Tiểu luận
Tiểu luậnTỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG
TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG

Các thành viên nhóm
Các thành viên nhóm
Phan Hoàng Trung Hiếu
Phan Hoàng Trung Hiếu
Phạm Trung Hiếu
Phạm Trung Hiếu
Trương Thị Ngọc Duyên
Trương Thị Ngọc Duyên
Nguyễn Tuấn Phong
Nguyễn Tuấn Phong
Phạm Ngọc Xuân
Phạm Ngọc Xuân

I.TỔNG QUAN SẮC KÍ.
I.1. Phương pháp sắc kí.
- Sắc kí là một họ các kĩ thuật hoá học phân tích
dùng để tách các chất trong một hỗn hợp.
-
Nó bao gồm việc cho mẫu chứa chất cần phân
tích trong "pha động", thường là dòng chảy
của dung môi, di chuyển qua "pha tĩnh." Pha
tĩnh trì hoãn sự di chuyển của các thành phần
trong mẫu. Khi các thành phần này di chuyển

tankhi chúng chảy qua pha tĩnh rắn hay
khi chúng chảy qua pha tĩnh rắn hay
lỏng. Nhiều kĩ thuật khác nhau đã được
lỏng. Nhiều kĩ thuật khác nhau đã được
dùng để phân tích hợp chất phức tạp
dùng để phân tích hợp chất phức tạp
dựa trên ái tính khác nhau của các chất
dựa trên ái tính khác nhau của các chất
trong môi trường động khí hoặc lỏng và
trong môi trường động khí hoặc lỏng và
đối với môi trường
đối với môi trường
hấp
hấpphụ
phụ
tĩnh mà
tĩnh mà
chúng di chuyển qua, như
chúng di chuyển qua, như
giấy
giấy
,
,
gelatin

- Sắc kí lỏng hiệu năng cao
- Sắc kí lỏng hiệu năng cao
- Sắc kí thẩm thấu gel
- Sắc kí thẩm thấu gel

II. TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG
II. TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG
II.1. Sắc kí lớp mỏng
II.1. Sắc kí lớp mỏng
- Sắc kí lớp mỏng (thin layer chromatography -
- Sắc kí lớp mỏng (thin layer chromatography -
TLC) là một kĩ thuật
TLC) là một kĩ thuật
sắc
sắckí
kí
được dùng để tách
được dùng để tách
các chất trong hỗn hợp. Phương pháp sắc kí
các chất trong hỗn hợp. Phương pháp sắc kí
lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng
lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng
các
các
chất
chất


lên bản sắc kí bởi
mao
maodẫn
dẫn
, tách dung dịch thí
, tách dung dịch thí
nghiệm dựa trên tính
nghiệm dựa trên tính
phân
phâncực
cực
của các thành
của các thành
phần trong dung dịch.
phần trong dung dịch.
- Sắc kí lớp mỏng được sử dụng rộng rãi trong
- Sắc kí lớp mỏng được sử dụng rộng rãi trong
nhiều lĩnh vực: xét nghiệm độ tinh khiết của
nhiều lĩnh vực: xét nghiệm độ tinh khiết của
các hóa chất phóng xạ trong dược khoa
các hóa chất phóng xạ trong dược khoa

- Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật
- Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật

mỏng
mỏnghiệu
hiệunăng
năngcao
cao
(high
(high
performance TLC - HPTLC).
performance TLC - HPTLC).

II.2 Chuẩn bị bản sắc kí
II.2 Chuẩn bị bản sắc kí
- Bản sắc kí được làm bằng cách trộn chất
- Bản sắc kí được làm bằng cách trộn chất
hấp phụ, như
hấp phụ, như
silica gel
silica gel
, với một lượng
, với một lượng
nhỏ chất trơ để kết dính, như

họcphân
phântích
tích
, và khoảng 1-2mm cho sắc kí
, và khoảng 1-2mm cho sắc kí
lớp mỏng dự bị. Trong mọi kĩ thuật sắc
lớp mỏng dự bị. Trong mọi kĩ thuật sắc
kí đều bao gồm 1 pha động và 1 pha
kí đều bao gồm 1 pha động và 1 pha
tĩnh.
tĩnh.III.3 Kĩ thuật
III.3 Kĩ thuật
-
-
Sắc
Sắcphổ
phổ
của 10

