
I HC M THÀNH PH H CHÍ MINH

oOo


NG DNG K THUT SINH HC PHÂN T
NH T BIN TRÊN GEN K-RAS:
M PHÂN T GIÁN TIU
TR UNI TRC TRÀNG






MSSV: 1053012873
 2014
 



gian 


Hình 1.7. Các loi thuu tr nh th EGFR [20]  12
Hình 1.8. EGFR  13
Hình 1.9. Cu trúc th th EGFR [37] 14
Hình 1.10. V trí gen K-Ras trên NST s 12 15
Hình 1.11. [4] 17
Hình 3.1. T l t bin ca by v trí ph bin trên gen K-ras
ng s 34
Hình 3.2.K-rast bin
trên gen (B) 36
Hình 3.3. V trí cp mi phn ng PCR khui exon 1 gen K-ras 42
Hình 3.4. V trí bt cp ca các mi (trong phn ng AS-PCR) và các mi/mu
dò (trong phn ng AS Real-time PCR) 42
 Kt qu PCR vi cp mi K-ras trên 2 mu bnh
phm 9 và 16. Thang chun 100 bp 46
Hình 3.6. Kt qu DNA
và n mi K-ras. Thang chun 100 bp. 47

Hình 3.7. Kt qup mi K-ras.
Thang chun 100 bp. 48
Hình 3.8. Mt st bin phát hic bi
trình t 49
Hình 3.9. Kt qu gii trình t codon 12 và 13 trên các mu 51
Hình 3.10. Mu 33 vi tín hiu nn b nhiu 51
Hình 3.11. Kt qu-PCR trên ba mu 18, 20 và 16. 55
Hình 3.12. Kt qu-PCR trên ba mn
ng 75 V, thi gian 30 phút) 56
Hình 3.13. Kt qu-PCR trên ba mn

Bng 3.12. Tng s t bin trên các mu 52

DANH MC CH VIT TT
A : Adenine
ANOVA : Analysis of value
AS-PCR : Allele-specific Polymerase Chain Reaction
AS-Real-Time PCR : Allele-specific Real Time Polymerase Chain Reaction
ATP : Adenosine triphosphate
ADP : Adenosine diphosphate
BCR : Breakpoint cluster region
BLAST : Basic Local Alignment Search Tool
bp : base pair
C : Cytosine
COLD-PCR : Coamplification at Lower Denaturation temp PCR
DNA : Deoxyribonucleic acid
EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid
EGF : Epidermal Growth Factor
EGFR : Epidermal Growth Factor Receptor
ErbB : V-erb-b2 erythroblastic leukemia viral oncogene hom-
olog
FISH : Fluorescent in situ hybridization
G : Guanidine
Grb2 : Growth factor receptor-bound protein 2
HRM : High Resolution Melting
K-ras : Kirsten-ras/ V-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral
oncogene homolog
LNA-PCR : Locked nucleic acid PCR

 46 
 1


1.  3
2.         
CANCER): 4
3.  8
4.  .
9
4.1.V  ca liu pháp nh 9
4.2.V thuu tr: 10
5. N: 12
6. EGFR: 12
7. K-ras: 15
8. --REAL-TIME PCR: 18


1. VT LIU 19
2. U 19
2.1.Khai thác d liu và kho sát in silico 19
2.2.Kho sát in vitro 21
PH
1. KT QU KHAI THÁC D LIU VÀ KHO SÁT IN SILICO 28
1


i trc tràng (colorectal cancer  nh có s i
cht ph bin th  gii, d dày và gan. CRC có th
c cha khi nc phát hin sm. i trc tràng khi
chuy    i là nguyên nhân chính gây t vong  các bnh nhân
CRC.
, mng 7,6 trii ch
trên toàn th ging 70 % các ca t vong xy ra  c
có thu nhp th
n.
Nhi s phát trin mnh m ca sinh hc phân t, các
b      c cha tr b    u tr
truyn thu thut, hóa tr liu hoc x tr li h ng
du tr theo mt liu pháp mi hiu qu c h u
u pháp mi cho thy có nhim,
c bit khi bu tr bng hóa hc tr liu tht bi thì có th dùng liu
pháp này, tác dng ph ít (ch ni ban trên da), khi s dng kt hp liu pháp
mi vi pc tr liu s giúp kéo dài s snh
nhân.
K-ras là thành viên cRas mã hoá cho protein G vi hot
ng GTPase ni bào. K-ras nng truyn tín hiu ca EGFR.
Protein K-ras hot công tc phân t ng truyn tín
hiu ni bào nh các chng cho s tin trin ca
t bào, bao gm c s bit hóa, s phát trin và cht theo chu trình. t
bin trên gen K-ras t bim) dn hong GTPase ca
protein K-ras b suy gim, GTP không b ct thành GDP    ng

 
 



