Công nghệ tế bào thực vật
Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần

HÀ NỘI 03/2011
1
TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂY
Khoa công nghệ nông – thực phẩm
Thảo luận
Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần
Gv hướng dẫn : ths. BÙI VĂN THẮNG
Nhóm sinh viên thực hiện :
1. DƯƠNG TUẤN BẢO
2. NGUYỄN VĂN SINH
3. NGUYỄN ĐÌNH CÔNG
4. HÀ HUY HUÂN
5. QUẢN TRỌNG LÂN
6. LÊ VĂN LÂM
7. PHẠM CÔNG HÀ
8.PHẠM THẾ TÙNG
9.VŨ MẠNH TUẤN
10.TRẦN NGỌC THỊNH
2
Nội Dung
1. Phương pháp tách protoplast
2. Nuôi cấy protoplast
3. Phương pháp Dung hợp protoplast
4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast
3
1.Phương pháp tách tế bào trần
1.1 nguyên tắc


Có 2 con đường :

phát sinh cơ quan
(organogenesis)

Phát sinh phôi soma
(somatic embryogenesis)
7
2. Nuôi cấy protoplast
2.2 Môi trường nuôi cấy
•
Ammonium nitrate
•
Calcium
•
Chất hữu cơ
•
Các acid hưu cơ và
vitamin
•
Chất điều tiết sinh trưởng
•
Đường
8
2. Nuôi cấy protoplast
2.3 Điều kiện nuôi cấy
•
Cường độ ánh sáng
•
Chất lượng ánh sáng

PEG có 2 tác dụng:

Hoạc cung cấp một cầu
nối Ca
2+
có thể liên kết
các bề mặt màng với
nhau

Hoạc dẫn đến sự rối loạn
tích diện bề mặt
3.1.2 xử lý bằng PEG
11
3.Phương pháp Dung hợp protoplast
12
3.Phương pháp Dung hợp protoplast
3.2 Dùng xung điện
•
Nguyên tắc : các
protoplast tích điện nên
dịch chuyển trong điện
trường tạo chuỗi giữa hai
thanh điện cực, xung điện
làm thủng màng khiến
protoplast hòa trộn vào
nhau
13
3.Phương pháp Dung hợp protoplast
14
15

thuật protoplast
•
Tiến hành:

Ngày thứ 1: ngâm lá
trong dung dịch enzym
tách protoplast.

Ngày thứ 2: lọc, tách tế
bào protoplast, nuôi cấy
qua đêm ở 28
o
C

Ngày thứ 3 : chuyển sang
nuôi cấy ở ánh sáng yếu
(10-20 µmol.sec/m2)

Ngày tứ 5 : chuyển sang
nuôi cấy ở ánh sáng có
cường độ cao hơn (50-75
µmol/sec/m2)

Ngày thứ 7: kiểm tra số
lượng tế bào phân chia,
kiểm tra xem có dấu hiệu
của sự nhiễm bẩn không.
20
4.1.1 nuôi cấy tế bào protoplast thuốc lá
4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật