bài giảng công nghệ protein enzyme chương 10 định lượng và đánh giá độ tinh sạch của chế phẩm protein - Pdf 14

1
1
Đ
Đ


nh lư
nh lư


ng v
ng v
à
à
đ
đ
á
á
nh gi
nh gi
á
á
đ
đ


tinh
tinh
s
s


c đ


nh
nh
h
h
à
à
m lư
m lư


ng protein
ng protein
Protein sau khi đã đư
Protein sau khi đã đư


c t
c t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à

c. N
ế
ế
u protein nghiên c
u protein nghiên c


u l
u l
à
à
enzyme th
enzyme th
ì
ì
vi
vi


c đ
c đ


nh lư
nh lư


ng thông qua x
ng thông qua x
á


c t
c t
ế
ế
:
:
1
1
đơn v
đơn v


ho
ho


t đ
t đ


enzyme l
enzyme l
à
àlư



c
á
á
c đi
c đi


u ki
u ki


n tiêu chu
n tiêu chu


n
n
).
).
3
3
C
C
á
á
c phương ph
c phương ph
á
á
p x

á
c bư
c bư


c t
c t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à
à
l
l
à
à
m s
m s


ch
ch
protein ngư
protein ngư


ĩ
a l
a l
à
à
ho
ho


t đ
t đ


riêng
riêng
tăng r
tăng r


t cao.
t cao.Protein đư
Protein đư


c coi l
c coi l
à

à
l
l
à
à
m s
m s


ch sau
ch sau
không l
không l
à
à
m tăng
m tăng
ho
ho


t đ
t đ


riêng c
riêng c


a

n th
à
à
nh vi
nh vi


c
c
t
t
á
á
ch chi
ch chi
ế
ế
t v
t v
à
à
l
l
à
à
m s
m s


ch protein

ng protein


N
N
ế
ế
u protein không ph
u protein không ph


i l
i l
à
à
enzyme th
enzyme th
ì
ì
ta c
ta c
ó
ó
th
th


đ
đ



N
N
ế
ế
u protein ta nghiên c
u protein ta nghiên c


u l
u l
à
à
hormon ho
hormon ho


c c
c c
á
á
c đ
c đ


c t
c t


th


c m
c m
à
à
ch
ch
ú
ú
ng gây ra; v
ng gây ra; v
í
í
d
d


như hormon sinh trư
như hormon sinh trư


ng (growth
ng (growth
hormone) s
hormone) s


k
k
í

o
đ
đ
í
í
ch nuôi c
ch nuôi c


y.
y.


N
N
ế
ế
u l
u l
à
à
protein v
protein v


n chuy
n chuy


n th

ng đ


ch
ch


t m
t m
à
à
ch
ch
ú
ú
ng v
ng v


n chuy
n chuy


n
n
5
5
Đ
Đ


á
p gi
p gi
á
á
n ti
n ti
ế
ế
p x
p x
á
á
c đ
c đ


nh protein
nh protein
đ
đ


u d
u d


a trên cơ s
a trên cơ s


c protein l
à
à
g
g


n gi
n gi


ng
ng
nhau không ph
nhau không ph


thu
thu


c v
c v
à
à
o ch
o ch


t lư


x
x
á
á
c đ
c đ


nh ch
nh ch


c
c
á
á
c protein đã đư
c protein đã đư


c tinh s
c tinh s


ch ho
ch ho


c lư

i protein ra
không ch
không ch


a nh
a nh


ng ch
ng ch


t ch
t ch


a nitrogen kh
a nitrogen kh
á
á
c.
c.
6
6
Đ
Đ


nh lư


m,
m,
protein thô đư
protein thô đư


c đ
c đ


nh lư
nh lư


ng b
ng b


ng c
ng c
á
á
ch x
ch x
á
á
c
c
đ

v


i
i
6,25
6,25
,
,
ngh
ngh
ĩ
ĩ
a l
a l
à
à
coi protein luôn luôn ch
coi protein luôn luôn ch


