1
TIỂU LUẬN HOÁ SINH

Chủ đề: Sơ lược về các bước tổng hợp protein có hoạt tính
mong muốn
Sinh viên: Nguyễn Trọng Tuấn Dương
Mã SV: 0601080
Tổ 3 - Lớp A3K61
Các protein có hoạt tính sinh học đang ngày càng được sử
dụng rộng rãi để làm thuốc như các hormon, enzym...trước đây
nguồn nguyên liệu để sản xuất các loại protein này chủ yếu là
chiết từ các bộ phận của động vật. Tuy nhiên do nhu cầu ngày

cADN bằng kỹ thuật RT-PCR (Reverse transcription-
polymerase chain reaction), và cADN được ghép với plasmid
tạo thành plasmid lai.

2

2. Đưa plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn và tạo dòng
vi khuẩn:

Phương pháp dùng phổ biến để dưa plasmid tái tổ hợp vào tế
bào vi khuẩn là phương pháp biến nạp. Để tăng cường tần suất
biến nạp ta xử lý tế bào nhận với dung dịch CaCl
2
ở nhiệt độ
thấp (0-4
0
C với E.coli), bổ sung plasmid tái tổ hợp rồi đun nóng
tế bào nhận (tới 42
0
C) để gây shock nhiệt chung. Nhờ vậy tính
thấm của tế bào thay đổi, cho phép plasmid xâm nhập vào tế
bào. Cũng có thể dung shock điện để đưa plasmid tái tổ hợp vào
tế bào.
Người ta thường sử dụng gen kháng kháng sinh để làm dấu
hiệu chỉ thị tế bào đã dung nạp plasmid và để phân lập những tế
bào này trên môi trường thạch chứa kháng sinh chỉ thị.
Tế bào nhận plasmid tái tổ hợp được nuôi cấy để phát triển
thành 1 dòng. Với một số plasmid, việc cho vào môi trường
nồng độ thấp chloramphenicol ssẽ dẫn đến việc sao chép
plasmid mất điều khiển khiến cho hàng trăm bản sao plasmid có

Thiết kế plasmid: Gen mã hoá insulin chứa hai chuỗi ADN
(chuỗi dài chứa 18 phân đoạn nucleotide, chuỗi ngắn chứa 11
phân đoạn) hai chuỗi nucleotide này được tổng hợp thành 2
đoạn gen riêng biệt và được ghép riêng rẽ vào plasmid pBR322
gần phần cuối của gen β-galactosidase. Plasmid được biến nạp
vào E.coli và được nhân bản lên trong E.coli.

4
Sau khi được phiên mã sang mARN hai mạch của insulin
được tạo thành và được bài tiết ra cùng với β-galactosidase.
Sau khi tách từng polypeptide khỏi enzyme bằng BrCN, hai
mạch được gắn lại với nhau tạo insulin hoạt động (kỹ thuật 2
block)

Kỹ thuật sản xuất insulin một bước cũng bằng kỹ thuật tái tổ
hợp ADN , gen được gắn vào ở đây là gen mã hoá proinsulin.
Sau khi chiết, proinsulin được thuỷ phân bằng protease cắt
mạch peptid cho insulin hoạt động

THE END ^-^

5