[44].
Ung  phát sinh    bào         bào bình
 thành  bào  u là  quá trình  giai   là   
      ung   các  u ác tính.  thay  này là
     tác  các   di    và các tác nhân bên
ngoài [44], bao 
Tác nhân vt lý, chng hn  bc x t ngoi và bc x ion hóa.
Tác nhân hóa hc, chng hn  amiang, các thành phn ca khói thuc lá,
aflatoxin (cht gây ô nhim thc phm) và thch tín (mt cht gây ô nhim c
ung).
Tác nhân sinh hc, chng hn  nhim trùng virus, vi khun hoc ký sinh
trùng.
 theo WHO, ung  là nguyên nhân hàng  trên     
vong và  7.6  ca  vong  13% trong   các ca  vong)
 2008, và các  ung  chính là:
  (1.370.000    vong)
  dày (736.000    vong)
 Gan (695.000    vong)
   tràng (608.000    vong)
 Vú (458.000    vong)
 C  cung (275.000    vong)

4

Khong 70% ca tt c các ca t vong do ung  xy ra  các c có thu




Â
-.



6 Hình 1.3. T l mc các bph bii
trc tràng (màu vàng)  nam gii trên th gii [13]

Hình 1.4. T l mc các b bii
trc tràng (màu vàng)  n gii trên th gii [13]

              

,6 
,6 %) (Hình 1.4 và 1.5).

7 Hình 1.5. T l mc T l mc các b bi
i trc tràng (màu vàng)  nam gii ti Vit Nam [13]

Hình 1.6. T l mc các bnh ung th bii
trc tràng (màu vàng)  n gii ti Vit Nam [13]

hay polyp không.
Ni soi: ng hi tin, kt qu
kim tra trc tràng không thy thông s b ng, nên thc hin ni soi.
Không nhng có th phát hic các loi bi tràng bin chng mà còn
có th thc hin sinh thit các mô.
Vi s phát trin ca ngành sinh hc phân t    
pháp chng dng sinh hc phân t c phát trin. C
th t bin trên các gen liên quan bng PCR [5], gii
trình t [19, 29]m tra phát hin kháng nguyên bng
hóa mô min d  nh chính xác cao
c giúp cho vic phát hin si
trc tràng.

9

4. 
:
S phá v ng ca t
bào là trung tâm ca vic dn b gc tìm hiu
nhi phân t - nguyên nhân dn s phát tri
cng thông tin trin vng v vic u tr p lý và hiu qu 
Mt trong nhu tr  [35].
Thut ng liu pháp nh  cn mt th h mi ca
thuc chc sn xut nhm can thip vào mc tiêu phân t c th
ng là mc cho là có vai trò quan trng trong phát trin g
sinh khi u. Vinh các  da trên mt s hiu bit chi tit v nhng
i phân t , t c các loi thuu tr
phù hp. Sau khi thâm nh thuc s chú ý la chn v trí
kh kt hp phát huy tác dng, khin cho t  tiêu dit mt
cách có m chc t bào khe mnh

ch tác d:
Nhóm 1: 

liê
       Imatinib, Dasatinib,
Bosutinib, Trastuzumab, Pertuzumab, Panitumumab, Crizotinib


Varinostat, Romidep-
sin, Bexarotene, Alitretioic.

trình apoptosis.

11

           Bortezomib,
Carfizomib, Pralatrexate.
 



ng
           Bevacizumab,
Sorafenib, Ziv-aflibercept, Sunitinib, Pazopanib, Cabozantinib.
    
.
           Rituximab,
Alemtuzumab, Ofatumumab, Ipilimumab.
Nhóm 6
.


13

  
EGFR. n trong t bào trng khong 60
kDa là protein kinase v      y ra phn ng t
phosphoryl hóa ca EGFR [45].

Hình 1.8. EGFR 
Th th yu t phát trin biu mô (EGFR) là nhóm   m nhn
tyrosine kina c phát hi u tiên bi Carpenter và cng s vào 
1978. H protein EGFR bao gm 4 thành viên- EGFR (HER1/ErbB1), HER2
(ErbB2), HER3 (ErbB3) và HER4 (ErbB4). Các protein này có vai trò quan
trng trong viu hòa các quá trình phát trin, bit hóa và các ch
sinh hc ca t bào [11]
Phân t EGFR gm mt vùng gn kt các phi t nm ngoài màng t bào,
mc hiu và mt vùng ni bào [15].

14 Hình 1.9. Cu trúc th th EGFR [37].
Hot tính tyrosine ni bào cc hot hóa khi EGFR liên kt vi
các phi t c hot hóa, vùng ni
bào ca EGFR s t phosphoryl hóa, khu mt dòng thác tín hiu lan ta
khp t bào gây kích hong PI3K/Akt, s 
và c ch quá trình ch      u
      ng dn truyn tín hiu
phiên mã. Trong các t bào khe mng tín hiu nc