B GIÁO DO B Y T
I HC HÀ NI
TRN TH THÙY LINH  TÁC DNG
H NG HUYT
CA N N-HEXAN
R CÂY CHÓC MÁU NAM TRÊN MÔ HÌNH
NUÔI CY T 
2
C
12
LUC C HC

HÀ NI, 2013

B GIÁO DC VÀ O B Y T
I HC HÀ NI TRN TH THÙY LINH

TS. Trần Thị Oanh – Cc Khoa hc công ngh o, B
Y t và ThS. Đỗ Thị Nguyệt Quế - B c li hc
Hà Ni, nhi thng dn, ch bo nhi tôi
có th hoàn thành lu
Xin trân trng c          


c gi li ci các thy cô, các anh ch k thut viên B
c li hc Hà N nhit tình và tu
ki tôi thc hin lu
Cuc gi li cc tn bè và
 ng nghip, nh i luôn  bên qu  ng viên tôi trong
nh tôi v mi mt trong sut thi gian hc tp và
thc hin lu
Hà Nội, tháng 8 năm 2013
Học viên
Trần Thị Thùy Linh MC LC

Trang
t v
1
NG Q
2
1.1. Mt vài nét v b
2
1.1.1. 
2

2.4.1.  c t bào C
2
C
12
ca dch chi
23
2.4.2. ng cn kh n glucose ca
t bào C
2
C
12


25
2.4.3. t hóa AMPK ct chit
c t

27
2.5. X lý s li
31
T QU NGHIÊN C
32
3.1. Kt qu t c t bào C
2
C
12
c
32
3.2. Kt qu ng cn kh n glucose
vào t bào C


40
4.1. Kh c t bào C
2
C
12
c
42
4.2. ng ca dch chii vi kh n
glucose vào trong t 
2
C
12


43
4.3. Tác dng hot hóa AMPK ct chic
t 

46
4.3.1. ng c các n n m biu
hin ca p-AMPK và AMPK t

49
4.3.2. ng ca các cht chic t n m biu
hin ca p-

51
KT LU
53

SCC2 và SCC3

38

DANH MC CH VÀ KÝ HIU VIT TT
ACC Acetyl  CoA carboxylase
AICAR 5-aminoimidazole-4-carboxamide--ribofuranoside
AMP Adenosine monophosphat
AMPK Adenosine monophosphat  activated protein kinase
ATP Adenosine triphosphat
CaMKK Calmodulin-dependent protein kinase kinase
CBS cystathionine   synthase
ChREBP Carbohydrate Response Element Binding Protein
CPT1 Carnitin palmitoyltransferase 1
CT Carboxyl transferase
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
DMSO Dimethyl sulfoxid
 ng
FAS Fatty acid synthase
FBS Fetal bovine serum
FFA Free fatty acid

DANH MC CÁC HÌNH V, BI

Trang
ng chuyn hóa glucose chính  b
4
Hình 1.2. Cu trúc phân t AMPK
7
Hình 1.3. AMPK ho oxy hóa acid béo trong ty th
thông qua c ch ACC

11
Hình 1.4. Công thc cu to ca AICAR và mt s hp ch
17
Hình 2.1. Kháng th th c
30
Hình 3.1. Hình nh m biu hin cu p-AMPK, AMPK t-actin
khi  t bào v n khác nhau trong thi gian 60 phút

35
Hình 3.2. S l biu hin ca p-AMPK và AMPK tng so vi
-actin

36
Hình 3.3. Hình nh th hin ng ca SCC1, SCC2 và SCC3
n m biu hin ca p--actin

37
Hình 3.4. Bi th hin m u hin p-AMPK
ca lô t bào  vi mu th so vi lô chng


” vi 3 mc tiêu:
1.    c t bào C
2
C
12
ca cn dch chit n n-
hexan r cây Chóc máu Nam.
2. Nghiên cu tác dng h glucose huyt ca cn dch chit  n n 
hexan r   thu nhn glucose ca t
C
2
C
12
.
3.  tác dng hot hóa adenosin monophosphat protein kinase (AMPK)
và c ch acetyl coenzym A carboxylase (ACC) ca cn dch chit n n 
hexan r cây Chóc máu Nam. 2
 1. TNG QUAN
1.1. Mt vài nét v bng
Theo T chc Y t th git hi
ch c tính biu hin b   t do hu qu ca vic
thiu hoc mt hoàn toàn insulin hon s suy yu trong hot
ng c [7].
 ng là mt ri lon x do c yu t di truyn
và yu t i s i trong chuyn hóa glucid,
lipid và protein do s thiu hi hoc tuyc bài xut
và do s kháng insulin  các m khác nhau.  nhng bnh nhân b 

 i mt s bnh nhi   t áp, ri lon chuyn hóa
lipoprotein, tng b bnh nha chu và ri lon ch   Nhng
bnh nhân này cn phu tr bng insulin [7], [39].
- Sinh lý b
Có th nhn thy khá rõ nhi sinh lý trong b
là hu qu ca s thiu ht insulin khi so sáng chuyn hóa  i
ng vi s chuyn hóa  b1.2.).  bnh
 thiu ht insulin và s  ng
huyt, ch yu là glucagon, dn  thy phân glycogen và tân to
glucose     i phóng glucose t gan (Hepatic glucose
output - HGO) [7].

