Công ngh nuôi c yệ ấ
mô t bào th c v tế ự ậ
Mục lục
I.
I.
Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật
Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật
II.
II.
Nhân giống vô tính in vitro
Nhân giống vô tính in vitro
III.
III.
Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro
Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro
IV.
IV.
Nuôi cấy tế bào trần
Nuôi cấy tế bào trần
V.
V.
Thụ phấn và nuôi cấy phôi in virto
Thụ phấn và nuôi cấy phôi in virto
VI.
VI.
Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật
Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật
Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho các nguyên
Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho các nguyên
liệu thực vật
liệu thực vật

lại có thể trở về dạng phôi sinh và phân chia mạnh
mẽ
mẽ
Tế bào phôi sinh
Tế bào phôi sinh
Tế bào dãn
Tế bào dãn
Tế bào phân hóa có
Tế bào phân hóa có
chức năng riêng biệt
chức năng riêng biệt
Phân hóa tế bào
Phân hóa tế bào
Phân hóa tế bào
Phân hóa tế bào
II.Nhân giống vô tính in vitro
Nhân giống 1 loài trong ống nghiệm trên mt nhân tạo và trong
Nhân giống 1 loài trong ống nghiệm trên mt nhân tạo và trong
điều kiện vô trùng
điều kiện vô trùng
Vô trùng
Vô trùng
mẫu cấy
mẫu cấy
Tạo cây
Tạo cây
in
in
vitro
vitro

•
Nhược điểm:
Nhược điểm:
tính bất định về mặt di truyền
tính bất định về mặt di truyền
sự nhiễm mẫu
sự nhiễm mẫu
tạo ra độc tố
tạo ra độc tố
sự hóa thủy tinh thể
sự hóa thủy tinh thể
III.Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội
invitro
1.Tạo cây đơn bội bằng
1.Tạo cây đơn bội bằng
nuôi cấy bao phấn
nuôi cấy bao phấn
Nguyên lý:
Nguyên lý: sự hình thành cây đơn
sự hình thành cây đơn
bội từ hạt phấn là sự
bội từ hạt phấn là sự
sinh sản đơn tính đực
sinh sản đơn tính đực
theo 3 phương thức
theo 3 phương thức
Sinh

Chọn bao phấn:
hoa đầu tiên,hạt phấn thể 4 nhân sau lần
hoa đầu tiên,hạt phấn thể 4 nhân sau lần
nguyên phân thứ nhất
nguyên phân thứ nhất
•
Xử lý nụ hoa:
Xử lý nụ hoa:
bằng nhiệt độ kích thích sự phân chia hạt phấn
bằng nhiệt độ kích thích sự phân chia hạt phấn
•
Chọn mt tái sinh thích hợp
Chọn mt tái sinh thích hợp
•
Chọn lọc cây đơn bội:
Chọn lọc cây đơn bội:
đếm số lượng NST,đo hàm lượng
đếm số lượng NST,đo hàm lượng
DNA,so với cây mẹ
DNA,so với cây mẹ
Sơ đồ tạo cây đơn bội từ nuôi cấy
bao phấn
Tách các bao phấn
Khử trùng bề mặt
Nhuộm acetoarmine để xác định
GĐPT của hạt phấn
Nuôi cấy trên
mt đặc
Nuôi cấy trên
mt lỏng

Phương pháp cơ bản để tách và nuôi cấy
1.Tách tế bào trần
1.Tách tế bào trần
•
Khử trùng mẫu lá
Khử trùng mẫu lá
•
Ngâm mẫu trong dung dịch thẩm thấu để tế bào co
Ngâm mẫu trong dung dịch thẩm thấu để tế bào co
nguyên sinh chất
nguyên sinh chất
•
Tách lớp mặt dưới lá
Tách lớp mặt dưới lá
•
Ngâm mẫu trong hỗn hợp enzym
Ngâm mẫu trong hỗn hợp enzym
•
Tinh sạch tế bào trần
Tinh sạch tế bào trần
•
Nuôi cấy tế bào trần trong môi trường thích hợp
Nuôi cấy tế bào trần trong môi trường thích hợp
2.Tạo cây đơn bội bằng nuôi cấy noãn chưa thụ tinh
2.Tạo cây đơn bội bằng nuôi cấy noãn chưa thụ tinh
Nguyên lý:
Nguyên lý:
nuôi cấy noãn chưa thụ tinh phát triển thành cây đơn bội là sự
nuôi cấy noãn chưa thụ tinh phát triển thành cây đơn bội là sự
sinh sản đơn tính cái


tái sinh chồi
tái sinh chồi


cây hoàn chỉnh
cây hoàn chỉnh
Sơ
đồ
nuôi
cấy
tế
bào
trầnỨng dụng nuôi cấy tế bào trần trong chọn tạo giống
Ứng dụng nuôi cấy tế bào trần trong chọn tạo giống
•
Dung hợp tế bào trần: là sự kết hợp của hai hay nhiều tế
Dung hợp tế bào trần: là sự kết hợp của hai hay nhiều tế
bào trần tạo ra một khối tế bào trần, trong đó nhân của
bào trần tạo ra một khối tế bào trần, trong đó nhân của
chúng có thể kết hợp hoặc tồn tại riêng rẽ.
chúng có thể kết hợp hoặc tồn tại riêng rẽ.

tạo ra các khối mô sẹo hoặc phôi soma, ứng dụng trong

nhũ tam bội)
nhũ tam bội)
•
Bất hợp giao tử trước khi thụ tinh:
Bất hợp giao tử trước khi thụ tinh:
1 hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy
1 hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy


nhụy tạo ra chất ức
nhụy tạo ra chất ức
chế ngăn cản sự phát triển hoặc làm biến dạng ống
chế ngăn cản sự phát triển hoặc làm biến dạng ống
phấn,ngăn thụ tinh
phấn,ngăn thụ tinh
•
Bất hợp giao tử sau khi thụ tinh:
Bất hợp giao tử sau khi thụ tinh:
hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy
hạt phấn lạ rơi vào núm nhụy


thụ phấn vẫn diễn ra
thụ phấn vẫn diễn ra
nhưng hạt không phát triển
nhưng hạt không phát triển
(do giữa nội nhũ và phôi hình thành cơ chế ức chế sự
(do giữa nội nhũ và phôi hình thành cơ chế ức chế sự
phát triển của phôi)
phát triển của phôi)