Các phương pháp
Các phương pháp
Chuyển gen ở thực vật
Chuyển gen ở thực vật
và ứng dụng
và ứng dụng
Chuyên đề
chuyển gen ở thực vật
chuyển gen ở thực vậtHệ thống
Hệ thống
nuôi cấy
nuôi cấy và
tái sinh
tái sinh
in vitro
in vitroVectơ chuyển gen
Vectơ chuyển gen
Phương pháp chuyển DNA vào mô, tế bào
Phương pháp chuyển DNA vào mô, tế bàothực vật
thực vật
Chọn lọc và xác định các thể biến nạp
Chọn lọc và xác định các thể biến nạp

Khả
Khả
nng
nng
tái sinh phụ thuộc:
tái sinh phụ thuộc:
* Dạng vật liệu ban đầu
- Phôi non, mô sẹo tạo thành từ phôi non
- Chồi tái sinh trực tiếp hay thông qua phôi soma tạo thành từ
cuống lá, lá mầm, mẩu lá, thân mầm
* iều kiện nuôi cấy, kiểu gen, tuổi mô, các chất HST
Vectơ chuyển gen
Vectơ chuyển genoạn
oạn
khởi động gen:
khởi động gen:- Không đặc hiệu (đoạn khởi động cơ định): Ubi-P; CaMV35S-P;
- Không đặc hiệu (đoạn khởi động cơ định): Ubi-P; CaMV35S-P; Act-P, NOS-P; Adh-P
Act-P, NOS-P; Adh-P
hpt; npt II; pat, pmi; xylA
hpt; npt II; pat, pmi; xylA+ Chỉ thị sàng lọc:
+ Chỉ thị sàng lọc:
cat; lacZ, gus; lux, gfp
cat; lacZ, gus; lux, gfp
Chuyển gen gián tiếp
Chuyển gen gián tiếp
Chuyển gen trực tiếp
Chuyển gen trực tiếp

Các phương pháp chuyển gen ở thực vật
Chuyển gen thông
Chuyển gen thông
qua
qua
Agrobacterium
Agrobacteriumin vitro
in vitro
Chuyển gen thông
Chuyển gen thông
qua
qua

Chọn lọc các tế bào chuyển gen
Chọn lọc các tế bào chuyển genMô tả cây chuyển gen
Mô tả cây chuyển genThử nghiệm đồng ruộng cây chuyển gen
Thử nghiệm đồng ruộng cây chuyển gen
-
PCR: xác định sự có mặt của gen được chuyển nạp
-
Southern: xác định số bản sao của gen được chuyển nạp
- Nothern và Western: xác định biểu hiện gen và sinh tổng hợp protein
- ánh giá về kiểu hinh và kiểu gen
- ánh giá rủi ro, ảnh hưởng của cây chuyển gen đến môi trường, con người
-
oạn trinh tự lặp lại 25bp (đoạn biên): dấu hiệu nhận biết cho quá trinh chuyển và
xâm nhập của T-DNA vào TBTV
-
oạn biên phải có yếu tố điều khiển cis cần cho quá trình chuyển T-DNA;
-
oạn biên trái gián tiếp tham gia vào quá trỡnh chuyển T-DNA và là dấu hiệu để
quá trinh này kết thúc binh thường
Phương pháp chuyển gen thông qua
Phương pháp chuyển gen thông qua
A. tumefaciens
A. tumefaciens