1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
************

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

NG DNG K THUT MULTIPLEX - PCR  PHÁT HIN CÁC GEN C
LC CA VI KHUN
ESCHERICHIA COLI PHÂN LP T
PHÂN BÒ, PHÂN HEO TIÊU CHY
VÀ THT BÒ Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khóa : 2001 – 2005
Sinh viên thực hiện : ĐOÀN THỊ TUYẾT LÊ

ESCHERICHIA COLI PHÂN LP T
PHÂN BÒ, PHÂN HEO TIÊU CHY
VÀ THT BÒ

Giáo viên hng dn: Sinh viên
thc hin:
PGS. TS. NGUYN NGC TUÂN OÀN
TH TUYT LÊ
BSTY. BÙI THỊ THU TRANG Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2005 3LỜI CẢM TẠ

Tôi xin chân thành gởi lời cảm tạ với tấm lòng biết ơn sâu sắc đến:

TÓM TẮT ĐOÀN THỊ TUYẾT LÊ, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, Tháng 8/2005. “ỨNG
DỤNG KỸ THUẬT MULTIPLEX – PCR ĐỂ PHÁT HIỆN CÁC GEN ĐỘC LỰC
CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI PHÂN LẬP TỪ PHÂN BÒ, PHÂN HEO
TIÊU CHẢY VÀ THỊT BÒ”.

Hội đồng hướng dẫn:
PGS. TS. Nguyễn Ngọc Tuân
BSTY. Bùi Thị Thu Trang

Đề tài được thực hiện nhằm xác định các gen độc lực stx1, stx2, eae, hly, lt-I,
sta, stb, vt2e của vi khuẩn E. coli được phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy của bò, heo,
bê và 9 mẫu bề mặt thịt bò bằng kỹ thuật multiplex – PCR. Ghi nhận được khuẩn lạc
hồng trên môi trường MAC; trên SMAC có 2 loại: khuẩn lạc hồng và khuẩn lạc trắng;
khuẩn lạc trắng trên CT-SMAC. Mỗi nhóm chọn khoảng 6 – 10 khuẩn lạc riêng lẻ. Ly
trích DNA theo nhóm khuẩn lạc và từng khuẩn lạc riêng lẻ theo phương pháp nhiệt.
Kết quả multiplex - PCR được ghi nhận như sau:
(1) Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực thì chưa chắc từng khuẩn lạc riêng lẻ có
mang gen độc lực đó.
(2) Tần số phát hiện các gen độc lực của E. coli từ những mẫu phân tiêu chảy lần
lượt là: 25% trên phân bò tiêu chảy (stx2, hly), 30% trên phân bê tiêu chảy
(stx1, stx2, hly, eae), 88,89% trên phân heo tiêu chảy (stb, lt, vt2e, hly, stx1,
eae). Điều này chứng tỏ rằng trên cả 3 nhóm đối tượng trên, E. coli mang các
gen độc lực có thể là nguyên nhân quan trọng gây tiêu chảy.
(3) 9 mẫu bề mặt thịt bò chưa phát hiện được gen độc lực của E. coli.
(4) Chưa phát hiện được gen sta trong E. coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy
của bò, bê và heo.


weren’t detected. 6MỤC LỤC

CHƯƠNG TRANG
Trang tựa
Lời cảm tạ iii
Tóm tắt iv
Summary v
Mục lục vi
Danh sách các chữ viết tắt viii
Danh sách các hình x
Danh sách các bảng xi

1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1
2. TỔNG QUAN 3
2.1. Vi khuẩn E. coli 3

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27
4.1. Kết quả phân nhóm khuẩn lạc và xác định E. coli từ các khuẩn lạc
phân lập được 27
4.1.1. Các loại khuẩn lạc trên môi trường
thạch MAC, SMAC, và CT-SMAC 27
4.1.2. Xác định E. coli cho các khuẩn lạc được chọn. 27
4.2. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân bò tiêu chảy 28
4.3. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân heo tiêu chảy 32
4.4. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân bê tiêu chảy 36
4.5. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli
phân lập từ mẫu bề mặt thịt bò 38
4.6. Tổng kết kết quả phát hiện các gen độc lực
của E. coli trên các mẫu khảo sát 39
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41
5.1. Kết luận 41

8
5.2. Đề nghị 41
6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 42
7. PHỤ LỤC 46
DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

A/A : Aggregative adhesion
A/E : Attaching and effacing
CF : Colonization factor
CFA : Colonization factor antigen
CT : Cholera toxin

TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam
Tir : Translocated intimin receptor
Tm : Melting temperature
TS : Khuẩn lạc trắng trên môi trường SMAC
UV : Ultra violet
VT : Verotoxin
VTEC : Verotoxigenic E. coli