M U 1
CHNG 1- TNG QUAN 3
1.1. GII THIU CHUNG V VIRUS H 3
1.2. BDV 5
1.2.1. B 5
ng Nam 11
N GEN P10 15
N SRBSDV 17
1. NG DNG THC TIN 18
1.5.1. Gii thiu chung v 18
1.5.2. Mt s ng dng ch 21
CHNG 2- VT LI 24
2.1. VT LIT 24
2.1.1. Vt lim 24
t 24
2.1.3. Thit b 25
2.2. PHU 25
c hiu bng k thut PCR 25
n gel agarose 26
i DNA bng enzyme DNA ligase 26
2.2.4. Bin np vi khun E. coli 27
t DNA plasmid t t n 27
2.2.6. Tinh sch DNA t gel agarose 28
2.n phm PCR 29
2.2.8. Phn ng ct DNA bng enzyme ct gii hn 29
2.2.9. Gi n DNA 30
a SDS 31
y E. coli n b dch chit t 32
2.2.12. Tinh s hp qua ct Ni
2+
i li cc ti PGS.TS. Phi
TS. Phan Tu nhi th bng dn,
c t
, anh ch em trong B nh
hc P Thc vt, Vin Di truyng d
t nhiu trong thi gian i B
i li c c Khoa Sinh hc,
i hc Khoa hc T nc bi
c vng kin th
thi gian hc tp tng.
Cu i li cng
u kin tt nh lun
03
H
Bng 8n phn ng ct gii hn pGEMT/P10 28a
Bng 9n phn ng ct gii hn pET28a/P10
Bng 10u kin cm ng biu hi hp
Bng 11: Kt qu
492
th c hiu c bng phn ng ELISA
Bng 12: Kt qu
492
ca phn u ry.
Triu chng c nhim b
Rng Sogatella furcifera truyn SRBSDV
BamHI/XhoI
2 vector pET28
P10
13: Bin n h
P10 E. coli DH5
14: in di sn phm PCR t n lc vi cp mi T7-Fw/T7-Rv
15: in di sn phm PCR kim tra plasmid pET28a/P10
16: in di sn phm ct gii h hp pET28a/P10
17: Bin np vector pET28a/P10 n E. coli Rossetta
18n di SDS-PAGE kim tra s t ca protein P10 hp trong
u kin chun
: Kim tra s t ca protein P10 hu ki
v nhi i gian
20: in di sn phm sau tinh sch dch chit t
21: King min dch ct thanh bng thn dch
kDa Kilodalton
LB ng Luria Bertani
ORF c m (open reading frame)
PCR Phn ng chui polymerase (polymerase chain reaction)
SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide
SRBSDV
strike
dwarf virus)
TAE Tris base Acetic - EDTA
TBE Tris base Axit Boric EDTA
TEMED N,N,N'N'-Tetramethyl-Ethylenediamine 1
(Oryza sativa L.) c i nh
cc quan trng cung cp nguc cho khong th gii. c
ta c ch lc n vi p
ca khong 80% s h . Trong nhng
i mt vi nhic, nh
hc bidch bnh x n sn
xuo. m v u, Vi ng di
chuyn ca nhiu lon dch; dnh virus
P10
,
c hi
do vi thuc
n bin ph i c
b c tt.
Trong sn xup khoi cho thc
v khong 16 loi virus
ph lc 1). Trong s , Rice hoja blanca virus
(m ti Nam M), Rice giallume virus (m
b t Rice stripe necrosis virus (m t
n thy tc tr, ch
i nghim tr binh
), bnh Tungro, bm thi
[7, 11-13, 16].
Ngh tr Vii mt vt dch bnh
virus din bin rt phc tp. Trong khi d
n mit nh min B
phi mt vi dch SRBSDVy, ng u bnh virus h
n hin nay cn ph kt hi
i ng t o sn xu
hinh t hiu qu.
nh bn cht h gen, mc
ng di truy t bi
chng
mn t hiu qu nh d
4
ngh u v virus Vit Nam hin mi tp trung n
b nh, dii truyn
spherical virus-RTSV), tungro (Rice tungro bacilliform virus RTBV), b
5
(Rice dwarf virus- Rice gall dwarf virus-RGDV) vi s
cho hu n b u virus
h Vit Nam trong th
c vi din bin phc tp ca dch virus hic biSRBSDV
vu v virus hn pht c, t
gii quyt tn g
u v bn ch, din bi
d thu u hin gen, bt hot bin.
