HOÀNG THỊ DUNG LỚP K33C – KHOA SINH –
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2
BÀI TIỂU LUẬN MÔN CÔNG NGHỆ GEN
1.1.1.Các bước cơ bản của Phương pháp tách chiết DNA:
- DNA có kích thước lớn do đó cần tránh các tách nhân gây đứt gãy.
- DNA genome (ĐV, TV) sau khi tách chiết phải có kích thước lớn
(15kb-300kb).
• Phương pháp tách chiết cơ bản gồm 4 bước chính sau:
 Bước 1. Phá vở màng tế bào và màng nhân. Ở tế bào ĐV hoặc TV, bằng
cách nghiền tế bào hoặc mô trong nitơ lỏng – 196
0
C hoặc dùng hỗn hợp
chất tẩy (SDS, Sarcosyl) và proteinase K.
Bước 2. Loại bỏ thành phần không mong muốn
trong mẫu, như các protein, polysaccharide. Mẫu được bổ sung hỗn hợp
dung dịch (phenol: chloroform: isoamine tỉ lệ 25:24:1), lắc mạnh cho đến
khi dung dịch có dạng trắng sữa.
- Protein sẽ bị biến tính và kết tủa
- DNA, RNA được hoà tan trong nước.
Sau ly tâm cao tốc hỗn hợp dung dịch chia làm 3 pha:
+ Pha trên cùng là pha nước chứa DNA, RNA.
+ Pha giữa là pha chứa protein và các chất thứ cấp bị kết tủa.
+ Phá dưới là dung dịch phenol: chloroform: isoamine
 Bước 3. Tủa axít nucleic
+ Tủa bằng ethanol tuyệt đối (tỉ lệ 2:1), tủa tốt nhất ở - 20
o
C trong 30 phút hoặc
ở 0
o
C qua đêm. Hầu như toàn bộ các phân tử axít nucleic đều kết tủa.
+ Tủa bằng isopropanol (tỉ lệ 1:1) ở 0