a
a
16% nitrgen.
16% nitrgen.
7
7
Đ
Đ



m, bên c
m, bên c


nh protein
nh protein
còn c
còn c
ó
ó
nh
nh


ng ch
ng ch


t h
t h


u cơ kh
u cơ kh
á
á
c c
c c
ó

acid nitric
do
dođ
đ
ó
ó
h
h
à
à
m lư
m lư


ng nitrogen to
ng nitrogen to
à
à
n ph
n ph


n ch
n ch
í
í
nh th

ì
h
h
à
à
m lư
m lư


ng n
ng n
à
à
y l
y l


i th
i th


p hơn
p hơn
16%. H
16%. H


s
s


ng nitrogen theo
phương ph
phương ph
á
á
p Kjeldahl
p Kjeldahl


Nguyên lý c
Nguyên lý c


a phương ph
a phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y l
y l
à
à
vô cơ ho
vô cơ ho
á
á
m


t x
t x
ú
ú
c t
c t
á
á
c.
c.
D
D
ù
ù
ng m
ng m


t ki
t ki


m m
m m


nh (NaOH ho
nh (NaOH ho


SO
4
4
. S
. S
au đ
au đ
ó
ó
h
h


ng NH
ng NH
3
3
v
v
à
à
o dung d
o dung d


ch acid c
ch acid c
ó
ó
n


m c
m c
ó
ó
n
n


ng đ
ng đ


x
x
á
á
c đ
c đ


nh đ
nh đ


chu
chu


n đ

ó
trong nguyên li
trong nguyên li


u
u
9
9
Đ
Đ


nh lư
nh lư


ng protein theo
ng protein theo
phương ph
phương ph
á
á
p Lowry
p Lowry
Phương ph
Phương ph
á
á
p n

á
c đ
c đ


nh m
nh m
à
à
u s
u s


n ph
n ph


m kh
m kh


c
c


a phosphomolipden
a phosphomolipden
-
-
phosphowolframate (

p đ


ng
ng
-
-
protein. Ph
protein. Ph


c m
c m
à
à
u xanh t
u xanh t


o th
o th
à
à
nh
nh
c
c
ó
ó
th

à
u c
u c


a h
a h


n
n
h
h


p ph
p ph


n
n


ng t
ng t


l
l



th
th


chu
chu


n protein (
n protein (
thông thư
thông thư


ng d
ng d
ù
ù
ng tinh th
ng tinh th


albumin huy
albumin huy
ế
ế
t thanh bò) ta c
t thanh bò) ta c
ó


u.
u.
10
10
Đ
Đ


nh lư
nh lư


ng protein theo
ng protein theo
phương ph
phương ph
á
á
p Lowry
p Lowry
Phương ph
Phương ph
á
á
p Lowry đư
p Lowry đư


c d

protein kh
á
á
c nhau.
c nhau.
Phương ph
Phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y c
y c
ó
ó
đ
đ


nh
nh


y cao, cho ph
y cao, cho ph
é
é
p

1
g/ml.
g/ml.
Tuy
Tuy
nhiên cư
nhiên cư


ng đ
ng đ


m
m
à
à
u còn tu
u còn tu


thu
thu


c nhi
c nhi


u v

t n


ng đ
ng đ


, dung d
, dung d


ch trypsin cho cư
ch trypsin cho cư


ng đ
ng đ


m
m
à
à
u
u
cao g
cao g


p 3 l

à
i ra, nhi
i ra, nhi


u ch
u ch


t kh
t kh
á
á
c c
c c
ó
ó
th
th


l
l
à
à
m tăng hay gi
m tăng hay gi


m cư

y phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y cho k
y cho k
ế
ế
t qu
t qu


ch
ch
í
í
nh x
nh x
á
á
c khi x
c khi x
á
á
c
c
đ

phương ph
á
á
p quang ph
p quang ph


Phương ph
Phương ph
á
á
p đơn gi
p đơn gi


n nh
n nh


t đ
t đ


đo n
đo n


ng đ
ng đ


m
c
c


a n
a n
ó
ó
.
.
N
N
ế
ế
u protein tinh s
u protein tinh s


ch th
ch th
ì
ì
n
n


ng đ
ng đ


á
tr
tr


đo đư
đo đư


c.
c.
N
N
ế
ế
u protein không tinh s
u protein không tinh s


ch (v
ch (v
í
í
d
d


, d
, d


c


a protein t
a protein t


ng đư
ng đư


c
c
t
t
í
í
nh tương đ
nh tương đ


i t
i t


đ
đ


h


Nguyên t
Nguyên t


c c
c c


a phương ph
a phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y l
y l
à
à
c
c
á
á
c protein
c protein
h
h


