Bộ Nông nghiệp và PTNT Chính phủ Úc
AusAID 014/07VIE

DỊCH TẢ HEO
PHÁT TRIỂN VẮC XIN DỊCH TẢ HEO MỚI

MS7: BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT
Chris Morrissy
Ngày kết thúc (ban đầu)
03/01/2010
Ngày kết thúc (chỉnh sửa)

Giai đoạn báo cáo Cơ quan liên hệ

Tại Úc: Trưởng chương trình

Tên
Chris Morrissy
Điện thoại: + 61 3 5227 5000
Vị trí
Chuyên viên vi rút, AAHL
Fax: + 61 3 5227 5555
Cơ quan
AAHL, PMB 24, Geelong, VIC 3220,
Úc
Email:

Tại Úc: Cơ quan điều hành

Tên
Chris Morrissy
Điện thoại: + 61 3 5227 5000
Vị trí
Cán bộ quản lý
Fax: + 61 3 5227 5555

Việc tiêm phòng để phòng ngừa bệnh DTH là một biện pháp chung của người chăn nuôi
heo ở Việt Nam, tuy nhiên bệnh DTH vẫn còn là nguyên nhân gây nhiều thiệt hại về kinh
tế cho người chăn nuôi heo cả ở mức độ chăn nuôi tập chung và chăn nuôi cá thể. Hiện
nay việc sản xuất vắc xin DTH tại Việt Nam dựa vào việc gây bệnh thực nghiệm trên
động vật thí nghiệm và đây là nguyên nhân dẫn đến sự thiếu ổn định trong sản xuất vác
xin và khó kiểm soát chất lượng của vác xin khi sản xuất bằng phương pháp này.

Dự án tập trung phát triển vắc xin DTH thích ứng trên tế bào nhằm mục đích tăng khả
năng cung cấp và đảm bảo chất lượng vắc xin sản xuất trong nước. Hơn nữa, vì có ảnh
hưởng đến kinh tế và xã hội nên việc cần thiết phải xây dựng những qui trình tiêm chủng
vác xin phù hợp với những điều kiện riêng của Việt Nam và như vậy sẽ tạo điều kiện
thuận lợi cho việc phòng chống bệnh DTH ở Việt Nam.

Mục đích chính của chương trình:
1. Phát triển vắc xin DTH trên tế bào cho phép sản xuất vắc xin giá rẻ với chất lượng
cao.
2. Nâng cao khả năng chẩn đoán bệnh của các phòng thí nghiệm tại Việt Nam để
tăng cường kiểm soát bệnh DTH.
3. Góp phần giáo dục và đào tạo thú y viên, chủ trại chăn nuôi quy mô nhỏ biết cách
sử dụng hiệu quả vắc xin DTH trên tế bào.

Việc thực hiện thành công các mục tiêu của dự án sẽ nâng cao khả năng kiểm soát bệnh
DTH tại Việt Nam, đem lại lợi ích thiết thực đặc biệt cho ngành chăn nuôi heo công
nghiệp và hộ gia đình.

3. Tóm tắt quá trình thực hiện

Vắc xin DTH nhược độc chủng C được dùng để kiểm sóat và phòng ngừa bệnh DTH trên
tòan thế giới. Tại Việt Nam, vắc xin DTH chủng C được sản xuất theo phương pháp dùng
thú thí nghiệm [thỏ và bê] và điều này gặp những khó khắn về cung cấp số lượng động

6,0
TCID
50
/ml.

Sau khi thích ứng vi rút trên tế bào PK-15A, hàm lượng vi rút vẫn giữ ổn định trong
khoảng 10
6,0
TCID
50
/ml và việc thích ứng này có liên quan đến những thay đổi về gen
giữa vi rút thích ứng trên tế bào và vi rút gốc thích ứng trên động vật. Đặc biệt, việc thích
ứng thành công trên tế bào PK-15A liên hệ với giảm độ đồng nhất trình tự nucleotide gen
E2, với sự đồng nhất là 99,5% so với vi rút gốc. Như đã theo dõi qua quá trình chuẩn độ
vi rút, tính ổn định về di truyền được xác định từ đời tiếp đời thứ 9 đến các đời tiế
p đời
tiếp theo.

Ảnh hưởng của những thay đổi về mặt di truyền của vi rút vác xin DTH sau khi thích ứng
trên tế bào PK-15A đã được nghiên cứu thêm liên quan đến những thay đổi có thể xảy ra
so với vi rút vác xin gốc về mặt an toàn và hiệu lực của vác xin. Sự so sánh trực tiếp độc
lực của giữa vi rút vác xin DTH gốc và vi rút vác xin DTH thích ứng trên tế bào bằng
cách kiểm tra trên thỏ cho thấy không có sự khác biệt về độc lực khi theo dõi triệu chứng
lâm sàng, nhiễm vi rút huyết và tạo đáp ứng miễn dịch.

Thêm vào đó, thử nghiệm được thực hiện ở NAVETCO liên quan đến hiệu lực vắc xin
chứng minh khả năng bảo vệ chắc chắn cho heo được tiêm phòng vắc xin DTH sản xuất
trên tế bào và không có sự bài xuất hay nhân lên của vi rút độc lực cao sau khi công
cường độc cho heo được miễn dịch. 100% heo được tiêm phòng tạo kháng thể tồn tại ít
nhất 24 tuần.

Thêm vào đó, các dòng tế bào và các lô giố
ng vi rút sản xuất ra trong quá trình thích ứng
vi rút vác xin DTH trên môi trường tế bào PK-15A đã được kiểm tra chất lượng trong hệ
thống đảm bảo chất lượng nội bộ đã được công nhận. Điều này cũng nhờ vào hoạt động
tập huấn sớm thực hiện bởi AAHL và như vậy cho phép sau đó phát triển thành công khả
năng trong việc nuôi cấy tế bào và tăng năng lực chuẩn đoán bệnh DTH c
ủa NAVETCO.

