TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG
www.hsph.edu.vn
KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA
TRÊN ĐĨA THẠCH
www.hsph.edu.vn
MỤC TIÊU
•
Trình bày được phạm vi áp dụng qui trình xác định
Salmonella trên đĩa thạch.
•
Nêu và thực hiện được các bước của qui trình xác định
Salmonella trên đĩa thạch.
•
Nhận định được kết quả của qui trình xác định
Salmonella trên đĩa thạch.
www.hsph.edu.vn
Phạm vi áp dụng
•
Các sản phẩm dùng cho con người và thức ăn chăn nuôi
•
Các mẫu môi trường khu vực sản xuất và xử lý thực
phẩm
www.hsph.edu.vn
Nguyên lý
•
Phát hiện Salmonella trong mẫu thử bằng cách phân lập
và xác định các khuẩn lạc điển hình hoặc ít điển hình
trên môi trường chọn lọc kết hợp với các phản ứng sinh
hoá đặc trưng trong phép thử khẳng định.
(-)
(+) (+) (-)

www.hsph.edu.vn
TIẾN HÀNH
www.hsph.edu.vn
Chuẩn bị dụng cụ
•
Bình tam giác
•
Que cấy
•
Đèn cồn
•
Găng tay
•
Cân mẫu
•
Dụng cụ đồng nhất mẫu
www.hsph.edu.vn
Chuẩn bị môi trường
•
Pepton
•
RV (Rappaport Vassiliadis)
•
Tetrathiolate
•
Đỏ phenol lục sáng
•
HE (Hektoen enteric)
www.hsph.edu.vn
Chuẩn bị môi trường (tiếp)

đệm peptone
•
Ủ và nuôi cấy các ống nghiệm ở 37±1
o
C / 18 ± 2h
www.hsph.edu.vn
Bước 2: Tăng sinh trong môi
trường lỏng chọn lọc
•
Chuyển 0,1ml dịch nuôi
trong đệm pepton vào ống
nghiệm có sẵn 10ml môi
trường (RV), ủ ở 36±1
o
C

C /
24±3 h
Âm tính Dương tính
www.hsph.edu.vn
Bước 2: Tăng sinh trong môi
trường lỏng chọn lọc (tiếp)
•
Cấy chuyển 1ml dịch nuôi cấy
đệm pepton vào bình có sẵn
10ml môi trường canh thang
Tetrathionate, ủ ở 41,5±1
o
C
trong 24±3 h

C trong 24 giờ
nữa và kiểm tra lại.
•
Chọn tối thiểu 5 khuẩn lạc nghi ngờ cấy chuyển vào môi
trường BHI hoặc TSA để thử phản ứng sinh hoá
www.hsph.edu.vn
Đỏ phenol lục sáng HE
www.hsph.edu.vn
Bước 5: Kiểm tra tính chất sinh
vật hóa học của Salmonella
•
Lên men đường glucose (+), saccarose (-), lactose (-)
•
Khả năng sinh H
2
S (+/-)
•
Khả năng phân giải Ure (-)
•
Khả năng sinh Indol (-)
•
Lysin decarboxyl (+)
•
Phản ứng VP (-)
www.hsph.edu.vn
Thử nghiệm lên men đường
•
Mục đích
Phát hiện VSV có khả năng lên men đường glucose
Chủng VSV MT TSI

44
o
C / 24h
www.hsph.edu.vn
Kết quả phản ứng sinh Idol
Salmonella không sinh Indol
(+) (-)
www.hsph.edu.vn
Thử nghiệm Urease
•
Mục đích
Phát hiện VSV có mang urease
Chủng VSV MT Urea
37
o
C / 24h
Pứ âm tính Pứ dương tính
www.hsph.edu.vn
Thử nghiệm Voges – Proskauer (VP)
•
Mục đích
Phát hiện VSV tạo sản phẩm trung tính (acetoin) trong
quá trình lên men glucose
Chủng VSV MT MR-VP
Thuốc thử Barritt
37
o
C / 24h
Pứ âm tính Pứ dương tính