TS: Ngô Đại Nghiệp
Lớp: SHO7B1
Nhóm 4 MSSV


Nguyễn Đinh Diễm Thụy
30700514

Huỳnh Thị Lệ Phương 30760857

Nguyễn Anh Tôn 30700536

Trần Quốc Nhẫn 30700342

Đỗ Minh Trí 30760942

Sự tinh sạch của protein rất quan trọng vì từ protein
tinh sạch chúng ta có thể xác định được trình tự acid
amin, mối liên hệ về tiến hóa giữa các protein trong
những cá thể khác nhau và khảo sát các chức năng
sinh hóa của các protein đó.

Để tinh sạch protein, người ta thường dựa vào
các đặc điểm tương đồng và các tính chất khác nhau
vốn có của nó.

Trong một số trường hợp, để dễ dàng hơn cho việc
tinh sạch, người ta gắn vào protein một đuôi acid
amin (tag) - tạo ra dạng protein dung hợp (fusion
protein).


lớp phẳng lên cột; sau đó, tiến hành sắc ký.
Phương pháp sắc ký dựa vào sự phân bố
khác nhau của các chất giữa hai pha động
và tĩnh. Có nhiều nguyên nhân đưa đến sự
phân bố khác nhau của các chất, nhưng
chính sự lặp đi lặp lại hiện tượng hấp phụ -
phản hấp phụ của các chất khi dòng pha
động chuyển động qua pha tĩnh là nguyên
nhân chủ yếu của việc tách sắc ký.
K=Cs/Cm=Nồng độ của hợp chất trong pha
tĩnh/Nồng độ của hợp chất trong pha động.

Dụng cụ:

Cột sắc kí ( giống như cái buret), gồm 1 ống thủy
tinh và 1 cái khóa, nhưng không cần vạch chia độ,
kích thước lớn hoặc nhỏ tùy yêu cầu sử dụng

Chất nhồi cột (pha tĩnh, stationary phase, thường
dùng silicagel,) Chất nhồi cột quyết định quá trình
sắc kí.

Dung môi: thông thường chọn dung môi phụ thuộc
vào chất nhồi cột.
Thực hiện:
Bước 1 là nhồi cột: Sau khi đã chọn cột, làm khô và
cân silicagel cần dùng, pha dung môi chạy hệ rồi thì

trước hết sẽ bị giữ lại ở phần
trên của cột. Sau đó cho dung dịch rửa (thường
là dung môi hoà tan các cấu tử) chảy qua cột.
Lúc đó các cấu tử bị giữ ở phần trên của cột sẽ
bị dung môi “rửa” và đưa dẫn xuống phía dưới.
Cấu tử A có ái lực với cột nhỏ hơn B nên chuyển
động xuống phía dưới nhanh hơn B.

Trong phương pháp rửa đẩy, sau khi đưa
mẫu vào cột, ta cho chảy qua cột một dung
dịch rửa chứa chất có ái lực với pha tĩnh lớn
hơn các cấu tử cần tách. Các cấu tử cần tách
sẽ bị chuyển dần xuống phía dưới khi ta tiến
hành quá trình rửa cột và tuần tự thoát ra
khỏi cột. Cấu tử thoát ra khỏi cột đầu tiên là
cấu tử tương tác với pha tĩnh yếu nhất, sau
đó dần dần đến các cấu tử có ái lực với cột
mạnh dần.
V. PHÂN LOẠI CÁC
PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ:
Pha tĩnh: có thể là chất rắn hoặc chất
lỏng.

Pha tĩnh là chất rắn : thường là alumin
hoặc silica gel đã được xử lý, nó có thể
nạp nén vào trong một cột

Pha tĩnh là chất lỏng: có thể là một
chất lỏng được tẩm lên bề mặt một
chất mang rắn hoặc một chuỗi dây

mịn, có tính trơ, được nhồi trong một cái ống.
bản thân hạt rắn là pha tĩnh, pha tĩnh thường sử
dụng là những hạt silica gel hoặc alumin.
Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange
chromatography)

Pha động chỉ có thể là chất lỏng.

Pha tĩnh là chất rắn, là những hạt hình cầu rất
nhỏ, có cấu tạo hóa học là polymer nên gọi là
hạt nhựa. Bề mặt của hạt mang các nhóm chức
hóa học ở dạng ion. Có hai loại nhựa: nhựa
trao đổi anion và nhựa trao đổi cation.


Sắc ký lọc gel ( Size exclusion
chromatography; gel filtration
chromatography)

Pha động chỉ có thể là chất lỏng.

Pha tĩnh là chất rắn, đó là những hạt
hình cầu bằng polymer, trên bề mặt có
nhiều lỗ rỗng.