41
Bảng 4.2: Đặc điểm sinh hóa của các chủng L. sporogenes phân lập đƣợc từ chế phẩm

Glucose
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Sucrose
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
Mannito
l
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Maltose
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Sorbitol
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Di động
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

hợp với tính chất sinh hóa của vi khuẩn L. sporogenes.

4.5. Khả năng sinh acid lactic
4.5.1. Định tính
Từ 20 chủng L. sporogenes đã thử sinh hóa, chúng tôi tiếp tục tiến hành xác định
khả năng sinh acid lactic của chúng. Kết quả ghi nhận đƣợc trình bày ở Bảng 4.3.
Bảng 4.3 Khả năng sinh acid lactic của các chủng L. sporogenes đã thử sinh hóa
Số chủng thử
nghiệm
Số chủng có khả năng sinh acid lactic
20
Số lƣợng
Tỷ lệ (%)
20
100

Dựa vào Bảng 4.3, chúng tôi nhận thấy 20 chủng phân lập đƣợc đều có khả năng
sinh acid lactic. Để đánh giá thêm về lƣợng acid lactic do L. sporogenes sản xuất, chúng
tôi tiếp tục tiến hành thí nghiệm đo độ chua Therner và định lƣợng acid lactic. Hình 4.3: Phản ứng lên men một số loại đƣờng của vi khuẩn L. sporogenes

43 4.5.2. Định lƣợng
Sau khi thực hiện nuôi cấy các chủng L. sporogenes phânlập đƣợc trong môi trƣờng
sữa đặc có đƣờng, chúng tôi nhận thấy: tất cả 20 chủng đều có khả năng làm đông vón
sữa. Từ giá trị độ chua thu nhận đƣợc, chúng tôi tính đƣợc lƣợng acid lactic do các chủng

4
2
20
0,18
5
1,9
19
0,171
6
2
20
0,18
7
2
20
0,18
8
2,2
22
0,198
9
1,9
19
0,171
10
2,5
25
0,225
11
2

19
3,8
38
0,342
20
3,2
32
0,288

Qua bảng 4.4, chúng tôi nhận thấy độ Therner biến động từ 1,6 - 3,8 tƣơng ứng với
lƣợng acid lactic do vi khuẩn L. sporogenes sinh ra là 0,144 - 0,342 g/100ml. Loài
Lactobacillus khác nhƣ L. bulgaricus sản xuất đƣợc 0,684 g acid lactic/100 ml dịch sữa
10% đƣợc lên men ở 37
0
C/5 giờ [1]. Nhƣ vậy, 20 chủng vi khuẩn L. sporogenes chúng tôi
đang khảo sát có khả năng sinh acid lactic nhƣng yếu hơn những loài Lactobacillus khác.
Nguyên nhân của điều này có thể vì điều kiện nuôi cấy hay lên men chƣa phù hợp hay vì
đặc tính di truyền của các chủng L. sporogenes đang khảo sát. Ngoài ra, chúng tôi không
tìm thấy một tài liệu nào ghi nhận rõ ràng về lƣợng acid lactic mà vi khuẩn L. sporogenes
sinh ra.

45
Trong 20 chủng khảo sát, chúng tôi nhận thấy 3 chủng 16, 19, 20 có khả năng sản
xuất acid lactic mạnh nhất. Khả năng tạo acid lactic có ý nghĩa nhất định trong việc ứng
dụng vi khuẩn L. sporogenes làm chế phẩm. Acid lactic giúp vi khuẩn L. sporogenes ức
chế những vi khuẩn gây bệnh trong đƣờng ruột vật chủ và mang những lợi ích về mặt sinh
lý cho vật chủ (xem mục 2.2.5.1. phần 2). Vì vậy, chúng tôi chọn 3 chủng 16, 19, 20 để
tiếp tục khảo sát khả năng tạo bào tử, từ đó có thể khảo sát tiếp sự tồn tại của bào tử khi
trộn vào chế phẩm.
4.6. Khảo sát khả năng hình thành bào tử

