LỜI CẢM TẠ
Tôi xin chân thành cảm ơn đến:
Gia đình đã tạo nhiều điều kiện thuận lợi cho tôi cả về vật chất lẫn tinh
thần, là chỗ dựa vững chắc để tôi học tập tốt.
Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban
chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ sinh học, cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt kiến
thức cho tôi trong suốt quá trình học tại trường.
Thầy Nguyễn Ngọc Tuân đã tận tình hướng dẫn, hỗ trợ và truyền đạt những
kiến thức quý báu cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.
BSTY Bùi Thị Thu Trang đã nhiệt tình hướng dẫn, động viên và giúp đỡ tôi
trong thời gian thực hiện đề tài.
BSTY Lê Hữu Ngọc, phòng thực hành Kiểm nghiệm Thú sản và Môi
Trường, Khoa CNTY Trường Đại học Nông Lâm TP. HCM.
Quý thầy cô, cán bộ công chức tại Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa
sinh Trường Đại học Nông Lâm TP. HCM.
Các bạn bè thân yêu của lớp CNSH K27 đã chia sẻ cùng tôi những vui buồn
trong thời gian học cũng như hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ tôi trong thời gian thực tập.
Chân thành cảm ơn
Đàm Thị Minh Thơ
TÓM TẮT
iii
ĐÀM THỊ MINH THƠ, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, tháng 9/2005.
“ỨNG DỤNG KĨ THUẬT MULTIPLEX – PCR ĐỂ PHÁT HIỆN MỘT SỐ GEN
ĐỘC LỰC CỦA NHÓM E. COLI SẢN SINH ĐỘC TỐ SHIGA (STEC) PHÂN
LẬP ĐƯỢC TỪ PHÂN BÒ, HEO TIÊU CHẢY VÀ THỊT BÒ”.
Hội đồng hướng dẫn:
PGS. TS Nguyễn Ngọc Tuân
BSTY Bùi Thị Thu Trang

Đề tài được thực hiện nhằm phát hiện các gen độc lực stx1, stx2, eae, ehxA,
và gen uid của vi khuẩn E. coli được phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy của bò,

iv
“The application of multiplex - PCR in detecting some virulent genes of
E. coli isolated from diarrhea faeces of bovine and swine, swabs of beef
surface”
The study was carried out to detect stx1, stx2, eae, ehxA and uid genes of
isolated E. coli from 27 diarrhea stools samples of bovines, calves, piglets, and 9
swabs of the beef surface by multiplex - PCR. There was the observing on each
the isolating medium: one kind of pink colony on MAC (HM), white colony on
SMAC (TS), pink colony on SMAC (HS), white colony on CT-SMAC (TCT), and
pink colony on CT-SMAC (HCT). Each colony group was chosen about 6 – 10
separate colonies. DNA of the colony groups and each separate colonies were
extracted by the heat method. The results of multiplex - PCR were showed that:
(1) The colony group had virulent genes, the separate colony
belonging to that group did or did not have those genes.
(2) Frequency of ehxA gene of isolated E. coli from diarrhea stools samples
was 100%; stx gene was 50% from bovine; 100% from calves; 44.4% from
piglets.
In diarrhea bovine stools samples: 5 of 10 samples (50%) detected E.
coli carrying stx gene, all of 10 samples (100%) were detected E. coli
carrying ehxA gene, 4 of 10 samples (40%) were detected E. coli carrying
stx2, 1 of 10 samples (10%) were detected E. coli carrying stx1, none of
those samples were detected E. coli carrying uid and eae.
In diarrhea piglet stools samples: 4 of 9 samples (44.4%) were
detected E. coli carrying stx, including of 1 of 4 samples were detected E.
coli carrying stx1 (25%) and 3 of 4 samples were detected E. coli carrying
stx2 (75%); all of 9 samples (100%) were detected E. coli carrying ehxA,
and no sample was detected E. coli carrying uid and eae.
In diarrhea calf stools samples: all of 8 samples (100%) were detected
no less than one virulent gene, some samples were detected 2-3 virulent
genes; 7 of 8 samples (87.5%) were detected stx1 gene; 1 of 8 samples

2.2.2.1. Độc tố Shiga (Stx) ......................................................... 6
2.2.2.2. Enterohemolysin............................................................ 8
2.2.2.3. Yếu tố bám dính............................................................. 8
2.2.3. Cách sinh bệnh......................................................................... 9
2.2.4. Khía cạnh lâm sàng .................................................................10
2.2.5. Dịch tễ học .............................................................................11
2.2.6. Chẩn đoán............................................................................... 12
2.2.7. Phòng ngừa............................................................................. 12
vi
2.3. Serotype O157:H7 ...............................................................................12
2.4. Kỹ thuật PCR..................................................................................... 14
2.4.1. Khái niệm ...............................................................................14
2.4.2. Nguyên tắc.............................................................................. 14
2.4.3. Các thành phần cần thiết của phản ứng PCR ...........................15
2.4.4. Phân tích kết quả PCR............................................................ 16
2.4.5 Multiplex – PCR...................................................................... 16
2.4.6. Ứng dụng................................................................................ 16
3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN........................................18
3.1.Thời gian và địa điểm thực hiện...........................................................18
3.1.1. Thời gian.................................................................................18
3.1.2. Địa điểm..................................................................................18
3.2. Nội dung thực hiện...............................................................................18
3.3. Phương pháp thực hiện.........................................................................18
3.3.1 Vật liệu thí nghiệm cơ bản .......................................................18
3.3.2. Cách lấy mẫu và bảo quản mẫu................................................19
3.3.2. Nuôi cấy và phân lập E. coli ...................................................19
3.3.2.1. Môi trường nuôi cấy......................................................19
3.3.2.2. Qui trình phân lập, định tính.........................................19
(1) Nuôi cấy và phân lập....................................................19
(2) Chọn khuẩn lạc E. coli ................................................20