MÔN: SINH HC PHÂN TỌ Ử
MÔN: SINH HC PHÂN TỌ Ử
GVHD:
GVHD:
NGUYN TH DUY KHOAỄ Ị
NGUYN TH DUY KHOA
Ễ Ị
GVHD:
GVHD:
NGUYN TH DUY KHOA
Ễ Ị
NGUYN TH DUY KHOAỄ Ị

1.
1.
NGUYN ĐÌNH BOỄ Ả
NGUYN ĐÌNH BOỄ Ả
2.
2.
TRN QUC HCẦ Ố Ọ
TRN QUC HCẦ Ố Ọ
3.
3.
NGUYN HU SĨỄ Ữ
NGUYN HU SĨỄ Ữ
4.
4.
PHAN NGC THNHỌ Ị
PHAN NGC THNHỌ Ị
5.

TRN QUC HC
Ầ Ố Ọ

NGUYN HU SĨ
Ễ Ữ
NGUYN HU SĨ
Ễ Ữ
PHAN NGC THNH
Ọ Ị
PHAN NGC THNH
Ọ Ị
TRN XUÂN ÁI Ầ
TRN XUÂN ÁI Ầ
QUÁCH TH QUỲNH MAIỊ
QUÁCH TH QUỲNH MAIỊ
PHM TH TNHẠ Ị Ỉ
PHM TH TNHẠ Ị Ỉ
VÕ TH BO ÁI Ị Ả
VÕ TH BO ÁI Ị Ả
NGUYN TH THU L U
Ễ Ị Ự
NGUYN TH THU L U
Ễ Ị Ự
NGUYN MINH THTỄ Ậ
NGUYN MINH THT
Ễ Ậ
TRN ĐÔNG ANHẦ
TRN ĐÔNG ANH
Ầ
NGUYN ĐÌNH BO

phát minh, ông đã đot
ạ
gi i Nobel v Hóa hc
ả ề ọ
vào
tháng 10 năm 1993 cho thành t u này, ch sau 7 năm
ự ỉ
khi ông đa ra ý t ng. Ý ki n c a Mullis là phát
ư ưở ế ủ
tri n mt quy trình mà DNA có th nhân lên nhi u l n
ể ộ ể ề ầ
mt cách nhân t o qua nhi u chu kỳ sao chép bi
ộ ạ ề ở
enzyme DNA polymerase

III. THC NGHI MỰ Ệ
III. THC NGHI MỰ Ệ
PCR
PCR


PCR đ c dùng đ khuch đi mt đon DNA ngn, đã ượ ể ế ạ ộ ạ ắ
xác đnh đ c mt phn. Đó có th là mt gen đn, hay ị ượ ộ ầ ể ộ ơ
mt phn ca gen.ộ ầ ủ

PCR cn r t nhi u thành phn. ầ ấ ề ầ
- DNA mu (template) cha mnh DNA cn khuch đi ẫ ứ ả ầ ế ạ
- Cp mi(primer), ặ ồ
- DNA-polymerase enzym xúc tác cho vi c nhân lên ca ệ ủ
DNA. - Nucleotides (ví d dNTP)là nguyên li u cho ụ ệ

DNA th ng là si đôi, chi u dài ca nó đ c
ườ ợ ề ủ ượ
xác đnh bng s l ng cp base (bp); chi u
ị ằ ốượ ặ ề
dài ca si đn DNA đ c đo bng base hay
ủ ợ ơ ượ ằ
nucleotides)

III.2 Quy trình
Quy trình PCR gm 20 đn 30 chu kỳ. Mi
ồ ế ỗ
chu kỳ gm 3 b cồ ướ :
- Nhi t đ tăng lên 94-96°C đ tách hai si
ệ ộ ể ợ
DNA ra. B c này gi là bi n tính, nó phá v cu
ướ ọ ế ỡầ
ni hydrogen ni 2 si DNA.
ố ố ợ
- Sau khi 2 si DNA tách ra, nhi t đ đ c h
ợ ệ ộ ượ ạ
thp xung đ mi có th gn vào si DNA đn.
ấ ố ể ồ ể ắ ợ ơ
B c này gi là gn mi.
ướ ọ ắ ồ

- Cui cùng, DNA polymerase gn ti p vào
ố ắ ế
si tr ng. Nó bt đu bám vào và hot đng dc
ợ ố ắ ầ ạ ộ ọ
theo si DNA. B c này gi là kéo dài