c s
ó
ó
ng
ng
280nm do c
280nm do c
á
á
c acid amin thơm như
c acid amin thơm như
tryptophan, tyrosine v
tryptophan, tyrosine v
à
à
phenylalanine
phenylalanine
.
.
Đ
Đ


h
h


p
p
th


t đo đư
t đo đư


c (ngh
c (ngh
ĩ
ĩ
a l
a l
à
à
đ
đ


h
h


p th
p th


c
c


a dung d

é
p t
p t
í
í
nh n
nh n


ng đ
ng đ


c
c


a protein
a protein
tinh s
tinh s


ch.
ch.
13
13
Đ
Đ



n h
n h


p c
p c
á
á
c protein ho
c protein ho


c v
c v


i b
i b


t c
t c


m
m


t

n


ng
ng
đ
đ


protein đư
protein đư


c t
c t
í
í
nh như sau
nh như sau
:
:
N
N


ng đ
ng đ


protein




c s
c s
ó
ó
ng 28
ng 28
0nm
0nm
A260:
A260:
đ
đ


h
h


p th
p th









Phương ph
Phương ph
á
á
p n
p n
à
à
y
y
không d
không d
ù
ù
ng
ng
đư
đư


c cho c
c cho c
á
á
c dung d
c dung d


ch

m


t
t
nhi
nhi


u ch
u ch


t kh
t kh
á
á
c m
c m
à
à
h
h


p th
p th


c

đ


m, acid nucleic v
m, acid nucleic v
à
à
m
m


t s
t s


ch
ch


t b
t b
é
é
o), ho
o), ho


c khi
c khi
protein

ch. (V
í
í
d
d


, trong m
, trong m
à
à
ng ho
ng ho


c c
c c
á
á
c ph
c ph


c h
c h


p c
p c
ó

ý l
à
à
n
n
ế
ế
u t
u t


l
l


A280/A260 th
A280/A260 th


p hơn
p hơn
0,6
0,6
ngh
ngh
ĩ
ĩ
a l
a l
à

á
c,
c,
đ
đ


c bi
c bi


t v
t v


i acid nucleic
i acid nucleic
th
th
ì
ì
nên s
nên s


d
d


ng phương ph

í
nh đ
nh đ


ng th
ng th


c
c


a protein
a protein
Khi đã nh
Khi đã nh


n đư
n đư


c m
c m


t protein enzyme
t protein enzyme


l


i m
i m


c đ
c đ


tinh khi
tinh khi
ế
ế
t hay t
t hay t
í
í
nh
nh
đ
đ


ng th
ng th


c

ph


m protein
m protein
enzyme ph
enzyme ph


i đư
i đư


c ki
c ki


m tra b
m tra b


ng m
ng m


t s
t s


phương ph


ng h
ng h


p protein enzyme đư
p protein enzyme đư


c coi l
c coi l
à
à
đ
đ


ng th
ng th


khi ly
khi ly
tâm, n
tâm, n
hưng l
hưng l


i c

p đi


n di trên gel. Ch
n di trên gel. Ch
í
í
nh v
nh v
ì
ì
v
v


y, n
y, n
ế
ế
u
u
d
d
ù
ù
ng nhi
ng nhi


u lo


a protein m
a protein m
à
à
k
k
ế
ế
t qu
t qu


đ
đ


u cho l
u cho l
à
à
đ
đ


ng th
ng th


th

tinh khi
ế
ế
t. Nh
t. Nh


ng
ng
phương ph
phương ph
á
á
p đ
p đ


ki
ki


m tra t
m tra t
í
í
nh đ
nh đ


ng th

đ


ho
ho
à
à
tan
tan
,
,
đi
đi


n di v
n di v
à
à
siêu ly tâm.
siêu ly tâm.


Nhờ tải bản gốc

Tài liệu, ebook tham khảo khác

Music ♫

Copyright: Tài liệu đại học © DMCA.com Protection Status