giữa các "pha tĩnh" khác nhau. Bởi tính
đơn giản và nhanh, sắc kí lớp mỏng
đơn giản và nhanh, sắc kí lớp mỏng
thường được dùng để giám sát các
thường được dùng để giám sát các
phản
phảnứng
ứnghóa
hóahọc
học
và phân tích chất
và phân tích chất
lượng sản phẩm của phản ứng.
lượng sản phẩm của phản ứng.

- Một vệt nhỏ dung dịch chứa mẫu thử
- Một vệt nhỏ dung dịch chứa mẫu thử
được thấm lên bản sắc kí, khoảng 1 cm
được thấm lên bản sắc kí, khoảng 1 cm
từ dưới lên. Bản sắc kí sau đó được
từ dưới lên. Bản sắc kí sau đó được

mẫu thử lên bản sắc kí. Các
mẫu thử lên bản sắc kí. Các
hợp
hợpchất
chấtkhác nhau trong hỗn hợp mẫu thử dịch
khác nhau trong hỗn hợp mẫu thử dịch
chuyển với tốc độ khác nhau do chúng
chuyển với tốc độ khác nhau do chúng
có sức hút khác nhau đối với pha tĩnh,
có sức hút khác nhau đối với pha tĩnh,
và độ tan khác nhau trong dung môi.
và độ tan khác nhau trong dung môi.

- Các hợp chất được tách ra dựa trên sự
- Các hợp chất được tách ra dựa trên sự
cạnh tranh của chất tan và pha động
cạnh tranh của chất tan và pha động
để có được chỗ liên kết với pha tĩnh.
để có được chỗ liên kết với pha tĩnh.
Thí dụ, nếu silica gel được dùng như
Thí dụ, nếu silica gel được dùng như
pha tĩnh, nó được xem là phân cực.
pha tĩnh, nó được xem là phân cực.
Cho trước 2 hợp chất có tính phân cực


- Trên thực tế, nếu chúng ta dùng một hỗn
- Trên thực tế, nếu chúng ta dùng một hỗn
hợp
hợp
ethyl acetate
ethyl acetate
và
và
heptane
heptane
như là pha
như là pha
động, tăng thêm ethyl acetate sẽ cho hệ
động, tăng thêm ethyl acetate sẽ cho hệ
số lưu Rf cao hơn cho tất cả các hợp chất
số lưu Rf cao hơn cho tất cả các hợp chất
trên bản sắc kí. Thay đổi độ phân cực của
trên bản sắc kí. Thay đổi độ phân cực của
pha động sẽ không làm các hợp chất có
pha động sẽ không làm các hợp chất có
thứ tự di chuyển ngược lại trên bản sắc
thứ tự di chuyển ngược lại trên bản sắc
kí. Nếu muốn có một thứ tự ngược lại trên
kí. Nếu muốn có một thứ tự ngược lại trên
bản sắc kí, một pha tĩnh không phân cực
bản sắc kí, một pha tĩnh không phân cực
sẽ được sử dụng, như là C18-chức năng
sẽ được sử dụng, như là C18-chức năng
hóa silica.

dẫn
, và các vệt khác nhau có thể
, và các vệt khác nhau có thể
trộn lẫn vào nhau. Do đó, để hạn chế
trộn lẫn vào nhau. Do đó, để hạn chế
sự lan tròn của các vệt mẫu, dung môi
sự lan tròn của các vệt mẫu, dung môi
được sử dụng để hòa tan mẫu thử phải
được sử dụng để hòa tan mẫu thử phải
không phân cực, hoặc phân cực một
không phân cực, hoặc phân cực một
phần, nếu pha tĩnh phân cực, và ngược
phần, nếu pha tĩnh phân cực, và ngược
lại.
lại.

