ĐH Nông Nghiệp Hà Nội
Khoa Công Nghệ Thực Phẩm
Tên đề tài: Ứng dụng công nghệ tái
tổ hợp DNA để sản xuất insulin
Sv thực hiện: Phạm Thị Thời
Lương Thị Hương
Lê Xuân Thiều
Gv giảng dạy: Nguyễn Văn Lâm

Mục lục
I. Insulin là gì?
II. Các phương pháp sản xuất insulin
III. Sản xuất innsulin bằng công nghệ tái tổ
hợp
IV. Kết luận

I. Insulin là gì?

Insulin là một hoocmon tiết ra từ tuyến tụy của cơ
thể động vật khi chúng tiêu hóa thức ăn.

Vai trò:
Glucose (máu)
Glycogen (gan và cơ)
Insulin

I. Insulin là gì?

Cấu trúc:
Insulin người là một polypeptide bao gồm một chuỗi

Proinsulin là gì?

Proinsulin là gì?
Proinsulin → Insulin
Proinsulin bị phân cắt bởi enzyme PC1/3 tại liên kết giữa
chuỗi B và peptide C và sau đó bị phân cắt bởi enzyme
PC2 ngay vị trí liên kết giữa chuỗi A và peptide C. Hai
acid amin đầu N của peptide nối với đầu C của chuỗi B
khi bị phân cắt bởi PC1/3 sẽ được phân cắt ra khỏi chuỗi
B bởi enzyme carboxypeptidase H. Kết quả cuối cùng của
quá trình phân cắt tạo thành insulin.

Enzyme PC1/3
Enzyme
PC2

Công nghệ tái tổ hợp DNA

Gen proinsulin
•
Lấy từ cơ thể người
•
PCR: Gen proinsulin → m RNA → DNA
đơn (như insulin)→DNA xoắn kép - gen proinsulin
•
Gen proinsulin được liên kết với lac operon với
galactosidase-P (cung cấp tín hiệu mở đầu và kết thúc
để tổng hợp insulin.
Microsoft
PowerPoint Presentation

ligase.
Micros oft
PowerPoint Presentation

Công nghệ tái tổ hợp DNA

Chuyển plasmid vào TB chủ E.Coli
•
Gây shock E.Coli bằng CaCl2 lạnh sau đó tăng nhiệt
độ đột ngột lên 42°C ,có tác dụng làm yếu màng TB
cho phép plasmid đi vào.

Xác định TB đã được chuyển gen proinsulin bằng
tetracycline
•
Trong quá trình chuyển gen, thì gen kháng
tetracycline bị phá vỡ vì vậy TB rất nhạy cảm với
tetra cycline
•
Tuy nhiên chúng vẫn kháng ampicillin
→Chọn lọc TB chứa gen proinsulin
Microsoft
PowerPoint Presentation

Công nghệ tái tổ hợp DNA

Nuôi cấy
•
Bổ sung vào môi trường nuôi cấy lactose, có tác
dụng kích hoạt lac-operon liên kết với proinsulin làm