDM, 15%
FBS, có pha kháng sinh để chống nhiễm khuẩn. Sau 7 ngày, khi các khúm tế bào
mọc thấy rõ, mẩu cấy sẽ được nhuộm giemsa để quan sát và đếm khúm tế bào.
Mỗi khúm tế bào được xem là một CFU-F khi khúm phát triển được nhiều hơn 50
tế bào.
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Kết quả phân lập tế bào và đếm CFU-Fs được cho trong bảng 1
Kết quả phân lập tế bào
Nồng độ tế bào có nhân biến thiên rất lớn từ 10x106 đến 160x106 tế bào trên mỗi
ml tủy. Nồng độ tế bào trung bình trong mỗi ml tủy bằng 43,9X106 với độ lệch
chuẩn là 41,2X106. Theo nghiên cứu của Major và cộng sự thì trung bình mỗi ml
tủy hút ra từ mào chậu người khỏe mạnh có chứa 46 32,5x106 tế bào có nhân[3].
So sánh hai giá trị trung bình cho thấy kết quả của chúng tui không khác biệt với
kết quả của Major (p<0,05). Đối với nghiên cứu của Hernigou, số lượng tế bào có
nhân trong tủy của các bệnh nhân khớp giả xương chày chỉ 187x106 [1]. Số liệu
này có thể là do các bệnh nhân bị khớp giả thường có số tế bào tủy ít hơn, hay
cũng có thể do cách lấy tủy của tác giả này là chích hút mỗi nơi đầu kim trong
cánh chậu đến 4ml tủy.
Kết quả đếm số CFU-Fs
Số CFU-Fs cũng biến thiên rất rộng từ 29 đến 156, trung bình là 79,95. Độ lệch
chuẩn là 73,2. So với nghiên cứu của Seebach và cộng sự thì ở nam giới khỏe
mạnh, số CFU-Fs đếm được là 5417[4]. Như vậy theo cách lấy tủy và môi
trường cấy của chúng tôi, số CFU-Fs đạt được nhiều hơn. Cũng theo nghiên cứu
của Seebach thì ở những bệnh nhân đa thương sẽ cho kết quả số CFU-F lớn hơn
(59rong khi đó theo kết quả của Hernigou thì có thể đếm được 612
CFU-Fs trên mỗi cm3 (12-1224) sau 10 ngày nuôi cấy tủy. Số lượng tế bào có
nhân ít hơn nhưng thu được nhiều CFU-Fs hơn. Điều này cho thấy sự khác biệt là
do môi trường cấy và thời gian cấy, chứ không liên quan đến cách lấy tủy.
Liên quan giữa số lượng tế bào có nhân và số CFU-Fs
Dùng bảng ANOVA phân tích phương sai 1 yếu tố thì kết quả của chúng tui
không thấy có mối liên hệ giữa số lượng tế bào có nhân và số lượng CFU-Fs đếm
được (p=0,11). Hernigou ghi nhận có thể thu được 1 CFU-F trong 3x104 tế bào có
nhân của tủy xương, rong khi đó chúng tui chỉ thu được trung bình là 1 CFU-F
trong 53,6x104 tế bào có nhân.
Liên quan giữa số CFU-Fs và tuổi, giới
Bằng cách tương tự không thấy mối liên hệ giữa số CFU-Fs so với tuổi (p=0,9) và
với giới tính (p=0,88).
Bảng 1: Kết quả phân lập tế bào và đếm số CFU-Fs
STT Năm sinh Giới tính Thể
tích
mẫu
(ml)
Mật
độ
tb/ml
(X107)
Số CFU-FS
1 1965 Nữ 2,5 5,5 138
2 1985 Nam 2,0 3,2 85
3 1959 Nam 2,0 6,9 120
STT Năm sinh Giới tính Thể
tích
mẫu
(ml)
Mật
độ
tb/ml
(X107)
Số CFU-FS
4 1940 Nam 2,0 2,5 50
5 1952 Nam 2,0 1,5 82
6 1930 Nam 2,0 8,0 110
7 1975 Nam 2,0 16,0 93
8 1956 Nam 2,0 1,2 45
9 1981 Nữ 2,0 11,6 89
10 1989 Nam 2,0 1,0 29
11 1990 Nữ 2,0 2,2 34
12 1990 Nam 2,0 4,6 156
13 1969 Nam 2,0 3,0 142
14 1957 Nam 2,0 1,5 44
15 1985 Nam 2,0 10,0 76
STT Năm sinh Giới tính Thể
tích
mẫu
(ml)
Mật
độ
tb/ml
(X107)
Số CFU-FS
16 1965 Nam 2,0 2,5 70
17 1974 Nữ 2,0 1,5 52
18 1960 Nam 2,0 2,0 46
19 1975 Nam 2,0 1,3 62
20 1954 Nữ 2,0 1,8 76
0,94,48,3179,95
Một số hình ảnh nuôi cấy:
Mẫu sau 1 ngày nuôi Mẫu sau 3 ngày nuôi
Mẫu sau 7 ngày nuôi Mẫu sau ngày nuôi. Nhuộm Giemsa
KẾT LUẬN
Chúng tui xây dựng được qui trình thu nhận tế bào trung mô tủy xương rút ra từ
mào chậu. Kết quả mỗi ml tủy trung bình chứa 43,9x106 tế bào có nhân. Sau khi
cấy 7 ngày đếm được 79,95 CFU-Fs.

---