1
I HI
SINH HC
PROTEIN - ENZYME
c hin : n
Lp : K55 - CNSHB
: 550513
ng dn : TS. Nguyn
trao ion ion) (pha
- trong
sinh.Theo IEC h protein
trong quy tinh bao
nhau): IEC: 75%; (AC): 60%;
gel (GF): 50% .
-
t
-
.
b) :
-
-
.
-
-
3
-
cellulose (CM-
yl-cellulose (DEAE-
4
4. :
(Ion Exchange Chromatography):
, hay
T
+
-
5. (Binding):
.
6.
-
280
, 0,25
280
2 ml.
280
7
280
g
(A)
OD
280
(A)
1
0,066
16
0,038
31
0,334
2
0,076
17
0,034
32
0,322
3
0,108
18
0,062
33
0,294
4
0,048
19
0,056
34
0,286
5
0,020
25
0,256
40
0,264
11
0,194
26
0,278
41
0,158
8
12
0,040
27
0,308
42
0,162
13
0,046
28
0,326
43
0,166
14
0,028
29
0,338
OD
280
(A)
OD
280
(A)
1
0,272
16
0,028
31
0,212
2
0,110
17
0,020
32
0,210
3
0,112
18
0,041
33
0,195
4
0,106
19
0,116
34
0,163
10
0,066
25
0,101
40
0,208
11
0,002
26
0,096
41
0,099
12
0,005
27
0,088
42
0,133
13
0,046
28
0,290 14
0,041
29
0,109
-
t
-
-
280
-
-
-
-
-
-
10
-
11
I
-
- .
- .
c cn th o qun trong l ti.
- c,
c dung dch g Bo qun
trong 2 tun.
2. L th ng chun:
Ly 6 ng nghi t 1 t tham gia phn
tng ng nghing sau:
Bng : L th ng chun BSA
STT
BSA 10
mg/ml
ml
H
2
O
(ml)
Thuc th
Biuret (ml)
N protein
(mg/ml)
1
0.0
1.0
4
0
2
0.2
0. 8
4
2
bi a m quang theo n protein chu th
ng chun).
ng protein b:
-
540
540
OD
540
2
0.003
4
0.012
6
0.024
8
0.034
MT1X
MC7
OD
540
(A)
0,310
0,311
0,322
134,383
134,809
139,489
134383
134809
139489
-
540
540
cao.
III ng n protein b :
h
14
STT
BSA (1 mg/ml)
H
2
O
(ml)
N protein
1
20
0.98
20
2
40
0.96
40
3
60
0.94
60
4
80
0.92
OD
660
20
0.060
40
0.105
60
0.153
80
0.173
100
0.206
120
0.271
15
y = 0,002x + 0,023
g/ml)
y
660
(A)
-
c
+
16
1. Dung dch thuc th Bradford 5X:
Ethanol tuyi
(99,99%). B sung 100 ml axit phosphoric (H
3
2
O
ng chun:
Chun b mng nghim s ng Lng nghit theo bng sau:
ng nghim
1
2
3
4
5
6
i
chng)
BSA t ch chu
100
100
100
100
100
0,125
0
Để tăng độ chính xác của đường chuẩn, tương ứng với mỗi nồng độ chuẩn BSA
nên lặp lại 3 lần (sử dụng 3 lần nhắc lại hoặc 3 ống nghiệm cho 1 lần).
Sau khi trng nghi trong ti nhi
kho hp th ng
chun bng Excel s dng kt qu
OD, trng protein. Tuy
t
ng eppendorf
1
2
3
4
5
6
H
2
420
450
460
950
*
**
N BSA g
60
50
dung dch BSA chun, lch protein cho ng nghim.
B sung 5 ml thuc th c ti
th chu OD.
c) Cách tính hàm lượng:
i chi c vng chun s
c n ng ca mu cng
5. D th ng chun:
OD
595
0.125
0.006
0.25
0.017
0.5
0.081
0.8
0.129
1
0.188
1.25
0.256
IV Nh
MT1X
MC7
134383
134809
139489
281
1510
173
1,694
1,514
1,676
T bng tng ky:
- N c t ln.
- N
n.
- m.
- Phn ng ca mi loi protein trong m
- SDS-PAGE (sodium
-
--
-
-
-
--PA
21
-
-PAGE
III:
lang.
.
1.
- 1,5 M Tris HCl pH 8,8
0,25 M, pH 6,8
SDS
0,6 g
1,2 g
6 %
Glycerol
4 ml
8 ml
40 %
Bromopjenol Blue 1%
0,4 ml
0,8 ml
0,04 %
H
2
O
8 ml
16 ml 22
20
0
C.
4.
- 10X SDS Laemmli Running Buffer (0,25 M Tris, 1.92 M Glycine, 1 %
SDS, pH 8,3).
8.
- 10% SDS 10 g SDS/ 100 ml H
2
- 10% APS 10 g APS / 100 ml H
2
0
IV :
-
-
- 23
1.
V
Acrylamide (12 %)
H
2
O
(ml)
2,19
1,5 M Tris HCl pH 8,8
0,68
10 % APS
(l)
16
TEMED
(l)
8
ml
4,024 ml
di protein:
- .
-
-
- .
- .
VI :
- Sau khi
- .
- .
- .
VII
1.
4
BSA
8
12
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
2
-
25
-
-
-
-