THƯ VIỆN BỘ GEN
VÀ
THƯ VIỆN cDNA
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG
KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG
NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC
MH. KỸ THUẬT DI TRUYỀN
GVHD: TS. Trần Thị Dung
NỘI DUNG CHÍNH
THƯ VIỆN
cDNA
THƯ VIỆN
BỘ GEN
THƯ VIỆN BỘ GEN
KHÁI NIỆM
QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP
KHÁI NIỆM
•
Chia nhỏ DNA bộ gen và chèn chúng vào tế bào
chủ.
•
Chứa tất cả DNA bộ gen của sinh vật .
Thư viện gen
(Ngân hàng gen)

QUÁ TRÌNH THÀNH LẬP
TÁCH CHIẾT DNA
CẮT
GẮN VECTOR
ĐƯA VÀO TẾ BÀO
TẠO DÒNG


T4 polinucleotide kinase và alkaline phosphatase thường được sử dụng đồng thời
trên vector và đoạn DNA cần gắn xen trong kỉ thuật tạo dòng.
TẠO DNA TÁI TỔ HỢP
•
Sử dụng enzyme nối Ligase
ENZYME LIGASE
E.Coli DNA ligase
T4 DNA ligase
T4 RNA ligase
T4 POLYNUCLEOTIDE
KINASE
ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ
•
Mục đích:
–
Sử dụng bộ máy của tế bào chủ để sao chép vector tái tổ hợp thành một số lượng lớn bản sao
.Tuỳ thuộc loại tế bào chủ , người ta sử dụng một kĩ thuật chuyển thích hợp.
–
Tách chiết plasmid cho thí nghiệm tạo dòng.
ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ
•
Loại tế bào chủ
1.
E. coli
2.
Eukaryote
ĐƯA DNA TÁI TỔ HỢP VÀO TẾ BÀO CHỦ
•
Phương pháp thực hiện:

DNA bổ trợ (complementary DNA)
DNA tổng hợp từ mRNA với xúc tác của enzyme RT (reverse
transcriptase)
cDNA
KHÁI NIỆM
•
Tập hợp các cADN tổng hợp từ các mARN.
•
Thiết lập trên vector (plasmid hoặc phage lambda)
•
Đối tượng áp dụng: eukaryote
Thư viện cDNA
(Ngân hàng cDNA)
KHÁI NIỆM
THƯ VIỆN GEN THƯ VIỆN cDNA
1. Tập hợp các phân đoạn của DNA bộ gen
2. Chứa toàn bộ DNA của sinh vật
3. Tạo DNA tái tổ hợp đưa vào tế bào vật chủ.
4. Vật chủ: E.coli, Eukaryote
5. Vector: plasmid
1. tập hợp các bản sao cDNA từ tất cả các mARN
2. thiết lập từ một tế bào xác định
3. gen cần nghiên cứu phải biểu hiện thành mARN
4. Vector: phage lambda; plasmid
PHƯƠNG PHÁP
PHÂN LẬP RNA
TÁCH CHIẾT mRNA
TỔNG HỢP cDNA
TẠO DÒNG cDNA
XÁC ĐỊNH DÒNG