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(4) 
2.3 Nội dung nghiên cứu
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3. 
3.1 Đối tượng nghiên cứu
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3.2 Phạm vi nghiên cứu
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(iii) HoPME c khi s dbt
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(Bell et al., 1950).
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(Duvetter, 2007).
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2.1.2 Thiết bị, hoá chất
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2.2.2 Phương pháp phân tích và đo đạc
i. Phần phân lập và tuyển chọn chủng A. niger đặc hiệu đối với PME
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1991).

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(Sharma et al., 2011).
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iv. Phương pháp tính toán, đánh giá hiệu quả tinh sạch sơ bộ chế phẩm PME
kỹ thuật
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3.2.3 Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
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3.1.1 Phân lập và xác định đặc điểm hình thái các dòng nấm có đặc tính giống
A. niger trên các loại quả giàu pectin
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Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau ở cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt thống theo phép thử
Duncan ở độ tin cậy 95%
3.1.3 Bước đầu định danh một số dòng A. niger đã phân lập bằng kỹ thuật sinh
học phân tử
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-  N
1
 l 100% vi A. niger 

 : Aspergillus niger T
1
, N
1
, R
1






V qu i
75,61 




* Độ DE được xác định trên mẫu khô có độ ẩm 4 ± 1%
T kt qu c  bng 3.4  nhn th
   trong khi pectin thu nhn t v qu i   DE cao
(84,77%), cho thy trin vng ca vic s dt cho
ng hp PME t nm mc A. niger. Mt v c
ng protein trong v qu 
 i t l protein t

cn thit cho hong ca nm mc. Kt qu n s kt hp ca
 qu citrus nhm ci thi
3.2.2 Ảnh hưởng của thành phần môi trường đến quá trình sinh tổng hợp PME
S   cht, ngun dinh
ng b sung n hiu qu c kh
t qu t  ng 3.5, 3.6, 33.8 vi
 t ct biu th s   tin
cy 95%, kt qu m th hin hot so vi.
3.5PME 
Ngut
T l kt hp



5:5
7,77
de
 0,62

4:6
7,13
cd

 qu i
8:2
8,85
f


7:3
10,34
gh


6:4
11,14
h


5:5
13,17
i

1,5%
16,87
g


2,0%
2,87
a

MgCl
2
0,25%
4,05
b


0,5%
16,55
g


0,75%
15,47
f


1,0%

c kt hp c
Ho,U/g
M ci thin hot t,ln
i chng
12,78
a

1
KCl 1,5% + MgCl
2
0,5%
20,16
b

1,58
KCl 1,5% + CaCl
2
1,5%
19,44
b

1,52
MgCl
2
0,5% + CaCl
2
1,5%
21,55
c


0,15%
25,82
c

0,20%
23,46
b

(NH
4
)
2
SO
4
0,05%
23,16
b

0,10%
25,27
c
 0,21
0,15%
26,14
c

0,20%
25,93
c



2
; 1,5% CaCl
2

 A. niger 
PME 27,87

 
3.2.3 Tác động của một số điều kiện lên men đến hiệu quả thu nhận PME


 u cn  hai yu t ng ln n
kh ng hp enzyme t vi sinh vt (Tewari et al., 2005). Tuy
u chnh  i  n hiu qu
thu nhn PME. Dnghim nh
ng ca viu chu cn pH 4,0 (Joshi
et al., 2006) bng 3 loi dung dch m citrate, citrate phosphate,
acetate) n hoc thc hin, kt qu tng hp  bng 3.9.
g 3.9
A. niger
Dung dm pH 4,0 s dng
HoPME (U/g)
m citrate
41,17
c

m citrate phosphate
34,10
b

 pH ca dgim dn,  i gian c bit
n 0  120 gi  u gim mnh sau
48 gi  (bng 3.10 hic t ng ca nm m
tng hp PME.
15,21c
0,36a
0a
12,80c
22,88d
41,16e
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0 24 48 72 96 120
Thời gian ủ (giờ)
Hoạt tính PME (U/g)