ế ứ ụ ệ
xét nghi m bnh tôm
ệ ệ
xét nghi m bnh tôm
ệ ệ

Vi c xét nghi m bnh tôm ệ ệ ệ
bng h thng PCR Real-time ằ ệ ố
đ c ti n hành theo qui trình ượ ế
khép kín.
Tr c tiên, mu tôm Post ướ ẫ
đ c nghi n nhuyn trong mt ượ ề ễ ộ
dung dch tách chi t gen di ị ế
truyn (DNA). ề
Sau đó, hn hp này ỗ ợ
đ c đa qua ni hp cách thy ượ ư ồ ấ ủ
trong vòng 10 phút nhm làm ằ
sc nhi t đ trích ly DNA. ố ệ ể

Bn Tre ng dng công ngh PCR Real-time trong xét
ế ứ ụ ệ
nghi m bnh tômệ ệ

Hn hp dung dch và tôm post ỗ ợ ị
nghi n nhuyn l i tr i qua công đon ề ễ ạ ả ạ
làm l nh nhanh, cho vào t đông ạ ủ ở
nhi t đ (-200C) trong vòng 15 phút. ệ ộ
Hn hp ti p t c đ c đa vào ỗ ợ ế ụ ượ ư
máy ly tâm khong 5 phút, vi t c đ ả ớố ộ
780.000 vòng/h đ loi t p cht. ể ạạ ấ

1. Nguyên li u
ệ
:
:
- Máu t i ca nhng ng i kho mnh
ươ ủ ữ ườ ẻ ạ
không có cùng quan h huyt thng do Vi n
ệ ế ố ệ
Quân y 108 cung cp.
ấ
- Hoá cht: Hoá cht cho tách chi t ADN
ấ ấ ế
(hãng Sigma); hoá cht dùng cho quá trình PCR
ấ
đi vi locus D7S820 (mi đc hi u cho locus
ố ớ ồ ặ ệ
D7S820 ca hãng Pharmacia-Thu Đi n; Taq ủ ỵ ể
ADN polymeraza-ca Vi n St rét Ký sinh trùng
ủ ệ ố
và Côn trùng Trung ng); hoá cht dùng cho
ươ ấ
đi n di và nhum băng ADN (ca các hãng
ệ ộ ủ
Promega, Pharmacia, Sigma, MERCK).
I. Ph ng pháp nghiên c uươ ứ

2. Ph ng pháp:ươ
a. Tách ADN:
ADN t máu đ c tách chi t theo ph ng pháp
ừ ượ ế ươ

d. Ph ng pháp chn l c và xây d ng
ươ ọ ọ ự
thang alen
* Đánh s alen theo quy c riêng: Da vào
ố ướ ự
các alen quan sát đ c c a các mu khác nhau
ượ ủ ẫ
trên bn đi n di, chúng tôi chn ra các mu
ả ệ ọ ẫ
mang các alen khác nhau và đánh s alen theo
ố
th t t d i lên trên (đánh s alen t băng
ứựừướ ố ừ
ADN có tr ng l ng phân t thp nht đn
ọ ượ ử ấ ấ ế
băng ADN có tr ng l ng phân t cao nht).
ọ ượ ử ấ
Vi c đánh s đây ch mang tính quy c sao
ệ ốở ỉ ướ
cho mi alen xác đnh đ c có ký hi u riêng, vì
ỗ ị ượ ệ
đây là quá trình kho sát ban đu cha có thang
ả ầ ư
alen chun đ so sánh.
ẩ ể

d. Ph ng pháp chn l c và xây d ng ươ ọ ọ ự
thang alen
* Xây dng thang alen: Trong quá trình ự
đánh s , chúng tôi đng thi chn ra

2. Kt qu chn l c alen và t o thang ế ả ọ ọ ạ
alen :
Thang alen chun ca locus D7S820 vi 7 alen khác ẩ ủ ớ
nhau đ c phân tách bng k thut đi n trên gel PA ượ ằ ỹ ậ ệ
bi n tính ế

Xác đnh quan h huyt thng: ị ệ ế ố
Xác đnh quan h huyt thng: ị ệ ế ố
Đt chính xác 99,9%ạ
Đt chính xác 99,9%ạ
GS Lê Đình L ng và các cng s đã t b ti n túi ươ ộ ự ựỏề
đ nghiên cu ng dng k thut này trong vi c
ể ứứ ụ ỹ ậ ệ
xác đnh quan h huyt thng
ị ệ ế ố
Đn năm 2000, vi đ tài "Xác đnh nhanh, chính
ế ớ ề ị
xác các đc tr ng cá th ng i bng k thut
ặ ư ểở ườ ằ ỹ ậ
PCR"
Vi các mu máu, tóc, n c bt các cá th khác
ớ ẫ ướ ọở ể
nhau, dùng PCR có th tìm ra các tính tr ng chung
ể ạ
các cá th có cùng huyt thng
ở ể ế ố

Hi n nay, đ xác đnh huyt thng, ệ ể ị ế ố
th gi i th ng dùng t 8-14 gen. ế ớ ườ ừ
Phòng thí nghi m ca chúng tôi đã ệ ủ