• Thích ứng vi rút DTH chủng C trên nhiều dòng tế bào

Vi rút DTH chủng C hiện đang được sử dụng trong sản xuất vắc xin DTH dùng thú thí
nghiệm tại NAVETCO đã được chọn như là giống gốc để thích ứng và phát triển trên
môi trường tế bào. Như đã đề cập ở trên, nghiên cứu thăm dò tại AAHL cho thấy tế bào
dòng PK-15A thích hợp cho vi rút DTH nhân lên hơn dòng tế bào ST hay LT. Do đó,
những cố gắng sau đó ở NAVETCO đã tập trung thực hiện việc thích ứng và nghiên cứu
đặc tính của vi rút DTH chủng C trên tế bào dòng PK-15A.

Việc thích ứng thành công vi rút DTH chủng C qua các lần cấy chuyển trên tế bào PK-
15A đã được chứng minh rõ ràng sau khi được xác định bằng phản ứng hóa mô miễn dịch
đặc hiệu như chỉ ra trong phụ lục 1. Đặc biệt, sự thích ứng thành công qua các lần cấy
chuyển trên tế bào PK-15A tại NAVETCO đã kèm theo với sự tăng lên liên tục số lượng
vi rút thông qua kết quả chuẩn độ vi rút, từ 10
2,23
TCID
50
/ml ở lần cấy chuyển thứ 1 tăng
lên ổn định khoảng 10
6,33
TCID
50

sau khi tiêm vác xin sản xuất bằng chủng thích ứng này.

Kết quả nghiên cứu của NAVETCO cho thấy heo tiêm vắc xin DTH sản xuất trên tế bào
không bài xuất vi rút và vắc xin này có độc lự
c giống như vác xin được sản xuất dùng
giống gốc (thích ứng trên thỏ) phụ lục 5.

Hiệu lực và khả năng tạo kháng thể sau khi tiêm vắc xin DTH sản xuất trên tế bào đã
được nghiên cứu. Kết quả thử nghiệm tiến hành tại NAVETCO liên quan đến hiệu lực
vắc xin thông qua xác định các chỉ tiêu như: triệu chứng lâm sàng, nhiễm vi rút huyết,
bài xuất vi rút và đo hàm lượng kháng thể khi công cường độc cho ở 21 ngày sau khi
tiêm vác xin được trình bày trong Phụ lục 6.

Ý nghĩa quan trọng là heo tiêm vác xin được bảo hộ hòan tòan sau khi công cường độc
với vi rút DTH có độc lực chuẩn và quan sát trên các heo miễn dịch được công độc không
thấy có sự nhân lên của vi rút cường độc hoặc bài thải vi rút. Thêm vào nữa, 100% heo
được tiêm vắc xin có đáp ứng miễn dịch và miễn dịch được xác định ở ngày thứ 2 sau khi
tiêm vác xin sau đó tăng có ý nghĩa và duy trì trong 24 tuần. [Phụ lục 6].

Tóm lại những số liệu thu nhận được chứng minh cơ sở của việc thích ứng thành công và
sự ổn định của vi rút DTH chủng C thích ứng nuôi cấy trên tế bào PK 15A. Đặc biệt tính
an tòan và hiệu lực của vác xin cũng đã được xác nhận và đây là cơ sở để sử dụng vác xin
này.

• Quy trình phòng thí nghiệm

Báo cáo trước đó cho thấy khả năng thành công và phát triển bền vững của kỹ thuật nuôi
cấy tế bào và phù h
ợp với đòi hỏi về đảm bảo chất lượng tại NAVETCO.


Việc thành công sớm về khả năng cấy chuyển được vi rút nuôi cấy trên tế bào, cũng như
tăng cường được khả năng chẩn đóan bệnh DTH ở NAVETCO đã tạo thuận lợi cho việc
hòan thành các giai đoạn của dự án. Đặc biệt, NAVETCO đã thích ứng thành công vi rút
vắc xin DTH chủng C trên tế bào PK-15A theo tiêu chuẩn đảm bảo chất lượng và đã xác
định được đặc tính của vi rút thích ứng này trong điều kiên in vitro và in vivo.

Vắc xin sản xuất trên tế bào đạt được hàm lượng khoảng 10
6,0
TCID
50
/ml và các lô giống
gốc đã được sản xuất đảm bảo chất lượng và đã kiểm tra đạt các tiêu chuẩn. thêm.

Quá trình giải mã gen của vi rút vắc xin thích ứng tế bào cho thấy sự khác biệt nhỏ trình
tự nucleotide qua quá trình thích ứng và cấy chuyển trên tế bào PK-15A. Tuy nhiên,
không có sự khác biệt khi so sánh độc lực giữa vi rút vắc xin gốc so với vi rút thích ứng
trên tế bào khi thử nghiệm trên thỏ.

Hơn thế nữa, thử nghiệm được tiến hành tại NAVETCO về hiệu lực cho thấy khả năng
bảo vệ hoàn toàn của heo được tiêm vắc xin DTH sản xuất trên tế bào , không có sự nhân
lên và bài xuất vi rút cường độc sau khi công cường độc cho heo tiêm vác xin. 100% heo
tiêm phòng tạo kháng thể.

Vắc xin DTH sản xuất trên tế bào có tính hiệu lực và an toàn Các lô giống đạt chất lượng
đã được sản xuất với mục đích để sản xuất vác xin đạt an tòan, hiệu lực khi cần thiế
t.