(N)
LogN
16
X

1,43.10
11
11,14
1,48.10
11

11,16
1,6.10
11

11,20
1,82.10
11

11,23
SD

0,09

0,09

0,05

0,18
CV%


0,21

0,18

0,10
CV%

0,28

1,89

1,58

0,92
20
X

1,74.10
11
11,22
1,99.10
11

11,28
1,93.10
11

11,27
2,13.10

(P>0,05). Tuy nhiên, trong bảng ghi nhận sự khác biệt giữa các chủng (xem phụ lục 7.2),
chúng tôi nhận thấy chủng 19 có khả năng tạo bào tử nhiều hơn chủng 16. Sự khác biệt
không đáng kể nên có thể quy cho sai số trong lƣợng sinh khối thu đƣợc lúc đầu. Ngoài
ra, mức độ ý nghĩa về sự tƣơng tác giữa các yếu tố khảo sát đều lớn hơn 0,05 (xem phụ
lục 7.1) nên có thể kết luận rằng không có sự tƣơng tác giữa các yếu tố này lên khả năng
hình thành của bào tử.
Từ kết quả trên, chúng nhận thấy rằng để sản xuất bào tử vi khuẩn L. sporogenes
nhằm trộn vào chế phẩm, có thể sử dụng môi trƣờng GYE hay MRSA đều đƣợc. Tuy
nhiên, môi trƣờng GYE có thành phần đơn giản và ít tốn chi phí hơn môi trƣờng MRSA.
Ngoài ra, để tiết kiệm thời gian, ta nên sử dụng điều kiện nhiệt độ - thời gian hóa bào tử là
50
0
C/2 giờ rồi chuyển qua 70
0
C/2 giờ sau khi đã nuôi sinh khối ở 37
0
C/2 ngày thay vì
nuôi cấy tạo bào tử ở 37
0
C/6 ngày.

48
PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO

TIẾNG VIỆT

1. Lý Thành Kiệt, 2002. Bước đầu nghiên cứu phân lập và nhân giống 2 chủng vi
khuẩn Lactic Streptococcus thermophilus và Lactobacillus bulgaricus để cung cấp
giống cho chế biến yogurt ở quy mô nhỏ. Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ
thực phẩm, Đại học Nông Lâm, TP. Hồ Chí Minh, Việt Nam.

2. Lã Văn Kính, 1998. Những tiến bộ khoa học kỹ thuật trong công nghệ sản xuất
thức ăn gia súc và vai trò của probiotic đối với động vật. Báo cáo khoa học, Trung
tâm Thông tin khoa học và công nghệ, Sở khoa học công nghệ và môi trƣờng
49
11. Gandhi, A.B. and Nagarathnam, T., 1990. Probiotics for veterinary use. Poultry
Guide, 27(3) : 43-47.

12. Gandhi, A.B., 1995. Personal communication.

13. Gandhi, A.B., 1998. Lactobacillus sporogenes, an advancement in Lactobacillus
therapy. The Eastern Pharmacist, 41-43.

14. Gilliland, S.E. and Speck, M.L., 1977. Deconjugation of bile acids by intestinal
lactobacilli. Appl. Environ. Microbiol. 33 :15.

15. Gould, G.W. and Hurst, A., 1969. The bacterial spore. Academic Press.

16. Gorbach, S.L., l990. Lactic acid bacteria and human health. Annals of Medicine
22:37-41.

17. Hepner et al., 1979. Hypercholesterolemic effect of yogurt and milk. Am.J. Clin.
Nutr. 32:19-24.

18. Hosono et al., 1987. Antimutagenic activity of cellular component of Streptococcus
faecalis IFO 12965. Netherlands Milk and Dairy Journal, 41: 239-45.

19. Johansson et al., 1993. Administration of different Lactobacillus strains in
fermented oatmeal soup: in vivo colonisation of human intestinal mucosa and
effect on the indigenous flora. Applied and Environmental Microbiology, 59: 15 –
20.


documentation. Food Review International 13 (2): 293 – 313.

30. Scott et al., 1990. Lactobacillus . The Pharmaceutical Journal Nov. 24 608-610.

31. Shahani, K.M. and Ayebo, A.D., 1980. Role of dietary lactobacilli in
gastrointestinal microecology. Am. J. Clin. Nutr. 33,2448-2457.

32. Tannock, 1997. Probiotic properties of lactic acid bacteria: plenty of scope for
fundamental R&D. Trends in Biotechnology 15 (7): 270 – 274.

33. Wood, B.J.B, 1992. The Lactic Acid Bacteria in Health and Disease, Vol. 1, p
394., Elsevier Applied Science.

34. Zamfir et al, 1999. Purification and charaterization of a bacteriocin produced by
Lactobacillus acidophillus IBB. Journal of Applied Microbiology, 87 (6): 923 –
931.

35. www.lactospore.com/back2.htm

36. www.microbax.com/lactobacillus.htm

37. www.natura.org.uk/naturaflora.htm

38. www.pharmedmedicare.com/lactopure.html

39. static.highbeam.com/a/alternativemedicinereview/august012002/lactobacillussporo
genesmonograph/index.html

40. Analysis of Lactospore®
: