Tạp chí KHKT Nông nghiệp, Tập 2, số 3/2004
Nghiên cứu qui trình nhân nhanh in vitro cây đu đủ
(Carica papaya L)
Use of in-vitro culture for rapid propagation of papaya (Carica papaya L.)
Nguyễn Thị Nhẫn
1
Summary
For rapid propagation of
Carica papaya L
, in-vitro culture method was tried using young
shoot-tips as explants. The explants were surface sterilized using 15% Ca(0Cl)
2
for 15 minutes
and 0. 1% HgCl
2
for 3 minutes (double sterilization). The young shoot-tips were cultured on
the MS medium supplemented with NAA (0.2ppm), BA (0.5ppm) and kinetin (0.5ppm) for
multiple shoot induction. After 3-4 weeks, the shoot-tips developed and formed multishoot
clumps, which were then sub-cultured. The 1/2 diluted nutrients of MS medium containing
0.5g/l charcoal was used for plantlet regeneration. It was found that medium MS + NAA
(0.2ppm) + BA (0.5ppm) + coconut
juice (5%) was optimal for multiplication of shoots. It was
also shown that combination of soil and burnt rice husk at a ratio of 1:1 was a suitable
substrate for transferring the plantlets to the greenhouse.
Keywords: Papaya, in vitro, culture, modified MS medium.

1. Đặt vấn đề
1
Đu đủ (Carica papaya L.) là cây ăn quả
nhiệt đới có giá trị dinh dỡng cao, đặc biệt là
vitamin A (cao gấp 10 lần so với chuối dứa và

Đối tợng nghiên cứu là giống đu đủ Đài
Loan đợc nhập qua trung tâm VAC, Trờng
Đại học Nông nghiệp I (ĐHNNI). Nguyên
liệu sử dụng trong nhân giống là các chồi ngọn
trên cây con có 3-4 tuần tuổi và đỉnh sinh
trởng của các chồi nhánh trên cây đu đủ đang
cho thu quả. Các chồi đợc thu về, rửa sạch,
khử trùng bằng hypocloric canxi (Ca(OCl)
2
)
5% và clorua thuỷ ngân (HgCl
2
) 0,1%, sau đó
đa vào nuôi cấy trên môi trờng MS
174
Nghiên cứu qui trình nhân nhanh in vitro cây đu đủ
(Murashige Skoog). Các phơng thức khử
trùng nh sau:
Công thức1: Đối chứng (rửa bằng nớc vô
trùng);
Công thức 2: Hypocloric canxi 5% trong
thời gian 15 phút;
Công thức 3: Clorua thuỷ ngân 0,1% trong
3 phút;
Công thức 4: Khử trùng kép (khử trùng
Ca(OCl)
2
trớc, sau đó khử trùng tiếp bằng
HgCl
2

78
60
20
10
11
2
0
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Tỷ lệ mẫu sạch (%)
Ca(0Cl)2 +
HgCl2
HgCl2 Ca(0Cl)2 Đ/C
Phơng thức KT
Mẫu từ vờn ơm Mẫu từ vờn sản xuất
Hình 1.

Hiệu quả của các phơng thức khử trùng

Kết quả trên hình 1 cho thấy: chồi đu đủ bắt
buộc phải khử trùng mẫu trớc khi đa vào
nuôi cấy. Phơng thức khử trùng có hiệu quả

6 0,2 0,0 1,0 70 30 100 3,2 1,6
7 0,2 0,5 0,5 70 30 100 3,5 1,6 175
Nguyễn Thị Nhẫn
ảnh hởng của chất điều tiết sinh trởng trong
quá trình tạo chồi từ mẫu cấy ban đầu
Một trong những vai trò quan trọng của
xytokinin là kích thích sự phân hoá của mô
cấy theo hớng tạo chồi. Trên cơ sở đó, chúng
tôi đã bổ sung vào môi trờng nuôi cấy
kinetin, benzin adenin (BA) với nồng độ từ 0,5
1,0ppm và có sự kết hợp với NAA ở nồng độ
0,2ppm. Kết quả đợc trình bày trên bảng 1
cho thấy: đối với cây đu đủ, chất điều tiết sinh
trởng (ĐTST) rất cần cho sự tạo chồi từ mô
cấy ban đầu. Tất cả các công thức có bổ sung
chất ĐTST (trừ CT1) đều cho tỷ lệ tái sinh
chồi 100%, riêng các công thức có bổ sung
kinetin và BA số chồi trung bình/mẫu cấy dao
động từ 2,2 3,5. Cả 2 loại xytokinin với
nồng độ 1 ppm đều cho số chồi nhiều hơn
nồng độ 0,5ppm. Cũng là nồng độ 1ppm,
nhng khi sử dụng phối hợp 0,5K với 0,5BA,
số chồi/ mẫu cấy đạt cao nhất (CT7).
4.2
4.2
4.5
3