1.2. B SRBSDV
1.2.1. B
1.2.1.1. Tình hình bệnh trên thế giới
B (Rice black streaked dwarf
virus-RBSDV) n l Nht B
[27]. RBSDV c ghi nhch c Nht Bn, Trung
Qut dch b Nht bc ghi nh
nh 1961, r 1967. Trung
Quc dch bnh
i mch. T l bnh RBSDV 1976 [22].
n ca bnh k ng ch
xut hin cc b i t l nhim thp c c. Tt khu vc
b bRBSDV
t s c Nht Bn,
virus ch i t mt
c ca Tohoku, RBSDV i c i
t l nhim thp [18].
Ti Nht Bn, u n i quan h cht ch gia
5.506 ha,
gn 3.510 ha b mt trng.
.
(TH3-3, Nh
Bio 404, B ) (
p Vit Nam (NNVN), 7/9/2009).
9,
li
, n NN &PTNT
(IRRI)
.
.
8/9/2009 B NN&
31 (: 31/-BNN-
BVTV)
.
, 23/9/2009,
&
,
p
2 virus
(24/9/09).
10 2009,
+ Bc B: 20 tc Giang, Bc Kn, Bi
nh, Ninh
, Qung Ninh, ,
+ Bc Trung B: 5 t An, Qung Tr, Qu
Th).
8
+
: 3 tnh (Qung Nam, Qu
Trong v a Cc Bo v thc vt
nh vi ti 28 tng di
nhi u v i nh t
ph ha. t hin bm:
+ Bc B (19 tnh): Bc K
La, Bc Giang, H c Ninh, Hi
nh, Qu
+ Bc Trung B (6 tnh): Ngh An, Th, Qung
Tr
i Nam Trung B (3 tnh): Qung Nam, Qung.
T 2013, bnh d u hiu tm lng, ch t hin
cc b mt s tha ruch v
tim a sng thu hoo cnh
min Bn Trung.
1.2.1.3. Đặc điểm triệu chứng bệnh lúa lùn sọc đen
Biu hin bnh cm SRBSDV rt ging vi biu hin ca bnh
u chng cm bnh bao g
(Laodelphax striatellus).
(100 %
3 - 4 /). ,
.
bnh tn t rng sng qua
c di chuyn r t s
c v tip theo.
1.2.2. Virus
1.2.2.1. Tình hình nghiên cứu virus gây bệnh lúa LSĐ ở Việt Nam
bit ln nht gic vc v
SRBSDV
. Thc t u h gen ca
ta hin nay ch dng li vic d bo th ca SRBSDV Trung Quc
thit k p mi nhn bo th khong 1 kb r
u gi h gen, v ng di truy
ng mi; u t chn
o ging chng bnh virus b
cu v SRBSDV ci
hn Bo v thc v
trng v
ii h
Ni)
-
, ,
):
12
+
RRSV.
+
. .
,
,
.
(Reoviridae) .
2
.
,
tra RT-
,
,
.
h
4
u hin vi
n t n th
bnh.
S3 ca h u Vin Bo v thc v
u lan truyn thc hin ti Vin Bo v thc v
i truyn bng giu c
Trung Quc.
D NN & PTNT thng nht gi lnh ti
Vi
(SRBSDV).
1.2.2.2. Đặc điểm sinh học của SRBSDV
T t bt hiO. sativa) ti mt
s c tnh Qum
bnh thm, mt hit sn nh.
nh ch t bin chng ca RBSDV. Gn
t qu u v i truyn bnh, cn cht
h c Trung Qut lu
mt chng virus mi vi SRBSDV. Kt lu khoa
h
+ Virus mi truyn bng mc
m quan trFijivirus.
+ H u th i
n t.
+ T gen ca hai bin chng (Qu
m cho th
axit amin ca hai bin ch n so vi
s n chng cFijivirus
nm trong khong vi nhau. Mng
i gi Rice black streaked dwarf virus (RBSDV), Maize
(100%
3 4 /). ,
(Isoelectrics point) u a m
t axit amin 608 ng 22 25% vi
a mt
) trng
24 kDa ch
n t ln nht v nucleotide so v
trong p Fijivirus- ng so v
ng so vu
a mu
1.044
630
ng
a m 1.674
80%
Fijivirus 2 [29].
cha m1.674 nucleotide, cho 557 axit amin,
84,3% 83,5%
8 do
Fijivirus
ddii xng icosahedral [37]. ~ 70 nm,
mt v n gnh c
T=13 [7, 38].
3:
v
=13 ca chi Fijivirus [38]
Protein P10
,
,
, trong khi
P10 t
[30].
4 : Tinh th
.
,
(RT-
).
(08)
m a, theo