LỜI CẢM TẠ
Xin tạc dạ ghi lòng công lao biển trời của cha mẹ đã sinh thành và nuôi nấng tôi.
Tôi xin chân thành cảm tạ:
• Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ
nhiệm Bộ Môn Công nghệ sinh học, cùng tất cả quý Thầy Cô đã truyền đạt kiến thức
cho tôi trong suốt quá trình học tại trường.
• ThS. Nguyễn Thái Thủy, ThS. Phan Thị Ngọc Thủy đã hết lòng hướng dẫn, giúp
đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập tốt nghiệp.
• TS. Phạm Hùng Vân, chị Phạm Thanh Thùy Trang, chị Võ Thị Thanh Thảo đã
tạo mọi điều kiện thuận lợi, tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình thực tập tại công ty Nam
Khoa.
• TS. Nguyễn Hữu Thịnh đã nhiệt tình giúp đỡ, truyền đạt nhiều kiến thức quý
báu.
• Ban Giám đốc công ty Nam Khoa và quý Thầy Cô, cán bộ công chức trẻ Trung
Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh Trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí
Minh đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp.
• Các bạn bè thân yêu của lớp Công nghệ sinh học khóa 27 đã chia sẻ cùng tôi
những vui buồn trong thời gian học cũng như hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ, động viên tôi
trong thời gian thực tập.
Tp Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 08 năm 2005.
Phạm Thị Mỹ Hạnh
iii
TÓM TẮT
PHẠM THỊ MỸ HẠNH, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Tháng 8/2005. “PHÁT
HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG (WSSV) TRÊN TÔM
SÚ (Penaeus monodon) BẰNG KỸ THUẬT REAL – TIME PCR”.
Hội đồng hướng dẫn:
ThS. PHAN THỊ NGỌC THỦY
ThS. NGUYỄN THÁI THỦY
Đề tài “Phát hiện và định lượng virus gây bệnh đốm trắng (WSSV) trên tôm sú
(Penaeus monodon) bằng kỹ thuật Real - time PCR” được thực hiện tại Công Ty Nam

Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon) by Using Real - time PCR” was carried out in
Nam Khoa company and at Chemical & Biological Analysis and Experiment Center of
Nong Lam University from March 1
st
, 2005 to August 1
st
, 2005. The object of the thesis
is White Spot Syndrome Virus (WSSV) in black tiger shrimp. This virus has caused an
epidermic viral disease outbreak occurred on cultured black tiger shrimp (Penaeus
monodon) which had caused severe economic losses to the shrimp production in
Vietnam and around the world. Using Real – time PCR for detection and quantification
WSSV in cultured black tiger shrimp at all stages aims to rapidly, precisely detect and
quantify WSSV in cultured black tiger shrimp in order to prevent the occurrence and
outspread of the disease outbreak.
My obtained results include:
• An appropriate DNA extraction protocol for Real - time PCR and Non Stop
Nested PCR reactions.
• Successful application of Real - time PCR to detect and quantify WSSV in black
tiger shrimp.
• Capacity of precise WSSV quantification of Real - time PCR with highly
repeated results.
• Comparision the sensitivity of Real - time PCR with Non Stop Nested PCR.
• Application of Real - time PCR to detect and quantify WSSV in 30 collected
samples of cultured black tiger shrimp at all stages. The result indicated that there
are 22 samples infected with WSSV from very light to severe infection and 8
samples uninfected with WSSV.
• Preliminary evaluation of the success of cultured ponds stocked with WSSV
infected shrimp seeds or cultured shrimp infected with WSSV.
v
MỤC LỤC

vi
2.3.6. Phương pháp chẩn đoán...........................................................................11
2.4. Phương pháp PCR và các cải tiến....................................................................12
2.4.1. Phương pháp PCR....................................................................................12
2.4.1.1. Nguyên tắc....................................................................................12
2.4.1.2. Các thành phần của phản ứng PCR..............................................13
2.4.1.3. Các bước phản ứng.......................................................................13
2.4.1.4. Ứng dụng......................................................................................14
2.4.1.5. Ưu và nhược điểm........................................................................14
2.4.2. Kỹ thuật Nested PCR...............................................................................15
2.4.2.1. Nguyên tắc....................................................................................15
2.4.2.2. Ưu và nhược điểm........................................................................16
2.4.3. Kỹ thuật Real - time PCR........................................................................16
2.4.3.1. Lịch sử phát triển..........................................................................16
2.4.3.2. Khái niệm.....................................................................................17
2.4.3.3. Nguyên tắc....................................................................................17
2.4.3.4. Hệ thống Real - time PCR............................................................17
2.4.3.5. Phương pháp phát hiện tín hiệu Real - time PCR.........................18
2.4.3.6. Nguyên lý định lượng của kỹ thuật Real - time PCR...................22
2.4.3.7. Ưu và nhược điểm........................................................................23
2.4.3.8. Ứng dụng......................................................................................23
3.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU..........................................25
3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu....................................................................25
3.1.1. Thời gian thực hiện..................................................................................25
3.1.2. Địa điểm thu mẫu....................................................................................25
3.1.3. Địa điểm phân tích mẫu...........................................................................25
3.2. Nội dung nghiên cứu........................................................................................25
3.3. Nguyên vật liệu................................................................................................25
3.3.1. Mẫu xét nghiệm.......................................................................................25
3.3.2. Trang thiết bị, dụng cụ và hoá chất..........................................................26