TIỂU LUẬN

CHẨN ĐOÁN PHÂN BIỆT CÁC TYPE VIRUS CÙNG
HỌ VỚI VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN
Gen này có 5'-end mang một cặp nucleotide methyl hóa hoặc gene-protein được liên kết. Nó
cũng có một cái đuôi polyadenyl cuối 3', polyprotein từ gen RNA tách ra thành 3 protein có cấu
trúc và một số protein không cấu trúc. Bộ gen phải trải qua quá trình nhân bản tế bào chất.
Cấu trúc virions của Flaviviridae:
Các virions của Flaviviridae là hình cầu, đa hình và được bao bọc. Các hạt virions có đường kính
từ 40nm đến 50nm . Vỏ bọc là một nucleosapsid hiện diện trong virions của Flaviviridae. Vỏ
capsid được cấu tạo từ polymer glycoprotein. Bề mặt của vỏ capsid được tạo thành từ các gai
nhỏ bao quanh bởi viền nhấp nhô. Vỏ capsid là môt khối đa diện đối xứng có chứa một lõi
protein bên trong, lõi này có đường kính từ 20nm đến 30nm và chúng cùng kích cỡ.
2. Các virus thuộc họ Flaviviridae
• Flavivirus: Dengue fever virus

Figure 1 “Structure of Dengue Virus”
Figure 2 “Arrangement Dengue (Flavivirus) Viral Genome sequence and gene products” (Rice, 1996)
giống như tất cả flavivirus, dengue fever virus( DFV) có cấu trúc là sợi RNA đơn dương ,lớp vỏ
là một phức hệ của 3 cấu trúc protein: protein lõi(C),protein màng tế bào(M) và protein vỏ(E).
Cấu trúc protein virus bộ gen của dengue virus tồn tại như một RNA đa gen , dịch mã tạo ra 10
protein hoạt động. Khoảng ¼ của bộ gen mã hóa cho protein có cấu trúc, trong khi phần còn lại
mã hóa cho protein ko cấu trúc.
Protein c: 11 kD. Protein này đóng vai trò rắp láp virion. Nó chứa một vùng C-terminal tác động
như một chuỗi tín hiệu cho sự chuyển đoạn của protein M vào khoang của ER

rotein cấu trúc của HCV bao gồm protein lõi và các glycoprotein xuyên màng, E1 và E2. Vùng
lõi cũng mã hóa cho protein F với chức năng chưa được rõ. Vùng nằm giữa các gen cấu trúc và
vùng không mã hóa cho protein cấu trúc thì mã hóa cho protein kênh màng cation p7, quan
trọng cho sự sinh sản của virus. Ngoài ra, HCV có 6 protein khác không phải là protein cấu trúc
(NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A và NS5B). NS2 là một cystein protease. NS3 là một protein đa
chức năng (serine protease và RNA helicase). NS4A là một đồng yếu tố (cofactor) quan trong
cho NS3 protease. Hiện nay có rất ít thông tin về chức năng của protein NS4B ngoài việc chúng
tham gia vào sự hình thành mạng lưới màng nơi mà RNA của HCV tiến hành sao chép. NS5A
là một phosphoprotein tham gia vào việc hình thành hạt virus và kháng lại các interferon.
N
S5B mã hóa cho RNA polymerase phụ thuộc vào RNA (RdRp).
nhóm nghiên cứu của Maarit Sillanpää đã xác định được các kháng nguyên chính của HCV
gồm protein lõi, protein NS4B, NS3, NS5A. Để có được kết quả này, nhóm đã tổng hợp 3
p
rotein cấu trúc (protein lõi, E1 và E2) và 6 protein NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A và NS5B
trong tế bào côn trùng Sf9 bằng hệ thống biểu hiện baculovirus. Các protein này đã được tinh
sạch và xác định khả năng nhận biết của 68 mẫu huyết thanh bệnh nhân có chứa kháng thể
chống lại HCV. Pestivirus: bovine viral diarrhoea virus (BVDV) Cấu trúc gen BVDV
Pestivirus có hệ gen RNA đơn dương bao bọc bởi 1 capsid bao gồm protein capsid. Vỏ capsid bao gồm
các glycoprotein E1 E2. Bộ gen RNA xấp xỉ 12300 nucleotit và chứa 1 khung đọc mở mã hóa 1
polyprotein khoảng 4000 aminoacid. Khung đọc mở ở hai đầu 5’ và 3’. Nhửng khu vực này chứa các

mạc ruột lầy nhầy.
Bê non thường bị chết sau 3-4 ngày với tỷ lệ cao 30-40% số vật bệnh nếu không điều trị
kịp thời
Sử dụng kỹ thuật RT-PCR chẩn đoán phân biệt:
Chẩn đoán phân biệt các chủng virus trên bằng phương pháp RT-PCR
Mỗi loại vi sinh vật đều có trình tự bộ gen khác nhau. Mặc dù cả 3 type virus trên đều
cùng thuộc một họ nên có cấu trúc phân tử khá giống nhau tuy nhiên chúng vẫn khác
nhau về trình tự gene. Nhờ kỹ thuật giải trình tự gene chúng ta có thể biết được các trình
tự gen khác nhau giữa các type virus , từ đó xây dưng nên các đoạn mồi đặc hiệu cho
từng type virus. Vì vậy để chẩn đoán phân biệt 3 chủng virus trên người ta sử dụng
phương pháp RT-PCR sử dụng 3 cặp mồi khác nhau tương ứng với mỗi loại virus.
• Đối với Hepatitis C virus : Phản ứng RT-PCR được sử dụng là phản ứng một bước sử
dụng cặp mồi do tác giả Caudai đã công bố
. Mồi xuôi (CC1F): 5’-CAGAAAGCGTCTAGCCATGG-3’, bao gồm 20 nucleotid, vị trí 69-
88 ở phần đầu của hệ gen HCV.
. Mồi ngược (CC2R): 5’-GAGGTTTAGGATTCGTGCTC-3’, bao gồm 20 nucleotid,
vị trí 363-344 ở phần đầu của hệ gen
HCV

Kết quả xét nghiệm RT-PCR phát hiện HCV-RNA được thực hiện với
NK
HCV-RTPCR
kit

• Đối với dengue fever virus: Được khuếch đại với một cặp mồi cụ thể cho các khu vực
NS5, cFD2 là (GTGTCCCAGCCGGCGGTGTCATCAGC) và MA
(CATGATGGGRAARAGRGARRAG)