II.4 Phân tích
II.4 Phân tích
- Do một số hóa chất khi được tách ra sẽ
- Do một số hóa chất khi được tách ra sẽ
trở nên không màu, một vài phương
trở nên không màu, một vài phương
pháp được sử dụng để quan sát những
pháp được sử dụng để quan sát những
vệt này:
vệt này:
- Thông thường, một lượng nhỏ chất
- Thông thường, một lượng nhỏ chất
huỳnh
huỳnh
(tia cực tím UV254). Lớp hấp phụ vì thế
(tia cực tím UV254). Lớp hấp phụ vì thế
sẽ tự phát ra ánh sáng lục, nhưng các
sẽ tự phát ra ánh sáng lục, nhưng các
vệt mẫu sẽ làm tắt ánh sáng này.
vệt mẫu sẽ làm tắt ánh sáng này.
- Hơi
- Hơi
Iodine
Iodine
cũng là một loại thuốc thử
cũng là một loại thuốc thử
cho màu giống nhau.
cho màu giống nhau.
- Một số thuốc thử cho màu riêng biệt
- Một số thuốc thử cho màu riêng biệt
được dùng để nhúng bản sắc kí vào,
được dùng để nhúng bản sắc kí vào,
hoặc phun lên bản sắc kí.
hoặc phun lên bản sắc kí.

- Trong trường hợp của
- Trong trường hợp của
chất
chấtbéo

.
- Một khi đã trở nên quan sát được, hệ số
- Một khi đã trở nên quan sát được, hệ số
lưu Rf của mỗi vệt mẫu sẽ được xác
lưu Rf của mỗi vệt mẫu sẽ được xác
định bằng cách chia khoảng cách di
định bằng cách chia khoảng cách di
chuyển được của hợp chất cho khoảng
chuyển được của hợp chất cho khoảng
cách di chuyển được của dung môi.
cách di chuyển được của dung môi.
Những số liệu này phụ thuộc vào các
Những số liệu này phụ thuộc vào các
loại dung môi được sử dụng và các loại
loại dung môi được sử dụng và các loại
bản sắc kí, và không phải là hằng số.
bản sắc kí, và không phải là hằng số.

II.4 Ứng dụng
II.4 Ứng dụng
- Trong
- Trong
hóa
hóahọc
học
chất. Một bản sắc kí nhỏ (3 cm x 7 cm)
chất. Một bản sắc kí nhỏ (3 cm x 7 cm)
sẽ mất khoảng khoảng hai, ba phút để
sẽ mất khoảng khoảng hai, ba phút để
vận hành. Quá trình này phân tích chất
vận hành. Quá trình này phân tích chất
lượng và sẽ chỉ ra nếu chất ban đầu
lượng và sẽ chỉ ra nếu chất ban đầu
biến mất, sản phẩm được tạo thành, và
biến mất, sản phẩm được tạo thành, và
bao nhiêu sản phẩm được tạo thành.
bao nhiêu sản phẩm được tạo thành.
Đáng tiếc rằng sắc kí lớp mỏng đối với
Đáng tiếc rằng sắc kí lớp mỏng đối với
các phản ứng xảy ra ở nhiệt độ thấp có
các phản ứng xảy ra ở nhiệt độ thấp có
thể cho ra kết quả không đúng, bởi vì
thể cho ra kết quả không đúng, bởi vì
các mẫu thử sẽ được làm ấm lên trong
các mẫu thử sẽ được làm ấm lên trong
mao dẫn.
mao dẫn.

Một trong những phản ứng như vậy là
Một trong những phản ứng như vậy là
phản ứng khử ester bởi DIBALH thành
phản ứng khử ester bởi DIBALH thành
aldehyde.
aldehyde.
- Một ví dụ là sắc kí được áp dụng cho

và
lutein
lutein
là hợp chất đầu tiên nhuộm
là hợp chất đầu tiên nhuộm
màu vàng lên bản sắc kí.
màu vàng lên bản sắc kí.

Bước 1
Bước 1

Bước 2
Bước 2

Bước 3
Bước 3

Bước 4
Bước 4

Bước 5
Bước 5