 3.5 A. niger

3.10:  theo 
Thi gian  (gi)
Pectin (%)

5,61
c

73,58
d

3,28
b

65,15
b

72
3,78
bc

70,46
c

2,96
a

68,54
c

96
1,67
ab

57,63

ng hp pectinase t A. awamori (Suresh et al., 2009),
t l huy nm s dng, viu ch m u ca 
   ng l
Trong khnh ha 4
, bao gm t l huy nm s dng X
1
(12  20% v/w), pH ban
u cng X
2
  X
3
 m u
ng X
4
n ho PME thu nhn (Y, U/g) c thc hin.
Ma trn thit k  mng (RSM) v
phc hp t(CCD) c thit lp vi 5 m khng mi bin
 7 .
Dt qu i quy th hin s 
cu kin hoc thit l d
d u qu sinh tng hp PME. Hot)
nh bn v th3.1) sau:
Y = -3331,94 + 66,60 X
1
+ 323,06 X
2
+ 73,38 X
3
+ 31,34 X
4

-
0,18X
3
X
4
- 0,23X
4
2
(R
2
= 0,989) (3.1)

Kt qu  3.1) cho thy,  khu ng n
 mng SSF sinh tng hp PME t A. niger. H
s tng quan R
2
= 0,989 cho bit 98,9% s bin i honh
hng cn c lp X1, X2, X3 4  1 % s thay 
yu t nh  Ba  th biu dia
 kh  i   n ho
thu nhc th hin  3.6, 3.7 3.8 y, tt c  kho
ng thn hoa PME thu nhn.
3.6: T
 
 

(cố định độ ẩm và pH ban đầu

Du ng ca viu chu cng
  n   ng hp PME, dung d c s d
. u t n hiu qu 
men, bao gm pH ca dung dm citrate s dng, t l dung d
, nhi c kht qu
c th hin  bng 3.11, 3.12 3.9.
3.11ly
 ME
 pH ca dung
d
Ho
(U/g)
3,2
42,86
d

3,6
66,71
f

4,0
64,14
e

4,4
30,43
c

4,8
29,14

d

2 : 1
417,12
e

2,5 : 1
415,31
e

3 : 1
278,95
c
 6,79
3,5 : 1
200,07
b

Các giá trị có mẫu tự đi kèm giống nhau trong
cùng một cột khác biệt không ý nghĩa về mặt
thống kê theo phép thử Duncan ở độ tin cậy 95%.
V       
       

        

       
     
         
    

A/A
o

L
0
1,00
c
3
1
1,63
d

2
0,29
b

3
0,16
b

4
0
a


L-
0
1,00
a
3

A/A
0
: mức độ thay đổi hoạt tính PME so với mẫu đối chứng.
3.3 PME A. niger So
2
R
1
3.3.1 Tinh sạch sơ bộ PME bằng phương pháp kết tủa kết hợp lọc màng
Hiu qu kt ta PME c t l p nht ca
tng loc th bng 3.14.
Dt qu tng hp  bng 3.14 cho thy vic s dng ethanol vi t l 3: 1
u kip nht t tinh sch
gn 8 ln, hong h10,0U/mg
protein
.
Mc kt tng ethanol (t l i
trong dung dm   th khong
 u 150 rpm.

3.14

kt ta
T l

Ho
(U/mg
protein
)
Hiu sut
thu hi (%)

5,45
c


NaCl


8,37
d


92,60
c


6,67
d


Ethanol
3 : 1 (v/v)

10,02
e


91,48
c



cho thy, PME t A. niger 
t khop vu
 vi sinh vt. Do m
tinh sch enzyme sau l   p,
 vinh pI c
c ti y, vic kho
u t n hozyme
PME t A. niger v
cho vic s d
3.3.2 Một số đặc điểm của chế phẩm PME kỹ thuật từ A. niger So
2
và R
1




.

0 2 4 6 8 10
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18

2: PME sau quá trình kết tủa ethanol, lọc màng
50 kDa
3.10
SDSPME