Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 24 ‐ 
 
CHƯƠNG 2
NGUYÊN LIỆU
VÀ
PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU
Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 25 ‐ 
 

2.1. Nguyên vật liệu
2.1.1. Đòa điểm nghiên cứu
- Phòng thí nghiệm Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa
Tp.HCM, số 268 Lý Thường Kiệt, Quận 10, Tp.HCM.
- Phòng thí nghiệm vi sinh, Trường Cao đẳng Kinh tế – Công nghệ
Tp.HCM, số 547/M8 Thành Thái, P14, Quận 10, Tp.HCM.
2.1.2. Nguyên liệu
- Sữa gầy.
- Lactose.
- Whey powder.
- Giống vi khuẩn lactic: Lactobacillus acidophilus từ chế phẩm ANTIBIO.
2.1.3. Dụng cụ và thiết bò
- Dụng cụ:
9 Ống nghiệm, giá đỡ ống nghiệm.

- Môi trường MRS – agar.

- Môi trường huyết thanh sữa.

- Môi trường carbonate – agar .

- Môi trường thử khả năng lên men các nguồn carbonhydrate.

- Thuốc thử Uphenmen.

2.1.5. Phương pháp xử lý số liệu
- Phần mềm Excel.
- Phần mềm R.
Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 27 ‐ 
 

2.2. Phương pháp nghiên cứu
 
Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu
Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 28 ‐ 
 

2.2.1. Phương pháp phân lập và chọn giống vi khuẩn L.acidophilus [4, 8]
- Nguyên tắc: dựa trên sự pha loãng và kết hợp với nuôi cấy trên môi
trường dinh dưỡng chọn lọc cho vi sinh vật cần phân lập để tạo ra chủng
thuần.

, 10
-3
, 10
-4
, 10
-5
, 10
-6
, 10
-7
.
9 Lấy 300μl giống cấy trải trên môi trường MRS – agar.
9 Nuôi ủ trong tủ ấm ở 37
o
C, 24h.
Bước 2: Chọn lọc giống lần 1
9 Quan sát mẫu đã phân lập.
9 Chọn khuẩn lạc mọc rời riêng rẽ.
9 Cấy ria khuẩn lạc đó trên môi trường MRS – agar.
9 Nuôi ủ trong tủ ấm 37
o
C, 24h.
Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 29 ‐ 
 
Bước 3: Chọn lọc giống lần 2
9 Quan sát và chọn khuẩn lạc mọc rời riêng rẽ.
9 Cấy ria trên môi trường MRS – agar.
9 Cấy vào ống nghiệm thạch nghiêng để tiến hành giữ giống.

- Cách tiến hành:
9 Cấy điểm giống vi khuẩn và môi trường CaCO
3
.
9 Nuôi ủ ở 37
o
C trong 24h.
9 Quan sát và ghi nhận sự xuất hiện vòng tan.
Chương 2: Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp

‐ 30 ‐ 
 

2.2.2.3. Thử nghiệm khả năng sinh acid lactic
[4]
- Nguyên tắc: thuốc thử Uphemen khi tác dụng với acid lactic sẽ đổi màu
từ tím sang vàng rơm. Sự đổi màu càng mạnh thì lượng acid sinh ra càng
nhiều.
- Cách tiến hành:
9 Nuôi ủ chủng Lactobacillus acidophilus trong môi trường huyết
thanh sữa ở 37
o
C trong 24h. Đem ly tâm 5000 vòng/phút trong 5
phút, thu lấy dòch trong và tiến hành bố trí thí nghiệm như sau:
 Ống nghiệm 1: 5ml thuốc thử Uphemen + 0,7ml nước cất.
 Ống nghiệm 2: 5ml thuốc thử Uphemen + 0,7ml môi trường
không nuôi cấy vi khuẩn Lactobacillus acidophilus.
 Ống nghiệm 3: 5ml thuốc thử Uphemen + 0,7ml acid lactic 2%.
 Ống nghiệm 4: 5ml thuốc thử Uphemen + 0,7ml dòch trong môi
trường nuôi vi khuẩn.