4

Hình 1.1. Các con đường chuyển hóa glucose chính ở người bệnh ĐTĐ typ1 [7]
m th hin s t th hin s gim
chuyn hóa so vi ng)
1.1.2. Đái tháo đường typ 2
   thuc insulin) chim khong
90-95% s by ra do s kháng insulin và suy gim bài tit
insulin. Bnh khi phát và tin trin âm thm, không bc l các triu chng
lâm sàng và khó ch   t thi gian dài, ngay c khi s 
glucose huyt trung bình có th dn chng mu
2 liên quan cht ch n yu t di truyn. Tuy vy, m
 phù hp cao (80%) trong t l mc  các cp song
sinh cùng tr ca s di truyn vc bit
 là mt b[7], [39].
 di truyn, b b ng bi các yu t
  nhing, tình trng tha cân, béo phì
vi s  trong vùng  bng (ni ti vng,

6
- Gim hot tính insulin do khim khuyt gen
- Bnh lý ty ngoi tit
- Bnh ni tit
- c, hóa cht, do nhim trùng
- Các th khác: kháng th kháng th th insulin, hi chi c
Mt s hi chng di truyt hp vi chng Down,
thu vng Friedrich, múa vn Huntington, [7], [39].
1.1.4. Đái tháo đường ở người mang thai
ng do thai nghén là tình trng ri lon dung np glucose
huyt  các m khác nhau, khi phát hay phát hiu tiên khi có thai.
i tr tình trng ri lon glucose xc hay
trong thi k c nhn bic [39].
1.2. Adenosin monophosphat  activated protein kinase (AMPK)
1.2.1. Đặc điểm cấu trúc
AMPK thuc h enzym cm c hot hóa do suy gim
n adenosin triphosphat (ATP) trong t bào  
mng ca t bào. Sau khi hot hóa, AMPK có vai trò khôi
phng ATP trong t bào theo c hai cách: c ch s tiêu th ATP và kích
thích quá trình sinh ATP.
AMPK là mt protein cu to bi 3 ti: 1 ti 
(63 kDa) và hai ti -63 kDa). Các tiu
 ng trong vi nh ca phc hp
trimer này. Các ti c mã hóa bi các gen khác nhau và mi
ti u có các dng phân khác nhau: 

7

Hình 1.2. Cấu trúc phân tử AMPK
- Ti a phc hp AMPK

phc hp AMPK. Nhng bii d lp th khác nhau này trong phc hp,
gây ra bi liên kt vi AMP hoc ATP, to nên nn tng phân t cho chc
u hòa chuyn hóa ca AMPK và khin cho enzym này tr thành mt
mc tiêu tác dng cho các cht hóa hc tng hp.
t bin tn k c trên ti 
171
-Phe
179

i vùng liên kt glycogen ca ti n tr 
hot tính ph thuc AMP ca phc hp AMPK. Vì vy, có v 
hot hóa phc hu ng ca ti 
hin ra rng ti n quá trình hot hóa này nhiu nht,
còn ti  ng va phi [6].
1.2.2. Sự hoạt hóa phức hợp AMPK
c hot hóa bi hiu ng d lp th khi t l AMP/ATP và
creatin/phosphocreatin (Cr/pCr) trong t 
n s phosphoryl hóa các tiu  bi các enzym AMPK kinase
(AMPKK). Trong s các yu t kích thích, nhng yu t làm cn kit ATP d
tr ng AMP trong t t, tình trng thiu oxy,

9
t thm thu, thiu glucose, thiu máu cc b và tình tr
c nghiên cu nhiu nht [6]. AMP trong t bào liên kt vi
vùng Bateman trong ti i cu trúc ca phc
hy s phosphoryl hóa phân t threonin 172 (Thr 172) nm trên tiu
 a AMPK thông qua mt s enzym kinase.
Nhi v ng và s chuyn hóa calci trong t bào chính
 cho quá trình hot hóa AMPK. Trong s các tác nhân ni sinh gây
phosphoryl hóa Thr172 thì Liver kinase B1 (LKB1), các protein kinase ph

