•
Là các phương pháp dùng để xác định trình tự sắp
xếp các nucleotides trong một chuỗi hoặc 1 đoạn DNA.
•
Sử dụng các phương pháp :

Maxam-Gilbert (1977)

Sanger (1977)

Xác định trình tự tự động
Phương pháp xác định
trình tự ADN
I.Phng phỏp Maxam-Gilbert
1.Nguyờn lý

L phng phỏp phõn gii húa hc (do Allan Maxam và
Walter Gilbert ở đại học Haward đã đề xuất năm1977).

S dng húa cht phõn hy ADN cỏc v trớ base
c hiu to ra cỏc on cú chiu di khỏc nhau 1
nucleotid.

Điện di các đoạn ADN này và nhận biết vị trí của
chúng nhờ đánh dấu phóng xạ. Dựa vào đó để đọc được
trình tự của ADN
2. Các bước tiến hành

Chuỗi ADN kép được đánh dấu phóng xạ với
32

phóng xạ tự ghi v đọc vị trí của các nucleotit lần lượt trên
4 mẫu từ cực dương của gel lên cực âm theo nguyên tắc:
đoạn ADN càng ngắn càng dịch chuyển xa so với điểm xuất
phát ban đầu trên bản điện di đồ.
Ví dụ
•
Đoạn mạch đơn ADN đánh dấu đầu 5‘ ở
nucleotid A có trình tự:
P
32
TAGTCGCAGT3‘
-
Xử lý G: tạo 3 đoạn
-
Xử lý A+G: tạo 5 đoạn
-
Xử lý T+C: tạo 5 đoạn
-
Xử lý C: tạo 2 đoạn