.
5K+0
.
5BA
Chất ĐTST(ppm)
HSN (số lần/tháng)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
2
Chiều cao chồi(cm)
Hệ số nhân chồi(lần) Chiều cao cụm chồi
3.2. Kỹ thuật nhân nhanh cụm chồi
ảnh hởng của kinetin và BA đến hệ số
nhân chồi
Từ kết quả trên, chúng tôi đã chọn
kinetin và BA trên nền MS có nồng độ
0,2ppm NAA để tiếp tục nhân các cụm chồi
thu đợc. Kết quả mô tả ở hình 2 cho thấy:
trong giai đoạn nhân nhanh, nồng độ
xytokinin thích hợp cho sự hình thành các
chồi mới từ các cụm chồi cấy chuyển chỉ là
0,5ppm. ở nồng độ này, hệ số nhân (HSN)

Công thức
HSN
(lần)
Tăng chiều
cao cụm
chồi (cm)
Tăng khối
lợng cụm
chồi (g)
HSN
(lần)
Tăng chiều cao
cụm chồi (cm)
Tăng khối
lợng cụm
chồi (g)
1. MS(đ/c) 2,8 0,7 1,98 2,7 1,4 2,10
2.MS+ND 3,3 1,1 2,78 3,2 2,1 3,49
3.MS+ĐTST 3,6 1,2 2,97 3,1 2,6 3,12
4.MS+ĐTST+ND 4,6 1,2 3,44 4,4 3,3 3,69

Khi so sánh hiệu quả của 2 trạng thái môi
trờng khác nhau chúng tôi nhận thấy chồi đu
đủ hình thành thuận lợi hơn trên môi trờng
có agar. ở môi trờng này HSN luôn cao hơn
môi trờng lỏng ở tất cả các công thức thí
nghiệm. Ngợc lại, khả năng sinh trởng của
các cụm chồi lại mạnh hơn trên môi trờng
lỏng (hình 3).
Nh vậy để nhân nhanh chồi đu đủ, chúng ta

3.5
4
4.5
5
Hệ số nhân chồi (lần)
1234
Công thức thí nghiệm
Môi trờng đặc Môi trờng lỏng
1.98
2.1
2.78
3.49
2.97
3.12
3.44
3.69
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
Tăng khối lợng(g)
1234
Công thức thí nghiệm
Môi trờng đặc Môi trờng lỏng
Hình 3. So sánh hiệu quả của môi trờng đặc và môi trờng lỏng trong giai đoạn nhân chồi

tỷ lệ chồi ra rễ tăng nhanh và số rễ/ cây cũng
tăng từ 3,5 lên 4,2 rễ.
Bảng 3. ảnh hởng của NAA đến quá trình ra rễ của chồi đu đủ trong ống nghiệm
Tỷ lệ chồi ra rễsau khi cấy (%)
Rễ/cây( rễ sau
30 ngày)
CT
NAA
(ppm)
10 ngày 20 ngày 30 ngày
Dài tb rễ
(cm)
Chất lợng
bộ rễ
1(đ/c) 0,000 27 38 71 2,9 0.5 2,6 0,7 TB
2 0,025 40 78 95 4,1 0.4 3,1 0,3 Tốt
3 0,050 19 40 66 3,2 0,3 2,5 0,6 TB
4 0,100 11 24 40 2,3 0,6 2,7 0,5 TB
Bảng 4. ảnh hởng của hàm lợng dinh dỡng và than hoạt tính đến quá trình
ra rễ của chồi đu đủ in vitro
Tỷ lệ chồi ra rễ(%) Chất lợng bộ rễ
CT Môi trờng
TG ra rễ
(ngày)
1 tuần 2 tuần 3 tuần 4 tuần 5 tuần rễ/cây Dài(cm)
1 MS 8 6,7 26,7 42,3 76,7 93,3 1,4 1,4
2 MS+THT 8 10,2 28,0 45,1 91,3 92.7 2,5 1,6
3 1/2MS 5 16,7 36,7 54,0 96,7 100,0 3,5 2,4
4 1/2MS+THT 4 20,4 42,3 60,8 100 - 4.2 2,2
3 1/4MS 6 13,3 40,0 71,7 90,0 100,0 1,7 3,7