AMPK là mt protein quan tr u   ng ca t bào và
t yu t u hòa chuyn hóa glucose và lipid
 nhic bi32].
1.2.3.1. Vai trò c
 dng glucose chính cng kích
thích s thu nhng ph thuc insulin và con
ng không ph thuc insulin. Kháng insulin là mt trong nhng khim
khuyc phát hia b yu là do s
sai lch trong quá trình truyn tín hiu ca insulin. Tuy nhiên, hin nay bin
pháp hu hi khc phc nhng sai lng truyn tín hiu
insulin vn còn rt hn ch. Vì vy, ci thin quá trình s dng glucose  
ng không ph thuc coi là bin pháp thay th có
hiu qu.
Các s liu in vivo và ex vivo ng minh rng AMPK tác dng lên s
hp thu glucose thông qua c  ph thuc và không ph thuc insulin.
Nhiu nghiên cng minh gi thuyt cho rng tp luyn có th
 dn b không

11
ph thuc insulin [6], [26]. S  l AMP/ATP và Cr/pCr dn
n s nh m hot tính ct
ch u này cho thi trò quan trng
trong vi d Hot hóa u
hin ca gen mã hóa GLUT-4 và hexokinase II và kích thích tng hp
   ng cách hot hóa d lp th glucose6phosphatase.
AMPK còn th hin chng hóa c
hot hóa 2 enzym chính ca chu trình acid citric: citrat synthase và succinat
dehydrogenase [6].
Ngoài vin chuy
trò quan trng trong chuyn hóa cht béo  Hot hóa AMPK làm gim

ng yu t cà TORC2.
        y gây bt hot
enzym này, làm gim tng hp malonyl      t tính ca
Carnitin palmitoyltransferase 1 (CPT1)n chuyn các acid béo vào
ty th  -oxy hóa. Bên cc tip kích thích hp thu

13
acid béo t do vào t bào thông qua vic chuyn enzym chuyn vn acid béo
CD38 ti màng t bào [6], [32].
AMPK còn có tác dng c ch gen mã hóa cho enzym tng hp acid béo
n s  glucose huyng là
gim glucose huyt [17].
1.2.3.3. Vai trò ca AMPK trong mô m
Hot hóa AMPK trong mô m làm gim tng h
aicd béo và gim tng hp TG. Nhp luyn th cht hou tr bng
các thu  -adrenergic gây ho       ph
thuc AMP vòng (cAMP).
u tit s thy phân lipid trong t bào mô m bng cách
làm bt hot enzym hormon-sensutive lipase (HSL) thông qua phosphoryl hóa
phân t n s tái tng hp và gii phóng acid
béo t TG, mt quá trình cn tiêu th ATP.
Hot hóa AMPK trong mô m     u hin ca
adiponectin, m nhy cm vi insulin c
Các tác dng ngoi vi ca adiponectin có th gii thích 
ca các thuc hot hóa AMPK trong via và ci thin tình trng
kháng insulin  bng béo phì [6].
1.2.3.4. Vai trò ca AMPK trong các t o ty
N glucose trong máu thp s hot hóa AMPK trong các t bào 
i ta cho rng metformin n s tit insulin ca t 
hot hóa AMPK.

hot tính cn s phosphoryl hóa phân t

15
threonin 172 cng thi gim hot tính ca ACC-2. Tác d
hot tính c         i tình trng
gim n ATP và làm gim phosphocreatin trong
 dng glu glycogen trong
31].
Thiazolidindion (TZD) không trc tip phosphoryl hóa AMPK mà tác
d gián tip. Các TZD liên kt và kích hot PPAR-
 nhy cm vi insulin  nhiu mô ngoi vi khác nhau. TZ
rosiglitazon và pioglitazon, làm gim s thy phân lipid và ging acid
béo trong t bào m. Nhng thu   c ch gii phóng mt vài
adipokin t t bào mu t hoi t khi u (TNF--6 và
resistin, cht gây ra s kháng insulin cng th bài
tit adiponectin t mô m  i và các loài gm nhm. Adiponectin kích
thích hp thu glucose và oxy hóa acid béo  c ch quá trình tân to
ng  gan do hot hóa AMPK. Trên thc nghim, khi gây t bin AMPK
 bào m hoc dùng các cht c ch AMPK tng hp làm mt
các tác dng này ca adiponectin [6].
- AICAR
AMP là mt cht hot hóa AMPK nn  trên, hai
cp phân t i hai vùng Bateman trên tin v t
hóa phc hc chuyn hóa trong trong t bào to thành
ZMP (5-aminoimidazol-4-carboxamid-1--D-ribofuranotid) bi adenosin
kinase. ZMP là mt ch i các vùng Bateman trên
ti a AMPK và gây ra s i d lp th trong cu trúc ca
AMPK, gây hot hóa AMPK. Bên ct vài nghiên c
cho thy ZMP có th u hòa s chuyn hóa glucose bng cách c ch trc
tip fructose-1,6-biphosphatase trong t n quá trình